第七章紫外-可见分光光度法2

1、分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材紫外吸收光谱的基本概念紫外吸收光谱的基本概念1紫外紫外-可见分光光度法的基本原理可见分光光度法的基本原理2紫外紫外-可见分光光度计可见分光光度计3分析条件的选择分析条件的选择456 定性定量分析方法定性定量分析方法UV在有机药物分析中的应用在有机药物分析中的应用21第七章紫外第七章紫外-可见分光光度法与检测技术可见分光光度法与检测技术分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫

2、生部“十二五十二五”规划教规划教材材第七章第七章 紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法学习目标学习目标 知识要求知识要求 能力要求能力要求 分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材学习目标学习目标u 通过学习光谱分析法概论、紫外通过学习光谱分析法概论、紫外- -可见分光光度法可见分光光度法的基本原理、分光光度计的基本构造、降低测量误的基本原理、分光光度计的基本构造、降低测量误差的方法、常用的定性、定量方法等知识，了解光差的方法、常用的定性、定量方法等知识，了解光学分析法的知识体系，熟

3、悉紫外学分析法的知识体系，熟悉紫外- -可见分光光度法可见分光光度法的实际应用，会用紫外的实际应用，会用紫外- -可见分光光度计测定溶液可见分光光度计测定溶液的吸光度，并对有关物质进行定性定量分析，为学的吸光度，并对有关物质进行定性定量分析，为学习红外分光光度法、荧光分光光度法、核磁共振波习红外分光光度法、荧光分光光度法、核磁共振波谱法及药物分析课中有关药品的定性鉴别、杂质检谱法及药物分析课中有关药品的定性鉴别、杂质检查和含量测定方法奠定基础。查和含量测定方法奠定基础。 分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二

4、五十二五”规划教规划教材材知识要求知识要求1掌握光的吸收定律概念、表达式及条件，吸光系数和掌握光的吸收定律概念、表达式及条件，吸光系数和吸收光谱的意义，常用定量分析方法的原理和应用。吸收光谱的意义，常用定量分析方法的原理和应用。2熟悉紫外熟悉紫外- -可见分光光度计的基本结构、吸光度测量可见分光光度计的基本结构、吸光度测量条件的选择、偏离光的吸收定律的主要因素。条件的选择、偏离光的吸收定律的主要因素。3了解光谱分析法的分类、紫外了解光谱分析法的分类、紫外- -可见吸收光谱的产生可见吸收光谱的产生机制、定性分析的依据和方法。机制、定性分析的依据和方法。分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢

5、庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材能力要求能力要求1. .能够用光的吸收定律解决定量计算问题能够用光的吸收定律解决定量计算问题 。2. .能够绘制吸收光谱曲线，找出被测组分的最能够绘制吸收光谱曲线，找出被测组分的最 大吸收波长。大吸收波长。3. .能够绘制标准曲线，并能应用标准曲线对样品能够绘制标准曲线，并能应用标准曲线对样品进行定量分析。进行定量分析。4. .会使用常见的紫外会使用常见的紫外- -可见分光光度计测定溶液的可见分光光度计测定溶液的吸光度。吸光度。 分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维

6、斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材案例导入 在夏天参加户外活动时，如果天气晴朗，就应该在夏天参加户外活动时，如果天气晴朗，就应该注意保护皮肤，否则，暴露在火辣辣太阳之下的皮肤，注意保护皮肤，否则，暴露在火辣辣太阳之下的皮肤，数小时后就会出现红肿、瘙痒、发热、刺痛症状，数数小时后就会出现红肿、瘙痒、发热、刺痛症状，数日后出现蜕皮现象，这表明太阳光中有一种光线能伤日后出现蜕皮现象，这表明太阳光中有一种光线能伤害生物细胞。科学家研究证实，这种光线是紫外线。害生物细胞。科学家研究证实，这种光线是紫外线。 根据可见光、紫外光与物质分子的相互作用建立

7、根据可见光、紫外光与物质分子的相互作用建立了紫外了紫外- -可见分光光度法。可见分光光度法。 分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第一节第一节 紫外吸收光谱的基本概念紫外吸收光谱的基本概念u根据待测物质（原子或分子）发射或吸收的电磁辐根据待测物质（原子或分子）发射或吸收的电磁辐射，以及待测物质与电磁辐射的相互作用而建立起射，以及待测物质与电磁辐射的相互作用而建立起来的定性、定量和结构分析方法，统称为来的定性、定量和结构分析方法，统称为光学分析光学分析法。法。 u利用光谱进行定性、定

