土壤中分解尿素的细菌的分离与计数上课用

1、选择培养基选择培养基以尿素为以尿素为唯一氮源唯一氮源的培养基的培养基牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨培养基培养基 是是分离能分分离能分解尿素的解尿素的细菌细菌判断该判断该培养基培养基有无选有无选择性择性实验组实验组对照组对照组培养基类型培养基类型是否是否接种接种目的目的结果结果只生长能只生长能分解尿素分解尿素的细菌的细菌生长多种生长多种微生物微生物是是栏目链接栏目链接用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是的对照是( )A未接种的选择培养基未接种的选择培养基B未接种的牛肉膏蛋白胨培养基未接种的牛肉膏蛋白胨培养基C接种了的牛肉膏蛋白胨培养基接种了的

2、牛肉膏蛋白胨培养基D接种了的选择培养基接种了的选择培养基C如何从平板上的菌落数推测出每克如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？样品中的菌落数？ 统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均个平板，计算出平板菌落数的平均值，然后按课本旁栏的公式进行计算值，然后按课本旁栏的公式进行计算教材教材P22实例分析实例分析P22第一同学只涂布了一个平板，第一同学只涂布了一个平板，没有设置没有设置重复组，因此结果不具有说服力。重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了

3、三个平板，但是涂布了三个平板，但是其中其中1个平板的计个平板的计数结果与数结果与2个相差太远，说明在操作过程个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地中可能出现了错误，因此，不能简单地将将3个平板的计数值用来求平均值个平板的计数值用来求平均值。设置对照的方法：设置对照的方法：空白对照：不给对照组任何处理因素。空白对照：不给对照组任何处理因素。条件对照（标准对照）：指給予对照组一种被证明有条件对照（标准对照）：指給予对照组一种被证明有效因素的处理效因素的处理自身对照：对照组和实验组都在同一研究对象上进行。自身对照：对照组和实验组都在同一研究对象上进行。相互对照：不单设对照组，而

4、是几个实验组相互对照。相互对照：不单设对照组，而是几个实验组相互对照。将细菌放在固体培养基上培养，它会繁殖并形成菌落将细菌放在固体培养基上培养，它会繁殖并形成菌落(如下图如下图)。某实验小组想检验两种抗生素的杀菌作用，。某实验小组想检验两种抗生素的杀菌作用，下列哪个实验方案最合适下列哪个实验方案最合适()C菌落计数菌落计数系列稀释系列稀释涂布平板与培养涂布平板与培养配制土配制土壤溶液壤溶液根据图示根据图示27填写以下实验流程：填写以下实验流程：实验设计：实验设计：（一）土壤取样（一）土壤取样（二）制备培养基（二）制备培养基（三）土壤样品的稀释（三）土壤样品的稀释（四）取样涂布（四）取样涂布（五

5、）微生物的培养与观察（五）微生物的培养与观察（八）鉴定（八）鉴定（七）细菌的计数（七）细菌的计数 选择培养基（尿素培养基）选择培养基（尿素培养基）牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基(作对照作对照) 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土土3cm3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。信封中。取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。前都要灭菌。制备以尿素为唯一氮源的制备以尿素为唯一氮源的选择培养基选择培养基。牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基（作对照）（作对照）稀

6、释倍数稀释倍数目的目的细菌细菌10104 4、10105 5、10106 6放线菌放线菌10103 3、10104 4、10105 5真菌真菌10102 2、10103 3、10104 4由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为择了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为10103 310107 7。 由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为此选择了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为10103 310107 7。每个稀释度下需要。每个稀释度下需要3

7、3个个选择培养基，选择培养基，1 1个牛肉个牛肉膏蛋白胨培养基，因此共需要膏蛋白胨培养基，因此共需要1515个选择培养基，个选择培养基，5 5个牛肉膏蛋白胨培养基。此外，还需要准备个牛肉膏蛋白胨培养基。此外，还需要准备8 8个个灭灭菌的试管和菌的试管和1 1个个灭菌的移液管。灭菌的移液管。 为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？实验时要实验时要对培养皿作对培养皿作好标记。注好标记。注明培养基类明

