第3章氨基酸生物化学

1、第第1章章 氨基酸氨基酸 (Amino Acid)第第1 1章章 氨基酸氨基酸n氨基酸氨基酸-蛋白质的构件分子蛋白质的构件分子n氨基酸的分类氨基酸的分类n氨基酸的酸碱化学氨基酸的酸碱化学n氨基酸的化学反应氨基酸的化学反应n氨基酸的光学活性和光谱性质氨基酸的光学活性和光谱性质n氨基酸混合物的分析分离氨基酸混合物的分析分离Hydrolysis of proteins： Hydrolysis by acid Hydrolysis by base Hydrolysis by enzymeNHCHCOR4NHCHCOR3NHCHCOR2NHCHCOR1Full hydrolysisPartial hyd

2、rolysisAmino AcidsAmino Acids1.1 1.1 氨基酸氨基酸-蛋白质的构件分子蛋白质的构件分子n1.1.1 1.1.1 蛋白质的水解蛋白质的水解可以被酸、碱或蛋白催化水解完全水解部分水解NHCHCOR4NHCHCOR3NHCHCOR2NHCHCOR11.1.1.1 1.1.1.1 酸水解酸水解 Hydrolysis by acidHydrolysis by acid n6mol/L HCl 或4 mol/L H2SO4回流20hr左右，蛋白质完全水解，不引起消旋，得到的是L-L-型氨基酸型氨基酸n但色氨酸色氨酸完全被破坏，羟基氨基酸羟基氨基酸部分被分解，天冬酰胺和谷氨

3、酰胺的天冬酰胺和谷氨酰胺的酰胺基酰胺基被水解下来1.1.1.2 1.1.1.2 碱水解碱水解 Hydrolysis by baseHydrolysis by basen与5mol/L NaOH共煮10-20hr,完全水解n多数氨基酸不同程度的被破坏，得到的是L型和D型的混合物；精氨酸脱氨n色氨酸色氨酸稳定1.1.1.3 1.1.1.3 酶水解酶水解 Hydrolysis by enzymeHydrolysis by enzymen不产生消旋，不破坏氨基酸n部分水解n胰蛋白酶（trypsin）n胰凝乳蛋白酶(chymotrypsin,糜蛋白酶)n胃蛋白酶(pepsin)Structure of

4、amino acidsH+Why are they called -amino acids？R H2NC HCOOHRcarboxyl group羧基羧基amino group氨基氨基n Amino acids share common structural featuresAmino AcidsAmino AcidsR H2NC HCOOHRnThe a-carbons for 19 amino acids are asymmetric（不对称的）（不对称的） (or chiral手征性手征性的的), thus being able to have two enantiomers（对映体）（

5、对映体）.n Glycine has no chirality.Amino AcidsAmino Acids甘氨酸（R基为氢）无手性碳无手性碳其余氨基酸，-碳原子是一个手性碳原子手性碳原子，因此都具有旋光性旋光性Amino AcidsAmino AcidsHOnly the L-amino acids have been found in proteins (D-isomers have been found only in small peptides of bacteria cell walls and in some peptide antibiotics).Amino AcidsAmi

6、no AcidsAmino AcidsAmino AcidsAmino AcidsAmino AcidsnAmino acids can be classified by R groupAmino AcidsAmino AcidsR H2NC HCOOHR1.2 1.2 氨基酸的分类氨基酸的分类 Classification of amino acidsClassification of amino acidsn1.2.1 1.2.1 常见的蛋白质氨基酸常见的蛋白质氨基酸nAmino acids can be classified by R groupAmino acids can be cl

7、assified by R groupn1. 脂肪族氨基酸n2. 芳香族氨基酸n3. 杂环族氨基酸n R H2NC HCOOHRClassification of amino acidsClassification of amino acids Basic amino acid：201. 1.脂肪族氨基酸脂肪族氨基酸na 中性氨基酸nb 含羟基或硫氨基酸nc 酸性氨基酸及其酰胺nd 碱性氨基酸Classification of amino acidsClassification of amino acids H2NCHCHOHOH2NCHCH3COHOH2NCHCCHOHOCH3CH3H2NC

