N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)试剂盒使用说明书

1、N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)试剂盒使用说明书(酶法·液体双试剂)用 途本试剂盒用以测定尿液中N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)的活力。原 理在第一反应中用己糖激酶(HK)消去血清中内源性葡萄糖的影响，在第二反应中，NAG作用于基质P-硝基苯酚-N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷(PNP-NAG)，生成N-乙酰氨基葡萄糖，此N-乙酰氨基葡萄糖在N-乙酰氨基葡萄糖氧化酶(NAGOD)的作用下生成H2O2。此H2O2在过氧化物酶(POD)的作用下与高灵敏的发色剂双3-双(4-氯酚)甲基-4-二甲氨苯基胺(BCMA)反应，生成绿色色素。通过测定此色素可求得NAG的活力。第一反应： HK

2、 葡萄糖 + ATP 葡萄糖-6-磷酸 + ADP第二反应： NAG PNP-NAG + H2O N-乙酰氨基葡萄糖 + p-硝基苯酚 NAGOD N-乙酰氨基葡萄糖 + O2 + H2O N-乙酰氨基葡萄糖酸 + H2O2 PODH2O2 + BCMA + H+ 绿色色素 + 2H2O试 剂 试 剂 成 份 含 量 R-1A1(冻干) NAGOD 3000U/L POD 12500U/L HK 8000U/L ATP·2Na 5mg/ml R-1A2(冻干) PNP-NAG R-1B 2-吗啉乙烷磺酸(MES) 30mmol/L R-2A(冻干) BCMA R-2B MES 30m

3、mol/L 标准酶 NAG 约为50U/L标准酶溶解液 MES 30mmol/L标 本尿液试剂配制R-1：以一瓶R-1B溶解一瓶R-1A2，再以此溶液溶解一瓶R-1A1。溶解后，低温避光保存(2-8)可稳定二周。R-2：以一瓶R-2B溶解一瓶R-2A。溶解后，低温避光保存(2-8)可稳定二周。标准酶溶液：吸取5.00ml标准酶溶解液溶解一瓶标准酶。测定方法分析方法：速率A；主波长：750nm；副波长：600nm（可不用）；样品量：4.0ul；R-1：240ul，R-2：120ul；校准方式：线性；反应方向：上升；测定温度：37。样品与R-1混匀后反应5分钟，加入R-2混合后延迟157秒，测定1

4、25秒。样品 4.0ul 主波长750nm R-1 240ul R-2 120ul 副波长600nm 测光 测光 0 5 7 10min计 算 As/minNAG(U/L) = ×标准酶标示值 Astd/minAs/min = 测定管的吸光度变化量Astd/min = 标准管的吸光度变化量计算实例采用日立7020型自动分析仪测得测定管的A/min为，标准管的A/min（标准酶的含量为51.7 U/L）为0.153, 则 NAG(U/L) = × 参考范围尿液：1.1-11.9 U/L建议各实验室建立自己的正常值参考范围注意事项1. 正常浓度的胆红素、抗坏血酸等还原物质对测定

5、无影响。异常高浓度时会导致负的误差。2. 高浓度的尿糖会导致正的误差。尿糖异常高值时请将样品稀释至尿糖7g/dl后测定。3. 备有各种自动分析仪的参数可供参考。试剂性能1. 灵敏度：以纯水为样品测定时的吸光度为0.000-0.050；以50 U/L的标准酶溶液为样品测定时，吸光度为0.140-0.160。2. 线性范围：0-125 U/L。3. 精密度：n=5，CV< 5。 4. 准确性：测定定值质量控制物时，测得值在定值±2SD的范围以内。 相关：r=0.999, y=1.231x+0.411 (y：本法，x：CPR-NAG法)。储存及稳定性本试剂盒在2-8避光保存可稳定一年

6、；试剂R-1、R-2配制后在2-8避光保存可稳定二周。临床意义NAG是肾小管损伤的标记物，尿NAG活性升高是肾脏损害的较敏感指标。NAG活性可用于肾小管间质性肾炎、尿路感染、糖尿病肾病综合症、高血压肾病、肾移植后的排异反应和肾病综合症的早期诊断。上述疾病时NAG活性的升高均早于其他相应指标，有利于疾病的早期发现和及时治疗。NAG活性还可用于重金属等肾毒性物质环境污染的人群筛查、职业病调查等。上海申索佑福医学诊断用品有限公司上海市可乐路168号，200335电话（Tel）:62380893传真（Fax）: 2004年1月N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)试剂盒常用

7、的自动分析仪主要参数日立7170型Test NameNAGUnitU/LNormal RangeAssay CodeRate A，10,27,34Wave Length600/750Sample VolumeR1 Volume240R3 Volume120Abs Limit25000,INCStandardConcentrationPosition10992标示值*Calibrate MethodL2,2,0AU600型项目名NAG单位U/L样品种类尿液样品量4.0R1用量240R3用量120波长750（主）/600（副）分析方法Rate反应方向+测光点1S1 20, E1 27正常值范围线性

8、形式AB近似式Y=AX+B标准位置*标准含量标示值日立7060/7070型Test NameNAGUnitU/LNormal RangeStandardConcentrationPosition109992标示值*Assay CodeRate A，10Wave Length600/750 Assay Point24，30Sample Volume4.0Abs Limit25000，INCR1 Volume240R3 Volume120Cal MethodL,2,2,0Beckman CX4/CX5/CX7Test Name NAGCalculate Factor0Math ModelLinearNo. of Calibrators1Reaction TypeRate 1Reaction DirectionIncreasingUnitsU/LDecimal PrecisionPrimary Wavelength700Secondary Wavelength600Sample VolumePrimary Inject Rgt A(ul)150S