紫外分光光度计

1、紫外紫外-可见吸收光谱法可见吸收光谱法紫外紫外- -可见吸收光谱法可见吸收光谱法及其应用及其应用生物制药12（1）班紫外吸收光谱和可见吸收光谱都属于分子光谱，它们都是由于价电子的跃迁而产生的。利用物质的分子或离子对紫外和可见光的吸收所产生的紫外可见光谱及吸收程度可以对物质的组成、含量和结构进行分析、测定、推断。在有机化合物分子中有形成单键的电子、有形成双键的电子、有未成键的孤对n电子。当分子吸收一定能量的辐射能时，这些电子就会跃迁到较高的能级，此时电子所占的轨道称为反键轨道，而这种电子跃迁同内部的结构有密切的关系。在紫外吸收光谱中，电子的跃迁有*、n*、和n*四种类型，各种跃迁类型所需要的能量

2、依下列次序减小：*;n*;*&n*紫外吸收光谱形成原理紫外吸收光谱形成原理提供激发能,使待测分子产生吸收要求能够提供足够强的连续光谱、有良好的稳定性、较长的使用寿命,且辐射能量随波长无明显变化常用的光源有钨灯和氘灯光源单色器使光源发出的光变成所需要的单色光通常由入射狭缝、准直镜、色散元件、物镜和出射狭缝构成 吸收池检测器记录仪特点 用于盛放试液 石英池用于 紫外-可见区的测量 玻璃池只用于可见区记录及处理数据使用两只光电管一是氧化铯光电管（6251000）二是锑铯光电管（200625）在紫外可见区的灵敏度高，响应快。但强光照射会引起不可逆损害，因此高能量检测不宜，需避光紫外可见分光光度

3、计的基本结构紫外紫外- -可见分光光度计可见分光光度计的基本构造的基本构造 影响紫外光谱因素共轭效应的影响电子共轭体系增大，电子离域到多个原子之间，导致 *能量降低。 max红移， maxmax增大 取代基越大,分子共平面性越差，空间阻碍使共轭体系破坏， max 蓝移， maxmax减小。助色基团取代助色基团取代 p p p p* * （K带带)发生红移发生红移取代基 -SR -NR2 -OR -Cl CH3 红移距离 45(nm) 40(nm) 30(nm) 5(nm) 5(nm) 2022年6月14日22时13分取代基的影响 给电子基带有未共用电子对的原子的基团。如-NH2, -OH等。未

4、共用电子对的流动性很大，能够和共轭体系中的电子相互作用引起永久性的电荷转移，形成p- 共轭，降低了能量， max红移。 共轭体系中引入吸电子基团，也产生电子的永久性转移， max红移。 电子流动性增加，吸收光子的吸收分数增加，吸收强度增加。给电子基 与吸电子基同时存在时，产生分子内电荷转移吸收， max红移， max max 增加2022年6月14日22时13分溶剂的影响1：乙醚乙醚2：水水12250300苯酰丙酮苯酰丙酮 非极性非极性 极性极性n p p*跃迁：跃迁：兰移；兰移； ； p p p p*跃迁：红移；跃迁：红移； ；极性溶剂使精细结构消失；极性溶剂使精细结构消失；紫外紫外- -可

5、见分光光度法的应用范围可见分光光度法的应用范围 UV的测定范围有机化学分析无机化学分析光学测定生物化学分析环境分析色彩測定临床分析有机化学分析无机化学分析光学测定生物化学分析环境分析色彩測定临床分析紫外紫外- -可见分光光度法的应用范围可见分光光度法的应用范围 紫外紫外- -可见分光光度法可见分光光度法的应用的应用- -定性分析定性分析 不同结构的物质吸收光谱也不同，这是对物质进行定性不同结构的物质吸收光谱也不同，这是对物质进行定性分析的基础：通过检测吸收光谱来比对鉴定分析物质。分析的基础：通过检测吸收光谱来比对鉴定分析物质。 波长范围波长范围 吸光度吸光度利用标准物质定性分析利用标准物质定性

6、分析 在相同条件下，测定未知物在相同条件下，测定未知物的吸收光谱，与标准物的吸收光的吸收光谱，与标准物的吸收光谱进行比较，如果两吸收光谱的谱进行比较，如果两吸收光谱的形状和吸收峰的数目、位置、拐形状和吸收峰的数目、位置、拐点等完全一致，就可初步判定未点等完全一致，就可初步判定未知物与标准物是同一种物质。知物与标准物是同一种物质。在进行定性鉴定时，需要注意：1.测试溶剂：应当对标准物和待测物有良好的溶解度，本身在测定的波长内无光的吸收，有良好的稳定性。2.测试的条件：标准物和待测物测试条件要完全相同，如溶剂、PH、离子强度、温度及所用仪器等。3.更改测试条件：为了防止测试数据的假象，要对现有某些

7、条件进行适当的变换，改变其中的某些测定条件，然后看标准物和待测物的吸收光谱是否仍然完全相同。紫外紫外- -可见分光光度法可见分光光度法的应用的应用- -定量分析定量分析 入射光入射光 I0透射光透射光 ItLC紫外紫外- -可见分光光度法可见分光光度法的应用的应用- -定量分析定量分析 波长范围波长范围 吸光度吸光度最大吸收波长最大吸收波长 利用标准曲线法定量分析利用标准曲线法定量分析 在一定波长（在一定波长（maxmax）下测定某物质的标准系列溶液）下测定某物质的标准系列溶液的吸光度作标准曲线，然后测定样品溶液的吸光度值，由的吸光度作标准曲线，然后测定样品溶液的吸光度值，由标准曲线求得样品溶