8、量和结构分析的方法称为光利用光谱进行定性、定量和结构分析的方法称为光谱分析法，简称谱分析法，简称光谱法。光谱法。 分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第一节第一节 紫外吸收光谱的基本概念紫外吸收光谱的基本概念一、物质对光的选择性吸收一、物质对光的选择性吸收从本质上讲，光是一种电磁辐射，又称电磁波，从本质上讲，光是一种电磁辐射，又称电磁波，具有波动性和粒子性，即波粒二象性。具有波动性和粒子性，即波粒二象性。波动性：反射、折射、干涉、偏振波动性：反射、折射、干涉、偏振粒子性：吸收、发射

9、、光电效应粒子性：吸收、发射、光电效应分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材电磁波谱分区表电磁波谱分区表辐射区段辐射区段波长范围波长范围辐射区段辐射区段波长范围波长范围 射线射线10-30.1nm 射线射线远紫外辐射远紫外辐射紫外辐射紫外辐射可见光可见光0.110nm10200nm200400nm400760nm近红外辐射近红外辐射中红外辐射中红外辐射远红外辐射远红外辐射微波微波无线电波无线电波0.762.5 m2.550 m50300 m0.3mm1m11000m分析化学（第分析化

10、学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材 电磁辐射电磁辐射电磁辐射是一种以电磁辐射是一种以电磁波电磁波的的形式在空间高速传播的形式在空间高速传播的粒子流粒子流，具有具有波动性波动性和和微粒性微粒性。分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材磁场磁场电场电场传播方向传播方向电磁辐射的波动性电磁辐射与其它波，如声波不同，电磁波不需传播介质，可在真空中传输。 c=v分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢

11、庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材电磁辐射的微粒性电磁辐射是由一颗颗不连续的电磁辐射是由一颗颗不连续的光光子子构成的构成的粒子流粒子流。当物质吸收或发射。当物质吸收或发射一定波长的电磁波时，是以吸收或发一定波长的电磁波时，是以吸收或发射一颗颗量子化的光子形式进行的。射一颗颗量子化的光子形式进行的。/hchE分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材一一 、 物质对光的选择性吸收物质对光的选择性吸收单色光单色光:

12、 : 单一波长的光束单一波长的光束复合光复合光: : 含有多种波长的光束含有多种波长的光束电磁波谱电磁波谱: : 以波长大小顺序排列的电磁波谱图以波长大小顺序排列的电磁波谱图互补光：互补光：两种适当颜色单色光按一定比例混合，可以得两种适当颜色单色光按一定比例混合，可以得 到白光，则这两种单色光互称补色光。到白光，则这两种单色光互称补色光。波长波长 10pm 300pm 200nm 400nm 800nm 500 m 1cm 1m光谱光谱 射线射线 X射线射线 紫外光紫外光 可见光可见光 红外光红外光 微波微波 无线电波无线电波方法方法 光谱法光谱法 分光光度法分光光度法 光谱法光谱法 核磁共振

13、核磁共振 可可 见见 光光分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材一、 物质对光的选择性吸收绿绿560560500500白光紫紫400400450450青蓝青蓝480480490490橙橙610610650650青青480480500500红红650650750750黄黄560560610610蓝蓝450450480480光的互补色示意图光的互补色示意图课堂互动1.硫酸铜能够吸收白色光中的黄色光而呈现-色2.一束白光透过高锰酸钾溶液后，何种颜色的光被吸收了？分析化学（第分析化学（第2版

14、）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材 光的三原色光的三原色 白光的色散白光的色散分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材二、透光率与吸光度二、透光率与吸光度当一束平行的单当一束平行的单色光照射溶液时色光照射溶液时 I0Ia + It 分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材lgAT 二、透光率

15、与吸光度二、透光率与吸光度u 透射光透射光强度强度It与入射光强度与入射光强度I0的比值称为透光率或透光的比值称为透光率或透光度度T T= It I0u 透光率的负对数为吸光度透光率的负对数为吸光度A 分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材三、吸收光谱曲线三、吸收光谱曲线 u概念：以波长概念：以波长为横坐标，吸光度为横坐标，吸光度A为纵坐标所描为纵坐标所描绘的曲线，称为吸收光谱曲线，简称吸收光谱，绘的曲线，称为吸收光谱曲线，简称吸收光谱，或或A-曲线曲线 。u特点：在相同条件下，同一