8、培养基类型、培养时型、培养时间、稀释度、间、稀释度、培养物等。培养物等。每个稀释度下需要每个稀释度下需要3 3个个选择培养基（作重复组），选择培养基（作重复组），1 1个牛肉膏蛋白胨培养基（作对照）个牛肉膏蛋白胨培养基（作对照）同种微生物有同种微生物有稳定的菌落特稳定的菌落特征：形状，大征：形状，大小，隆起程度，小，隆起程度，颜色颜色（六）鉴定（六）鉴定：筛选后必鉴定：筛选后必鉴定 鉴别培养基鉴别培养基：加入某种指示剂或化学加入某种指示剂或化学药品，不影响微生物的生存药品，不影响微生物的生存1 1、酚红培养基：、酚红培养基：鉴定分解尿素的细菌。鉴定分解尿素的细菌。原理：原理：脲酶催化尿素分解成

9、氨脲酶催化尿素分解成氨培养培养基碱性增强基碱性增强 酚红变红酚红变红脲酶阳性脲酶阳性2 2、伊红、伊红美蓝培养基：美蓝培养基：鉴定大肠杆菌鉴定大肠杆菌原理：原理：代谢产物与伊红代谢产物与伊红美蓝结合美蓝结合 菌落呈黑色并带有金属光泽。菌落呈黑色并带有金属光泽。属鉴别培养基，它并没有促进大肠杆属鉴别培养基，它并没有促进大肠杆菌的生长和抑制其他微生物的生长菌的生长和抑制其他微生物的生长伊红伊红美蓝培养基美蓝培养基是鉴别培养基，可以是鉴别培养基，可以用来检测自来水中的大肠杆菌是否超标，因用来检测自来水中的大肠杆菌是否超标，因为的为的代谢产物与伊红代谢产物与伊红美蓝结合美蓝结合，使菌落呈，使菌落呈深紫

10、色并带有金属光泽深紫色并带有金属光泽，使大肠杆菌的菌落，使大肠杆菌的菌落显示出来，显示出来，并没有促进大肠杆菌的生长和抑并没有促进大肠杆菌的生长和抑制其他微生物的生长。制其他微生物的生长。例如：鉴别大肠杆菌培养基例如：鉴别大肠杆菌培养基大肠杆菌呈黑色中心大肠杆菌呈黑色中心 , ,有或无金属光泽有或无金属光泽大肠杆菌在伊红美蓝琼脂大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)(EMB)上典型特征上典型特征 （一）培养物（一）培养物( (即培养的目的菌种即培养的目的菌种) )中是否有杂菌污染中是否有杂菌污染? ?以及选择培养基是否筛选出菌落以及选择培养基是否筛选出菌落? ? 对照的培养皿对照的培养皿在培养过程中

11、没有菌落在培养过程中没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。生长，说明培养基没有被杂菌污染。 牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目明显牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目大于选择培养基的数目，说明选择培养基已，说明选择培养基已筛选出一些菌落。筛选出一些菌落。如果学生选取的是同一种土样，统计的结如果学生选取的是同一种土样，统计的结果应该接近。如果结果相差太远，需要进一步果应该接近。如果结果相差太远，需要进一步分析产生差异的原因。分析产生差异的原因。（二）样品的稀释操作是否成功（二）样品的稀释操作是否成功 如果得到了如果得到了2 2个或个或2 2个以上菌落数目在个以上菌落数目在303030

12、0300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。进行菌落的计数。 （三）重复组的结果是否一致（三）重复组的结果是否一致操作实验组对照组判断培养基判断培养基中是否有杂中是否有杂菌污染菌污染判断选择培判断选择培养基是否具养基是否具有筛选作用有筛选作用选择培养基选择培养基接种接种选择培养基选择培养基不接不接种种选择培养基选择培养基接种接种牛肉膏蛋白牛肉膏蛋白胨培养基胨培养基接种接种需将需将未接种的未接种的选择培养基选择培养基同同时进行培养时进行培养需设立牛肉膏蛋需设立牛肉膏蛋白胨培养基进行白胨培养基进行接种后培养，观接种后培养，观察两种培养基上察两