8、HCCH2OHOCHCH3CH3H2NCHCCHOHOCH3CH2CH3甘氨酸丙氨酸缬氨酸亮氨酸异亮氨酸a a 中性氨基酸中性氨基酸R group: hydrocarbonn b b 含羟基或硫氨基酸含羟基或硫氨基酸H2NCHCCH2OHOOHH2NCHCCHOHOOHCH3H2NCHCCH2OHOSHH2NCHCCH2OHOCH2SCH3丝氨酸苏氨酸半胱氨酸甲硫氨酸nc c 酸性氨基酸及其酰胺酸性氨基酸及其酰胺H2NCHCCH2OHOCOHOH2NCHCCH2OHOCH2COHOH2NCHCCH2OHOCH2CNH2OH2NCHCCH2OHOCNH2O天冬氨酸谷氨酸天冬酰胺谷氨酰胺nd d

9、碱性氨基酸碱性氨基酸H2NCHCCH2OHOCH2CH2CH2NH2H2NCHCCH2OHOCH2CH2NHCNH2NH赖氨酸精氨酸n2 2 芳香族氨基酸芳香族氨基酸H2NCHCCH2OHOH2NCHCCH2OHOOHH2NCHCCH2OHOHN苯丙氨酸酪氨酸色氨酸R group has benzene ringR group has indole ringH2NCHCCH2OHONNHHNCOHO组氨酸脯氨酸n3 杂环族氨基酸杂环族氨基酸按按R基的基的极性极性性质可分为以下性质可分为以下4组：组：n 非极性非极性R R基氨基酸基氨基酸nNonpolar Nonpolar R groupsR

10、groupsn丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸n苯丙氨酸、色氨酸n甲硫氨酸n脯氨酸 H2NCHCOOHRn不带电荷的极性不带电荷的极性R R基氨基酸基氨基酸nPolar, uncharged R groupsPolar, uncharged R groupsn丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸n天冬酰胺、谷氨酰胺n半胱氨酸n甘氨酸 n 带正电荷的带正电荷的R R基氨基酸基氨基酸nPositively charged R groupsn赖氨酸、精氨酸n组氨酸（唯一一个R基的pKa值在7附近的氨基酸） n 带负电荷的带负电荷的R R基氨基酸基氨基酸nNegatively charged R groupsNeg

11、atively charged R groupsn天冬氨酸、谷氨酸 氨基酸的简写符号氨基酸的简写符号(一一)名称名称 三字母符号三字母符号 单字母符号单字母符号丙氨酸（丙氨酸（alanine） Ala A精氨酸（精氨酸（arginine） Arg R天冬酰胺（天冬酰胺（asparagine） Asn N天冬氨酸（天冬氨酸（aspartic acid） Asp DAsn和和/或或Asp Asx B半胱氨酸（半胱氨酸（cysteine） Cys C谷氨酰胺（谷氨酰胺（glutamine） Gln Q谷氨酸（谷氨酸（glutamic acid） Glu EGln和和/或或Glu Glx Z甘氨酸（甘

12、氨酸（glycine） Gly G组氨酸（组氨酸（histidine） His H异亮氨酸（异亮氨酸（isoleucine） Ile I氨基酸的简写符号（二）氨基酸的简写符号（二）名称名称 三字母符号三字母符号 单字母符号单字母符号亮氨酸（亮氨酸（leucineleucine） Leu L Leu L赖氨酸（赖氨酸（lysinelysine） Lys K Lys K甲硫氨酸甲硫氨酸( (蛋氨酸蛋氨酸methioninemethionine） Met M Met M苯丙氨酸（苯丙氨酸（phenylalaninephenylalanine） Phe F Phe F脯氨酸（脯氨酸（prolinepr

