生物化学实验课件：实验十一叶绿素总含量的测定_第1页
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1、一一.实验原理实验原理 叶绿素a、b在长波的最大吸收峰分别在663nm、645nm，据Lamber-Beer 定律，可得浓度C与光密度D间的关系式： D663=82.04Ca +9.27Cb D645=16.75Ca +45.6Cb (浓度单位：g/mL） CA= 12.72D663 2.59D645 CB= 22.88D645 4.68 D663 CT = 20.29D645 +8.02D663 (浓度单位：mg/L）二二. 试剂与材料试剂与材料一、试剂一、试剂 无水乙醇；95乙醇； 50 mmol/L磷酸缓冲溶液（pH 6.8）。二、材料二、材料 新鲜植物叶片三、器材三、器材 研钵、分光光

2、度计。l取5g新鲜植物叶片,以10 mL 磷酸缓冲溶液（50 mmol/L, pH 6.8）将其研磨成均质。吸取1ml上清液，注入50ml离心管中，再加入4ml无水乙醇，置于4黑暗下30分钟。然后于4下以1000 g离心15分钟，以分光光度计分别测定665 nm、649 nm波长处吸光值，以95乙醇做空白。三三. 实验步骤实验步骤四四. 结果计算结果计算4.1 4.1 结果计算结果计算 叶绿素浓度叶绿素浓度6.10A665nm20.04A649nm(mg/L) 叶绿素含量是以每克鮮重含有叶绿素的毫克数叶绿素含量是以每克鮮重含有叶绿素的毫克数（mg/g）表示。）表示。 五. 注意事项 注意叶绿素一定要提干净，避免造成测定误差 叶

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