8、液的浓度或含量。标准曲线求得样品溶液的浓度或含量。 0 1.0 2.0 3.0 4.0 c(mg/mL)。 。 。 。0.800.600.400.200.00Axcx1.单组分物质的定量分析（1）比较法：在相同的条件下配制样品溶液和标准溶液（与待测组分的浓度近似），在相同的实验条件和最大波长处分别测得吸光度Ax和As，然后进行比较，求得样品溶液中待测组分的浓度，Cx= Cs(Ax/As)。（2）标准曲线法：首先配制一系列已知浓度的标准溶液，在最大吸收波长处分别测得标准溶液的吸光度，然后，做A-c的校正曲线（理想的曲线应为经过原点的直线）。在完全相同的条件下测出试液的吸光度，并从曲线上求得相应的

9、试液的浓度。 2.多组分物质的定量分析 根据吸光度加和性原理，对于两种或两种以上吸光组分的混合物的定量分析，可不需要分离而直接测得。 A XY 1 2根据加合性原则，解联立方程法yxAAA111A XY 1 2yyxxbckbck11yxAAA222yyxxbckbck22k 为物质的特征参数，可通过配制标准溶液测得。解联立方程，可求得Cx , CyACs(x)xk1xk22.多组分物质的定量分析 实践实践& &应用应用Practice and Application化合物在紫外区没化合物在紫外区没有吸收峰，但杂质有吸收峰，但杂质有较强的吸收，就有较强的吸收，就可以方便检出该化

10、可以方便检出该化合物中痕量杂质合物中痕量杂质1.痕量杂质的检出水、土壤、空气、植物、粮食中污染物的鉴定和定量 分析。如农药残留、土壤中污染物的分析测定等。2.污染物的成分及含量的测定动、植物脂肪酸的分析，蛋白质、氨基酸、核酸的测定等。3.动、植物生物成分的分析如图为苯在乙醇中的紫外光谱吸收带。苯在=180和204nm处有2个强吸收带E1，E2，在230-270有较弱的一系列吸收带，称为B吸收带。要鉴定甲醇或乙醇中的杂质苯，可利用苯在256nm处的B吸收带，而甲醇或乙醇在此波长几乎没有吸收。当今社会石油工业迅速发展，全球每年进入环境的石油污染物约有近800万吨，对生态环境和社会环境造成危害。在出

11、油率较低的石油中，可用紫外分光法测定，相对偏差较小，有更好的重现性，结果较稳定。可作为快速分析土壤中石油污染物的方法。紫外荧光定硫仪用于石油产品的检测。2022年6月14日22时13分旋光异构：两个或多个分子由于构型上的差异而表现出不同旋光性能的现象。这些分子互为旋光异构体，也称对映异构体。下图为：乳酸的两种旋光异构体。2022年6月14日22时13分从1962年5月1963年3月，仅仅10个月中，西德就有5 500名“海豹儿”出生，还有相当多孕妇出现流产、早产和死产。造成婴儿海豹肢畸形的“罪魁祸首”，是妇女怀孕初期服用“反应停”化学药名为“酞胺哌啶酮”所致。1953年在德国首先被合成出来，作

12、为镇静剂用于临床，并且多用于孕妇的妊娠早期止吐。然而当时欧洲药学家对酞胺哌啶酮的这个旋光异构无知，右旋体可以减轻孕妇的呕吐反应，而左旋体则不仅没有药用活性，还会导致胎儿在发育时畸形。利用紫外可见法，对药品中的异构体进行深入研究。有益于保障人类的健康。最新技术最新技术 1.1.“褶合光谱褶合光谱” 法法 “褶合光谱”法是我国第二军医大学的吴玉田教授发明的。此法测量样品时，不需要对试样经过分离不需要对试样经过分离, ,可可以直接用紫外可见分光光度计分析含有以直接用紫外可见分光光度计分析含有6 6个不同组分个不同组分的试样的试样。 此法对于药物分析工作来讲, 是一个重大的突破,在新药开发、疾病诊断、

13、食品科学、产品质控、环境毒性分析等领域有广阔的应用前景。 2.2.联用技术联用技术紫外可见分光光度计与HPLC HPLC 联用联用 把HPLC的紫外检测器去掉, 将紫外可见分光光度计接上一只流动池, 连接到HPLC 的柱后, 就组成了一个新的、完整的HPLC-HPLC-紫外可见分光紫外可见分光光度计分析系统光度计分析系统。该系统可以利用HPLC的高效高效分离功能分离功能和紫外可见分光光度计的准确度高准确度高、灵敏度高灵敏度高、选择性好选择性好的功能，能解决单台HPLC或单台紫外可见分光光度计不能解决的许多分析问题。2.2.联用技术联用技术紫外可见分光光度计与HPLC HPLC 联用联用 1.在使用仪器前，必须仔细阅读其使用说明书,测量前必须将比色皿外壁的残液用擦镜纸洗干净，以保持样品池的洁净2.若大幅度改变测试波长，需稍等片刻，等灯热平衡后，重新校正“0”和“100%”点。然后再测量。3.指针式仪器在未接通电源时，电表的指针必须位于零刻度上。若不是这种情况，需进行机械调零。4.不要频繁开关仪器5.应保证比色皿不倾斜放置。稍许倾斜，就会使参比样品与待测样品的吸收光径长度不一致，还可能使入射光不能全部通过样品池，导致测试比准确度不符合要求。6.比色皿架推拉到位。若不到位，将影响到测试值的重复性或准确度。7.仪器的工作环境：应避免阳光直射、避免强电