13、oline） Pro P Pro P丝氨酸（丝氨酸（serineserine） Ser S Ser S苏氨酸（苏氨酸（threoninethreonine） Thr T Thr T色氨酸（色氨酸（tryptophantryptophan） Trp W Trp W酪氨酸（酪氨酸（tyrosinetyrosine） Tyr Y Tyr Y缬氨酸（缬氨酸（valinevaline） Val V Val VSummarySummary（1 1） Nonpolar, aliphatic R groupsNonpolar, aliphatic R groups ：GlyAla、Val、Leu、IlePhe

14、、MetPro、TrpHC-C-C-S-CH3Classification of amino acidsClassification of amino acids （2 2） Polar Polar ：1 1） uncharged R groupsuncharged R groups ：Ser、Thr、TyrAsn、GlnCys；2 2） Positively charged R groupsPositively charged R groups ：His、Lys、Arg3 3） Negatively charged R groupsNegatively charged R groups ：A

15、sp、GluOHSH+-Classification of amino acidsClassification of amino acids nThe 21st amino acid（EMBO J., 1986, 5: 1221-1227; Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1986, 83: 4650-4654）硒半胱氨酸硒半胱氨酸(Sec)Classification of amino acidsClassification of amino acids nThe 22nd amino acid（Science, 2002, 296: 1459-1462; Sc

16、ience, 2002, 296: 1462-1466.）吡咯赖氨酸（吡咯赖氨酸（Pyl）HNCOHOH2NCHCCH2OHOCH2CHOHCH2NH2OH羟赖氨酸羟脯氨酸1.2.2 1.2.2 不常见的蛋白质氨基酸不常见的蛋白质氨基酸Uncommon amino acidsUncommon amino acids1.2.3 1.2.3 非蛋白质氨基酸非蛋白质氨基酸Non-protein amino acidsNon-protein amino acids 除了参与蛋白质组成的20-3020-30种氨基酸外，还有150多种其他氨基酸: L型-氨基酸的衍生物-、-或-氨基酸D型氨基酸氨基酸晶体、

17、水溶液 中性分子形式：H2NCRCOOHHuncharged (nonionic)1.3 1.3 氨基酸的酸碱化学氨基酸的酸碱化学Amino acid ionizationAmino acid ionization1.3.1 1.3.1 氨基酸的兼性离子形式氨基酸的兼性离子形式+H3NCRCOO-H晶体熔点很高，200以上；使水的介电常数升高。Amino acid ionizationAmino acid ionizationZwitterions 两性离子，兼性离子两性离子，兼性离子HH21.3.2 1.3.2 氨基酸的解离氨基酸的解离+H3NCRCOO -HH+H2NCRCOO -HAmi

18、no acid ionizationAmino acid ionizationAcidH+H3NCRCOO -H+H3NCRCOOHHAmino acid ionization Amino acid ionization BaseH2NCRCOO -H+H3NCRCOO -H+H3NCRCOOHHKa1Ka2+ H + H +兼性离子（Ao）阳离子（A+）阴离子（A-）+ O H -+ O H -Amino acid ionizationAmino acid ionizationCatioCation nZwitterionZwitterionAnionAnionKa1 =A0 H+A+A+

19、A0 + H+Ka1First,Amino AcidsAmino AcidsKa2 =A- H+A0Second,A0 A- + H+Ka2Amino AcidsAmino AcidsA0H+A+Ka1A0A -Ka2H+Amino acid ionizationAmino acid ionizationA+=A0pKa1=2.34A0=A-pKa2=9.60pI=5.970OH- mol数H+mol数pH02468101214甘氨酸的滴定曲线（解离曲线）Amino acid ionizationAmino acid ionizationCOOHCHH3N+RCOO-CHH3N+RCOO-CH