16、物质的不同浓度的溶特点：在相同条件下，同一物质的不同浓度的溶液，其吸收光谱曲线相似，且液，其吸收光谱曲线相似，且max相同。这是定相同。这是定性分析的基础。性分析的基础。分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材三、吸收曲线（吸收光谱）三、吸收曲线（吸收光谱）max525nm吸收光谱能准确地描述物质对光的选择性吸收的情况最大吸收波长定性依据：不同物质因分子结构不同而具有不同的特征吸收曲线定量依据：同波长下吸光度随浓度增大而增大一般情况下选择最大吸收波长处测定动画动画分析化学（第分析化学（

17、第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材三、吸收光谱曲线三、吸收光谱曲线 吸收光谱曲线示意图吸收光谱曲线示意图 A480 520 560nm max=515分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材吸收曲线的讨论1.同一种物质对不同波长光的吸光度不同。同一种物质对不同波长光的吸光度不同。 吸光度最大处对应的波长称为吸光度最大处对应的波长称为最大吸收波长最大吸收波长max2.不同浓度的同一种物质，其吸收

18、曲线形状相似不同浓度的同一种物质，其吸收曲线形状相似 max不变。而对于不同物质，它们的吸收曲线形状和不变。而对于不同物质，它们的吸收曲线形状和 max则不同。则不同。3.吸收曲线可以提供物质的结构信息，并作为物吸收曲线可以提供物质的结构信息，并作为物 质定性分析的依据之一。质定性分析的依据之一。4.不同浓度的同一种物质，在某一定波长下吸光度不同浓度的同一种物质，在某一定波长下吸光度 A 有差异，在有差异，在max处吸光度处吸光度A 的差异最大。此特性可作为物质定量分析的依据的差异最大。此特性可作为物质定量分析的依据 5.在在max处吸光度随浓度变化的幅度最大，所以测定最灵敏。吸处吸光度随浓度

19、变化的幅度最大，所以测定最灵敏。吸收曲线是定量分析中选择入射光波长的重要依据。收曲线是定量分析中选择入射光波长的重要依据。分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第一节 紫外吸收光谱的基本概念四、紫外四、紫外- -可见分光光度的特点可见分光光度的特点特点特点灵敏度高灵敏度高准确度高准确度高精密度好精密度好选择性好选择性好易于普及易于普及应用广泛应用广泛仪器简单仪器简单操作简便操作简便价格低廉价格低廉测定快速测定快速分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高

20、专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材点滴积累点滴积累1.光的本质是电磁波，物质对光的吸收具有选择性2.吸光度是透光率倒数的对数，或是透光率的负对数3.吸收曲线是溶液在一定条件下的吸收度随入射光波长变化而变化的曲线。他与溶液的性质有关，因此A-曲线的形状和最大吸收波长可以作为物质定性的辅助依据。分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫

21、生部“十二五十二五”规划教规划教材材1 1紫外紫外- -可见光的波长范围是可见光的波长范围是 A200400nm B400760nm C200760nm D360800nm2 2下列叙述错误的是下列叙述错误的是 A A光的能量与其波长成反比光的能量与其波长成反比 B B有色溶液越浓，对光的吸收也越强烈有色溶液越浓，对光的吸收也越强烈 C C物质对光的吸收有选择性物质对光的吸收有选择性 D D光的能量与其频率成反比光的能量与其频率成反比第一节 概述分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材

22、3 3紫外紫外- -可见分光光度法属于可见分光光度法属于 A A原子发射光谱法原子发射光谱法 B B原子吸收光谱法原子吸收光谱法 C C分子发射光谱法分子发射光谱法 D D分子吸收光谱法分子吸收光谱法4 4分子吸收可见分子吸收可见- -紫外光后，可发生哪种类型的紫外光后，可发生哪种类型的分子能级跃迁分子能级跃迁 A A转动能级跃迁转动能级跃迁 B B振动能级跃迁振动能级跃迁 C C电子能级跃迁电子能级跃迁 D D以上都能发生以上都能发生 第一节 概述分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教

23、材材第二节 紫外-可见分光光度法的基本原理一、光的吸收定律一、光的吸收定律 u当一束平行的单色光通过均匀、无散射的含有吸光性当一束平行的单色光通过均匀、无散射的含有吸光性物质的溶液时，在入射光的波长、强度及溶液的温度物质的溶液时，在入射光的波长、强度及溶液的温度等条件不变的情况下，该溶液的吸光度等条件不变的情况下，该溶液的吸光度A与溶液的浓与溶液的浓度度c及液层厚度及液层厚度L的乘积成正比，即：的乘积成正比，即： AKL c 。 称为光的吸收定律（朗伯称为光的吸收定律（朗伯-比尔定律）。比尔定律）。u光的吸收定律是定量分析的理论依据。光的吸收定律是定量分析的理论依据。分析化学（第分析化学（第2