13、种培养基上菌落数目、进行菌落数目、进行对比得出结对比得出结实验设计原则实验设计原则(1)设立重复组：设立重复组：统计某一稀释度下平板上的菌落数时，要至少涂布三个统计某一稀释度下平板上的菌落数时，要至少涂布三个平板作重复组，增强实验结果的说服力与准确性。平板作重复组，增强实验结果的说服力与准确性。(2)设立两种对照组：设立两种对照组：栏目链接栏目链接22课后练习课后练习 2.提示：反刍动物的瘤胃中含有大量的微生提示：反刍动物的瘤胃中含有大量的微生物，其中也包括分解尿素的微生物。物，其中也包括分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物多为厌氧菌，接由于瘤胃中的微生物多为厌氧菌，接触空气后会死亡，因此分离

14、其中能分解尿触空气后会死亡，因此分离其中能分解尿素的微生物除了需要准备素的微生物除了需要准备选择培养基选择培养基外，外，还应参照还应参照厌氧菌的培养厌氧菌的培养方法进行实验设计。方法进行实验设计。11某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难以降解的有某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难以降解的有机化合物机化合物A。研究人员用化合物。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到了能高效降解化合物素配制的培养基，成功地筛选到了能高效降解化合物A的细的细菌菌(“目的菌目的菌”)。请分析回答下列问题。请分析回答下列问题。(1)培养基中加入化合物培养基中

15、加入化合物A的目的是筛选的目的是筛选_，这种，这种培养基属于培养基属于_培养基。培养基。(2)“目的菌目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的_，实验需要振荡培养，由此推测，实验需要振荡培养，由此推测“目的菌目的菌”的的代谢类型是代谢类型是_。(3)培养若干天后，应选择培养瓶中化合物培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量含量_的培养液，接入新的培养液中连续培养，使的培养液，接入新的培养液中连续培养，使“目的菌目的菌”的数量的数量_。(4)可采用可采用_的方法将的方法将“目的菌目的菌”接种到固体培养接种到固体培养基上，通过基上，通过_法对法对“目的菌目的

16、菌”的数量进行统计，的数量进行统计，通常需要对菌落数为通常需要对菌落数为_的平板进行计数。的平板进行计数。(5)实验结束时，使用过的培养基应该进行实验结束时，使用过的培养基应该进行_处理处理后，才能倒掉。后，才能倒掉。“目的菌目的菌”选择选择化合物化合物A异养需氧型异养需氧型减少减少增加增加稀释涂布平板稀释涂布平板活菌计数活菌计数30300灭菌灭菌 1.1.使用选择培养基的目的是（使用选择培养基的目的是（ ） A.A.培养细菌培养细菌 B.B.培养真菌培养真菌 C.C.使需要的微生物大量繁殖使需要的微生物大量繁殖 D.D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别表现某微生物的特定性状与其他微

17、生物加以区别2.2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是( )( ) A.COA.CO2 2和和N N2 2 B. B.葡萄糖和葡萄糖和NHNH3 3 C.COC.CO2 2和尿素和尿素 D.D.葡萄糖和尿素葡萄糖和尿素C CD D3.3.下列说法不正确的是（下列说法不正确的是（ ） A.A.科学家从科学家从70708080度热泉中分离到耐高温的度热泉中分离到耐高温的TaqDNATaqDNA聚聚合酶合酶 B.B.统计某一稀释度的统计某一稀释度的5 5个平板的菌落数依次为个平板的菌落数依次为M1M1、M2M2、M3M3、M4M4、M5M5，以，以M

18、3M3作为该样品菌落数的估计值作为该样品菌落数的估计值 C.C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度 D.D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。种类最多。4.4.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（）加入（） A.A.较多的氮源物质较多的氮源物质 B.B.较多的碳源物质较多的碳源物质 C.C.青霉素类药物青霉素类药物 D.D.高浓度食盐高浓度食

19、盐B BC C（09，宁夏，宁夏，15分）分）（1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑_、_和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、易选择、_、_等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。 （2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行进行_（消毒、灭菌）；操作者的双手需要进行清洗和（消毒、灭菌）；操作者的双手需要进行清洗和_；静止空气中的细