20、H2NR-+H+H+H+H+-Amino acids can be diprotic and triprotic acids.(The amino acids of neutral side chains are diprotic acids when fully protonated.)Amino acid ionizationAmino acid ionization1.3.2 1.3.2 氨基酸的解离氨基酸的解离 Amino Acid DissociationAmino Acid Dissociationn20种基本氨基酸，除组氨酸外，在生理pH下都没有明显的缓冲作用，其pKa都不在pH

21、7附近。n组氨酸组氨酸咪唑基的咪唑基的pKa值为值为6.0，在，在pH7附附近，有明显的缓冲作用近，有明显的缓冲作用。Amino Acid DissociationAmino Acid DissociationHis 57General acid form:General base form:n利用Handerson-Hasselalch公式，可算出在任一pH条件下一种氨基酸的各种离子的比例：n 质子受体npH = pKa + log -n 质子供体Amino Acid DissociationAmino Acid DissociationSummary:Amino Acid Amino Ac

22、id DissociationDissociation 几种氨基酸的解离常数和等电点几种氨基酸的解离常数和等电点氨基酸氨基酸-COOH pKa-N +H 3 pKaR基基pKapI甘氨酸甘氨酸2.349.60 5.97丙氨酸丙氨酸2.349.69 6.02天冬氨酸天冬氨酸2.099.823.86(COOH)2.97天冬酰胺天冬酰胺2.028.8 5.41精氨酸精氨酸2.179.0412.48(胍基胍基)10.76组氨酸组氨酸1.829.16.00（咪唑基（咪唑基7.59There is a specific pH at which an amino acid has equal positiv

23、e and negative charge.The characteristic pH at which the net electric charge is zero is called the isoelectric point or isoelectric pH, designated(指定为，称为指定为，称为) pI.An amino acid does not move in an electric field（电场）（电场） at its pI.Amino Acid DissociationAmino Acid Dissociation Isoelectric point of a

24、mino acids氨基酸的等电点氨基酸的等电点 （Isoelectric Point, pI）n对R侧链基不解离的氨基酸：npI = (pKa1+pKa2)Amino Acid DissociationAmino Acid DissociationThe dissociation of R groupAmino Acid DissociationAmino Acid Dissociationn计算：n1. 酸性氨基酸天门冬氨酸的等电点n2. 碱性氨基酸如精氨酸的等电点Amino Acid DissociationAmino Acid Dissociation1.3.4 1.3.4 氨基酸的甲

25、醛滴定氨基酸的甲醛滴定Formaldehyde Titration of Amino Acid Formaldehyde Titration of Amino Acid 滴定是定量分析的常用方法，甲醛滴定法原理：COO-CH2NH3+COO-CH2NH2COO-CH2NHCH2OHCOO-CH2N (CH2OH)2pKa2HCHOHCHO+ H+Formaldehyde Titration of Amino Acid Formaldehyde Titration of Amino Acid 3.4 3.4 氨基酸的化学反应氨基酸的化学反应Amino Acid Chemical Reaction

26、 Amino Acid Chemical Reaction 3.4.1 3.4.1 -氨基参加的反应氨基参加的反应3.4.1.1 3.4.1.1 与亚硝酸反应与亚硝酸反应这是这是Van SlykeVan Slyke法测定氨基酸的基础。法测定氨基酸的基础。RCHNH2COOH+HNO2RCHOHCOOH+ H2O+ N23.4.1.2 3.4.1.2 与酰化试剂反应与酰化试剂反应CH2OCOClH2NCHCOONaR在弱碱中（后酸化）苄氧酰氯苄氧酰氨基酸CH2OCONHCHCOONaR+ Na+ + Cl-+这些酰化试剂在多肽和蛋白质的人工合成中被用这些酰化试剂在多肽和蛋白质的人工合成中被用作氨