24、版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材u朗伯朗伯- -比尔定律不仅适用于可见光，而且也适用于紫比尔定律不仅适用于可见光，而且也适用于紫外光和红外光；不仅适用于均匀、无散射的溶液，而外光和红外光；不仅适用于均匀、无散射的溶液，而且也适用于均匀、无散射的固体和气体且也适用于均匀、无散射的固体和气体。u实验证明：溶液对光的吸光度具有加和性。如果溶液实验证明：溶液对光的吸光度具有加和性。如果溶液中同时存在两种或两种以上的吸光性物质，则测得的中同时存在两种或两种以上的吸光性物质，则测得的该溶液的吸光度等于溶液中各吸光性

25、物质吸光度的总该溶液的吸光度等于溶液中各吸光性物质吸光度的总和，即：和，即：A（a+b+c）AaAbAc 第二节 紫外-可见分光光度法的基本原理分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材 第二节 紫外-可见分光光度法的基本原理分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第二节 紫外-可见分光光度法的基本原理二、吸光系数二、吸光系数 u摩尔吸光系数：在入射光波长一定时，溶液浓度摩尔吸光

26、系数：在入射光波长一定时，溶液浓度为为1 mol/L，液层厚度为，液层厚度为1cm时所测得的吸光度称时所测得的吸光度称为摩尔吸光系数，常用为摩尔吸光系数，常用表示表示 。 u光吸收系数光吸收系数 在入射光波长一定时，溶液浓度为在入射光波长一定时，溶液浓度为1g/L1g/L，液层厚度为，液层厚度为1cm1cm时的吸光度，称为光吸收系时的吸光度，称为光吸收系数，常用表示，其量纲为数，常用表示，其量纲为L/(gcm)L/(gcm)。 分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第二节 紫外-可见

27、分光光度法的基本原理u百分吸光系数：在入射光波长一定时，溶液浓度百分吸光系数：在入射光波长一定时，溶液浓度为为1 （W/V）、层厚度为）、层厚度为1cm时所测得的吸光度时所测得的吸光度称为百分吸光系数，常用称为百分吸光系数，常用 表示表示。 二者的关系：二者的关系：1%110cmME 1%1cmE分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材 第二节 紫外-可见分光光度法的基本原理分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业

28、卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材某有色溶液的物质的量浓度浓度为某有色溶液的物质的量浓度浓度为c c，在一定条件下用，在一定条件下用1 1cmcm比色杯测得吸光度为比色杯测得吸光度为A A，则摩尔吸光系数应为：，则摩尔吸光系数应为： A AcAcA B BcMcM C CA/C DA/C DC/A C/A 第二节 紫外-可见分光光度法的基本原理分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第二节 紫外-可见分光光度法的基本原理三、偏离光的吸收定律的主要因素三、偏离光的吸收定律的主要因素u

29、化学因素化学因素:(1)溶液的浓度溶液的浓度 (2)物质的化学变化物质的化学变化 (3)溶剂的影响溶剂的影响 u光学因素光学因素:(1)非单色光非单色光 (2)杂散光杂散光 (3)非平行光非平行光 (4)反射现象反射现象 (5)散射现象散射现象分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第二节 紫外-可见分光光度法的基本原理偏离光的吸收定律示意图偏离光的吸收定律示意图分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二

30、五十二五”规划教规划教材材第二节 紫外-可见分光光度法的基本原理点滴积累点滴积累1 1光的吸收定律表明了吸光度与液层厚度光的吸收定律表明了吸光度与液层厚度和浓度之间的关系，它是吸收光谱法定量分析和浓度之间的关系，它是吸收光谱法定量分析的依据。的依据。2 2吸光系数的表示方法有多种，随待测溶吸光系数的表示方法有多种，随待测溶液浓度的不同标度而不同。液浓度的不同标度而不同。3 3偏离光的吸收定律的因素主要有化学因偏离光的吸收定律的因素主要有化学因素和光学因素。素和光学因素。 分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二