27、基的保护试剂。作氨基的保护试剂。3.4.1.3 3.4.1.3 烃基化反应烃基化反应FO2NNHCHO2NDNP-氨基酸（黄色）H2NCHCOOHRNO2NO2COOHR+在弱碱中+ F-DNFB生成二硝基苯基氨基酸。被英国的生成二硝基苯基氨基酸。被英国的SangerSanger用来用来鉴定多肽蛋白质的鉴定多肽蛋白质的N N末端氨基酸：末端氨基酸：称称Sanger Sanger 试剂试剂。 与苯异硫氰酸酯（与苯异硫氰酸酯（PITCPITC，Edman reagent Edman reagent 试剂试剂）反应，）反应，EdmanEdman用来鉴定多肽或蛋白质的用来鉴定多肽或蛋白质的N N端氨基

28、酸。端氨基酸。NCSH2NCHCOOHR在弱碱中+NHCNHCCHOOHRSNCOCCNHSHRH+(CH3NO2)苯异硫氰酸酯苯氨基硫甲酰衍生物 （PTC-氨基酸）苯乙内酰硫脲衍生物 （PTH-氨基酸） Edman degradationAmino Acids Sequence AnalysisAmino Acids Sequence Analysis3.4.1.4 3.4.1.4 形成西佛碱反应形成西佛碱反应 3.4.1.5 3.4.1.5 脱氨基反应脱氨基反应3.4.2 3.4.2 -羧基参加的反应羧基参加的反应3.4.2.1 3.4.2.1 成盐和成酯反应成盐和成酯反应NH2CHCOO

29、HRNH2CHCOOC2H5R+C2H5OH干燥，HCl回流+ H2O3.4.2.2 3.4.2.2 成酰氯反应成酰氯反应HNCHCOOHRHNCHCOOCIR+PCl5+ POCl3 + HCl保护基保护基这个反应可使氨基酸的羧基活化3.4.2.3 3.4.2.3 脱羧基反应脱羧基反应NH2CHCOOHRCH2NH2R+ CO2脱羧酶一级胺3.4.3 3.4.3 -氨基和氨基和-羧基共同参加的反应羧基共同参加的反应n3.4.3.1 3.4.3.1 与茚三酮反应与茚三酮反应CCCOOCCCOOCCCOOO HO H+H3NCCO O HHR+ N H3 + CO2 + RCH O + H +C

30、CCOOO HHCCCOOO HO HNH茚 三 酮还 原 茚 三 酮第 二 个 茚 三 酮紫 色 复 合物 的 两 个共 振 形 式CCCOOCCCOO-N与与茚茚三三酮酮反反应应3.4.4 3.4.4 侧链侧链R R基参加的反应基参加的反应有些反应是蛋白质化学修饰的基础NNNNHOCH2CHNH2COOHHO3SHO3SPauly反应，可用于检测酪氨酸半胱氨酸半胱氨酸-SHSH，反应性能很高反应性能很高在微碱性在微碱性pHpH下，下，-SHSH基发生解离形成硫醇阴离子基发生解离形成硫醇阴离子 （-CHCH2 2S-S-）并可进一步与并可进一步与烷化剂烷化剂反应生成稳定的烷基衍生物：反应生成

31、稳定的烷基衍生物：-OOCCHCH2NH3+S-OOCCHCH2NH3+SCH2COO-+ I-+ ICH2COO-半胱氨酸碘乙酸羧甲基半胱氨酸侧链侧链R R基参加的反应基参加的反应与乙撑亚胺乙撑亚胺反应HOOCCHNH3+CH2SHH2CH2CNHHOOCCHNH3+CH2SCH2CH2NH3+ H+氮丙啶S-氨乙基半胱氨酸 ( AECys)+ 用于序列测定用于序列测定( (为胰蛋白酶提供了一个新位点为胰蛋白酶提供了一个新位点) ) 用来保护肽链上的用来保护肽链上的SHSH基，以防止被重新氧化为基，以防止被重新氧化为二硫基二硫基胱氨酸中的二硫键在稳定蛋白质的构象上起很大的作用。氧化剂和还原剂