31、五十二五”规划教规划教材材第三节 紫外-可见分光光度计一、紫外一、紫外- -可见分光光度计的主要部件：可见分光光度计的主要部件：光源光源单色器单色器吸收池吸收池检测器检测器讯号处理与显示器讯号处理与显示器 分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第三节 紫外-可见分光光度计 二、紫外二、紫外- -可见分光光度计的光学性能可见分光光度计的光学性能1测光方式 2波长范围 3狭缝或光谱带宽 4杂散光 5波长准确度 6吸光度范围 7波长重复性 8测光准确度 9光度重复性 10分辨率 分析化学（

32、第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第三节 紫外-可见分光光度计 三、紫外三、紫外- -可见分光光度计的类型可见分光光度计的类型1.1.可见分光光度计可见分光光度计 721721型型 分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第三节 紫外-可见分光光度计 三、紫外三、紫外- -可见分光光度计的类型可见分光光度计的类型1.1.可见分光光度计可见分光光度计 722722型型分析化学（第分析

33、化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第三节 紫外-可见分光光度计三、紫外三、紫外- -可见分光光度计的类型可见分光光度计的类型2.2.紫外紫外- -可见分光光度计可见分光光度计 （1 1）单波长分光光度计）单波长分光光度计 单光束分光光度计单光束分光光度计 双光束分光光度计双光束分光光度计 分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第三节 紫外-可见分光光度计分析化学（第分析化学（第2版）版

34、） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材课堂活动课堂活动 1.1.试述紫外试述紫外- -可见分光光度计的主要部件可见分光光度计的主要部件及其作用？及其作用？ 2.2.紫外紫外- -可见分光光度计有哪些类型？可见分光光度计有哪些类型？第三节 紫外-可见分光光度计分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第三节 紫外-可见分光光度计点滴积累点滴积累u紫外紫外- -可见分光光度计的基本结构相同，都可见分光光度计的基本

35、结构相同，都由光源、单色器、吸收池、检测器、讯号处由光源、单色器、吸收池、检测器、讯号处理与显示器等主要部件构成，但不同型号仪理与显示器等主要部件构成，但不同型号仪器的外形差别很大，质量和价格相差悬殊，器的外形差别很大，质量和价格相差悬殊，操作方法迥异，使用之前应仔细阅读仪器使操作方法迥异，使用之前应仔细阅读仪器使用说明书。用说明书。 分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第四节 分析条件的选择一、仪器测量条件的选择一、仪器测量条件的选择 1.1.应选择最大吸收波长作为入射光。应选择

36、最大吸收波长作为入射光。 2.2.应控制吸光度读数范围：应控制吸光度读数范围： 吸光度在吸光度在0.20.7之间；之间； 透光率在透光率在20%65%之间。之间。 分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第四节 分析条件的选择二、显色反应条件的选择二、显色反应条件的选择1.1.对显色剂及显色反应的要求对显色剂及显色反应的要求 2.2.控制合适的显色反应条件控制合适的显色反应条件 三、参比溶液的选择三、参比溶液的选择1.溶剂参比溶液溶剂参比溶液 2.试样参比溶液试样参比溶液 3.试剂参比

37、溶液试剂参比溶液 4.平行操作参比溶液平行操作参比溶液 分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第四节 分析条件的选择分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第四节 分析条件的选择点滴积累点滴积累 1 1选择吸光性物质的最大吸收波长作为测定波选择吸光性物质的最大吸收波长作为测定波长。长。 2 2使用紫外使用紫外- -可见分光光度计时，读数范围应可见分光光度计时，读数范围应控制在

38、吸光度为控制在吸光度为0.20.20.70.7，透光率为，透光率为65% 65% 20%20%之之间。间。 3 3待测物质在紫外待测物质在紫外- -可见光区无吸收时，应加可见光区无吸收时，应加显色剂。显色剂不得有干扰，反应必须完全。显色剂。显色剂不得有干扰，反应必须完全。 4 4一般用溶剂作参比溶液。必要时采用试样参一般用溶剂作参比溶液。必要时采用试样参比溶液、试剂参比溶液或平行操作参比溶液。比溶液、试剂参比溶液或平行操作参比溶液。 分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第五节 定性

39、定量方法一、定性分析方法一、定性分析方法定性的基本依据：比较光谱的一致性。定性的基本依据：比较光谱的一致性。u未知物和标准品的吸收光谱曲线，对比二者是否一致。未知物和标准品的吸收光谱曲线，对比二者是否一致。 u比较吸收光谱的特征数据及比值的一致性。比较吸收光谱的特征数据及比值的一致性。二、杂质检查：二、杂质检查： 将药品光谱与药品标准光谱相对照，利用杂质的特将药品光谱与药品标准光谱相对照，利用杂质的特征吸收，可以检测出微量杂质及其含量。征吸收，可以检测出微量杂质及其含量。 分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十

40、二五十二五”规划教规划教材材案例分析案例分析贝诺酯的定性鉴别贝诺酯的定性鉴别中国药典中国药典(20(201010年版年版) )规定：贝诺酯加无水乙醇制成规定：贝诺酯加无水乙醇制成每每1 1mlml约含约含7.57.5g的溶液，在的溶液，在240240nmnm处有最大吸收，相处有最大吸收，相应的百分吸光系数应的百分吸光系数( )( )应为应为730730760760。维生素维生素B B1212也有三个吸收峰，分别在也有三个吸收峰，分别在278278nmnm、361nm361nm、550nm550nm波长处，它们的吸光度比值应为：波长处，它们的吸光度比值应为：A A361nm361nm/ /A A

41、278nm278nm在在1.701.701.881.88之间，之间，A A361nm361nm/ /A A550nm550nm在在3.153.153.453.45之间。之间。 第五节 定性定量方法%11cmE分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材案例分析案例分析葡萄糖注射液是临床上常用的药品之一。制备时需葡萄糖注射液是临床上常用的药品之一。制备时需要高温灭菌，葡萄糖会转化为要高温灭菌，葡萄糖会转化为5-5-羟甲基糠醛而引入羟甲基糠醛而引入杂质。杂质。中国药典中国药典（20102010

42、年版）规定葡萄糖注射年版）规定葡萄糖注射液在液在284nm284nm波长处的吸收度不得过波长处的吸收度不得过0.320.32，以此控制其，以此控制其杂质杂质5-5-羟甲基糠醛的量。羟甲基糠醛的量。在在284nm284nm波长处，葡萄糖无吸收，而杂质波长处，葡萄糖无吸收，而杂质5-5-羟甲基糠羟甲基糠醛在此波长处有最大吸收，可以通过控制供试品溶醛在此波长处有最大吸收，可以通过控制供试品溶液在此波长处的吸收度来控制杂质的含量。液在此波长处的吸收度来控制杂质的含量。 第五节 定性定量方法分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫

43、生部“十二五十二五”规划教规划教材材第五节 定性定量方法三、定量分析方法三、定量分析方法定量分析的依据定量分析的依据: : AK c L（光的吸收定律）（光的吸收定律）（一）单组分溶液的定量方法（一）单组分溶液的定量方法 1. 标准曲线法：标准曲线法： 是紫外是紫外- -可见分光光度法中最可见分光光度法中最经典的定量方法。经典的定量方法。 分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第五节 定性定量方法u标准曲线法标准曲线法的方法和步骤如下的方法和步骤如下:（1 1）配制一系列不同浓度的标

44、准溶液，选择合适）配制一系列不同浓度的标准溶液，选择合适的参比溶液，在相同条件下，以待测组分的最大的参比溶液，在相同条件下，以待测组分的最大吸收波长吸收波长 作为入射光，分别测定各标准溶液作为入射光，分别测定各标准溶液对应的吸光度。对应的吸光度。（2 2）以浓度）以浓度c c为横坐标、吸光度为横坐标、吸光度A A为纵坐标描绘标为纵坐标描绘标准曲线。准曲线。max分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第五节 定性定量方法 （3 3）按照相同的实）按照相同的实验条件和操作程序，验条件和操

45、作程序，用待测溶液配制未知用待测溶液配制未知试样溶液并测定其吸试样溶液并测定其吸光度光度A A样，在标准曲线，在标准曲线上找到与之对应的未上找到与之对应的未知试样溶液的浓度知试样溶液的浓度c c样 。 如右图。 分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第五节 定性定量方法2.标准对比法标准对比法: 在相同的条件下，配制浓度为在相同的条件下，配制浓度为cs的标准溶液和的标准溶液和浓度为浓度为cx的试样溶液，在最大吸收波长处，分别的试样溶液，在最大吸收波长处，分别测定二者的吸光度值为测定二

46、者的吸光度值为As、Ax ，依据朗伯，依据朗伯- -比尔比尔定律得：定律得：As=csLAx=cxL 则则: :SSXxAcAc 分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第五节 定性定量方法3.吸光系数法吸光系数法: 吸光系数法直接利用朗伯吸光系数法直接利用朗伯- -比尔定律的数比尔定律的数学表达式学表达式AKcL进行计算的定量分析方法。进行计算的定量分析方法。在手册中查出待测物质在最大吸收波长在手册中查出待测物质在最大吸收波长 处处的吸光系数的吸光系数 或或 , ,并在相同条件下测量

47、并在相同条件下测量样品溶液的吸光度样品溶液的吸光度A，则其浓度为：，则其浓度为： 或或%1cm1EAcLmaxLEA%1cm1分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第五节 定性定量方法有时也可以将待测样品溶液的吸光度换算成样品有时也可以将待测样品溶液的吸光度换算成样品组分的吸光系数，计算与标准品的吸光系数的比组分的吸光系数，计算与标准品的吸光系数的比值，求出样品中待测组分的质量分数。值，求出样品中待测组分的质量分数。 或或样标%1cm1%1cm1标样EE分析化学（第分析化学（第2版）

48、版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第五节 定性定量方法 实例实例：维生素：维生素B12水溶液在水溶液在 =361nm处的百分吸光系处的百分吸光系数数 =207。取维生素。取维生素B12样品样品30.0mg，加纯化水溶解，加纯化水溶解，用用1L的容量瓶定容。将溶液盛于的容量瓶定容。将溶液盛于1cm的吸收池，测得的吸收池，测得361nm波长处的吸光度波长处的吸光度A=0.600，试求样品中维生素，试求样品中维生素B12的质量分数。的质量分数。 解：解：max%1cm1E330.0 10100%0.00300100

49、020000. 100300. 0600. 0%1cm1LAE样966. 0207200%1cm1%1cm1标样EE分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第五节 定性定量方法 （二）二元组分溶液的定量方法（二）二元组分溶液的定量方法 1. 1. 解联立方程组法解联立方程组法 当试样溶液中各待测组分相互干扰不太严重时，当试样溶液中各待测组分相互干扰不太严重时，可根据吸光度具有加和性的特点，在同一试样溶可根据吸光度具有加和性的特点，在同一试样溶液中同时测定两个或两个以上的待测组分。假设液

50、中同时测定两个或两个以上的待测组分。假设要测定试样中有两个待测组分要测定试样中有两个待测组分a a和和b b，如果分别绘，如果分别绘制制a a、b b两个纯物质的吸收光谱，则有三种情况。两个纯物质的吸收光谱，则有三种情况。 分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第五节 定性定量方法分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第五节 定性定量方法（）表明，两个待测组分在各自的最大吸

51、收波长处，）表明，两个待测组分在各自的最大吸收波长处，另一组分没有吸收，可以用测定单组分溶液的方法，另一组分没有吸收，可以用测定单组分溶液的方法，分别在分别在1 1和和2 2波长处测定组分波长处测定组分a a、b b的吸收度的吸收度, , 由光由光的吸收定律求得的吸收定律求得c ca a、c cb b。测定时两组分互不干扰。测定时两组分互不干扰。（）表明，在组分）表明，在组分a a的最大吸收波长的最大吸收波长1 1处，组分处，组分b b对对组分组分a a的测定无干扰，而在组分的测定无干扰，而在组分b b的最大吸收波长的最大吸收波长2 2处，处，组分组分a a对组分对组分b b的测定有干扰。这时

52、，先在的测定有干扰。这时，先在1 1波长处单波长处单独测量组分独测量组分a a；然后在；然后在2 2波长处测量组分波长处测量组分a a、b b的总吸的总吸光度，根据吸光度的加和性，从而可以求出光度，根据吸光度的加和性，从而可以求出c cb b。 分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第五节 定性定量方法（）表明，两个待测组分彼此相互干扰，此时，）表明，两个待测组分彼此相互干扰，此时，在波长在波长1 1和和2 2处分别测定试样溶液的总吸光度处分别测定试样溶液的总吸光度 及及 ，同时测定

53、，同时测定a a、b b纯物质的吸光系数纯物质的吸光系数 、 和和 、 ，根据吸光度的加和性，则由联立方程，根据吸光度的加和性，则由联立方程组求得组求得c ca a、c cb b。 1a bA2a bA1a1b2a2b分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第五节 定性定量方法2.2.等吸收波长消去法（双波长分光光度法）等吸收波长消去法（双波长分光光度法）当试样中两个待测组分的相互干扰比较严重时，用解联立方当试样中两个待测组分的相互干扰比较严重时，用解联立方程组的方法进行定量分析会产生

54、较大的误差，这时可以用等程组的方法进行定量分析会产生较大的误差，这时可以用等吸收波长消去法进行测定。吸收波长消去法进行测定。 在试样中含有两个待测组分在试样中含有两个待测组分a a和和b b时，若要测定组分时，若要测定组分b b，组分，组分a a有干扰，应设法消除组分有干扰，应设法消除组分a a的吸收干扰。首先选择待测组分的吸收干扰。首先选择待测组分b b的最大吸收波长的最大吸收波长2 2作为测量波长，然后用作图的方法选择作为测量波长，然后用作图的方法选择参比波长参比波长1 1，使组分，使组分a a在这两个波长处的吸光度相等。在这两个波长处的吸光度相等。 分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢

55、庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第五节 定性定量方法试样溶液在试样溶液在2 2和和1 1两个波长处的吸光度之差，两个波长处的吸光度之差，只与待测组分只与待测组分b b（ a a）的浓度成正比，而与干扰）的浓度成正比，而与干扰组分的浓度无关。组分的浓度无关。 分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材3.3.差示分光光度法差示分光光度法当待测组分含量过高时，吸光度超出了准确测量当待测组分含量过高时，吸光度超出了

56、准确测量的读数范围，可以采用差示分光光度法。具体方的读数范围，可以采用差示分光光度法。具体方法是用一个比试样溶液浓度稍低的标准溶液作为法是用一个比试样溶液浓度稍低的标准溶液作为参比溶液，将分光光度计调零（透光率参比溶液，将分光光度计调零（透光率100%100%），），测得的吸光度就是被测试样溶液试液与参比溶液测得的吸光度就是被测试样溶液试液与参比溶液的吸光度差值（相对吸光度）。根据光的吸收定的吸光度差值（相对吸光度）。根据光的吸收定律得：律得： A AA Ax xA As sLL( (c cx xc cs s) ) 即：待测溶液与参比溶液的吸光度差值与两溶即：待测溶液与参比溶液的吸光度差值与两

57、溶液的浓度之差成正比。液的浓度之差成正比。 第五节 定性定量方法分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第五节 定性定量方法课堂活动课堂活动1.在紫外在紫外-可见分光光度法中，影响吸光系数的因素是可见分光光度法中，影响吸光系数的因素是 A溶剂的种类和性质溶剂的种类和性质 B溶液的物质量浓度溶液的物质量浓度 C物质的本性和光的波长物质的本性和光的波长 D吸收池大小吸收池大小 E待测物的分子结构待测物的分子结构2.紫外紫外-可见分光光度法常用的定量分析方法有可见分光光度法常用的定量分析方法

58、有 A间接滴定法间接滴定法 B标准对比法标准对比法 C标准曲线法标准曲线法 D直接电位法直接电位法 E吸光系数法吸光系数法分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第五节 定性定量方法课堂互动课堂互动3 3在符合朗伯在符合朗伯- -比尔定律的条件下，有色物质的浓度、比尔定律的条件下，有色物质的浓度、最大吸收波长、吸光度三者的关系是最大吸收波长、吸光度三者的关系是 A A增加、增加、增加增加、增加、增加 B B增加、减小、不变增加、减小、不变 C C减小、增加、减小减小、增加、减小 D D

59、减小、不变、减小减小、不变、减小4 4维生素维生素D D2 2的摩尔吸收系数的摩尔吸收系数 264264nmnm=18200=18200。用。用2.02.0cmcm吸吸收池测定，如果要控制吸光度收池测定，如果要控制吸光度A A在在0.6990.6990.1870.187范范围内，应使维生素围内，应使维生素D D2 2溶液的浓度在什么范围内？溶液的浓度在什么范围内？分析化学（第分析化学（第2版）版） 谢庆娟谢庆娟 李维斌李维斌全国高职高专药品类专业卫生部全国高职高专药品类专业卫生部“十二五十二五”规划教规划教材材第五节 定性定量方法点滴积累（点滴积累（1 1）紫外紫外- -可见分光光度法的各种定

60、量方法的优缺点：可见分光光度法的各种定量方法的优缺点： 1 1标准曲线法的优点：测定大批量样品时，操作简标准曲线法的优点：测定大批量样品时，操作简单、准确、快速。缺点：不同人处理相同的测量数据，得单、准确、快速。缺点：不同人处理相同的测量数据，得到的结果不易完全相同。到的结果不易完全相同。 2 2标准对比法的优点：测量数据相同，任何人都能标准对比法的优点：测量数据相同，任何人都能得到完全一致的结果。缺点：随机误差较大。得到完全一致的结果。缺点：随机误差较大。 3 3吸光系数法的优点：与标准对比法的优点相同。吸光系数法的优点：与标准对比法的优点相同。 缺点：测定条件不易与文献完全一致，从而引入误