32、都可打开二硫键: 如过甲酸过甲酸和巯基化巯基化合物合物H2NHCCOOHCH2SSCH2CHH2NCOOHH2NHCCOOHCH2SO3HH2NHCCOOHH2CSH6HCOOOH2R-SH22+ 6HCOOHRSSR侧链侧链R R基参加的反应基参加的反应 二硫键的打开和生成是烫发的基础二硫键的打开和生成是烫发的基础侧链侧链R R基参加的反应基参加的反应3.5 3.5 氨基酸的光学活性和光谱性质氨基酸的光学活性和光谱性质Amino acid Optical activity and spectrum Amino acid Optical activity and spectrum charac

33、terscharactersn3.5.13.5.1氨基酸的光学活性和立体化学氨基酸的光学活性和立体化学n-氨基酸的-碳是一个不对称碳nD型和L型n氨基酸的构型以D性甘油醛为参考物。氨基酸的光学活性和立体化学氨基酸的光学活性和立体化学COO-CCH3+H3NHCHOCCH2OHHOHCOO-CCH3H+H3NCHOCCH2OHHHOCOO-CCH3HNH3+COO-CCH3+H3NH=D-甘油醛D-丙氨酸L-甘油醛L-丙氨酸ThrThr、LeuLeu、ProPro和羟和羟ProPro还有第二个不对称碳原子。还有第二个不对称碳原子。n3.5.2 氨基酸的光谱性质氨基酸的光谱性质n3.5.2.1 紫

34、外吸收光谱紫外吸收光谱n常见的20种氨基酸在可见光区域都没有光吸收n在红外和远紫外（200nm）都有光吸收. 氨基酸的光谱性质氨基酸的光谱性质n芳香族氨基酸芳香族氨基酸因为其因为其R R基含有苯环共轭基含有苯环共轭键系统，故在近紫外区（键系统，故在近紫外区（200-400200-400nmnm）有有光吸收的能力光吸收的能力. .nn蛋白质一般在蛋白质一般在280280nmnm有最大光吸收，可用有最大光吸收，可用来测定蛋白质浓度。来测定蛋白质浓度。 光的互补和色环光的三原色 颜料的三原色 Absorption of ultraviolet light by aromatic amino acid

35、sI0I分光光度法分光光度法的原理是的原理是Lamber-Beer定律定律： A = log I0 /I = - log T = cl T= I/I0 A： 吸光值（absorbance） （光密度, optical density,OD）： 摩尔吸收系数（摩尔消光系数） c： 摩尔浓度 l： 比色杯的内径或光程厚度 I0： 入射光强 I： 透射光强 T： 透光率A = cl3.6 3.6 氨基酸混合物的分析分离氨基酸混合物的分析分离n要测定蛋白质的氨基酸组成或从蛋白质水解液中制取氨基酸，须对氨基酸进行分析分离。n3.6.1 分配层析法的一般原理分配层析法的一般原理nThe principle

36、 of partitive chromatographyThe principle of partitive chromatography n层析层析 即色层分析,也称色谱 (Chromatography)n层析的种类：层析的种类： 吸附层析 离子交换层析 分配层析 分子筛层析 亲和层析等n分配层析依据的是分配定律分配层析依据的是分配定律纸纸层层析析水+正丁醇水+正丁醇水： 极性大，固定相正丁醇：极性小，流动相水正丁醇极性大小？极性大小？滤纸分配定律分配定律( (partition law)partition law)：当一种物质在两种给定的互不相容的溶剂中分配时，在一定温度下达到平衡时，溶质

37、在两相中的浓度比值为一常数，即分配系数分配系数( (Kd)Kd)。 K Kd d = = C CA A/ /C CB B分配层析法的一般原理分配层析法的一般原理n某一物质在层析系统中的行为取决于有效分配某一物质在层析系统中的行为取决于有效分配系数系数 n nK Keffeff = = 某一物质在某一物质在A A相中的总量相中的总量/ /某一物质在某一物质在B B相中的总量相中的总量nn溶质的有效分配系数可以调整两项的体积比而溶质的有效分配系数可以调整两项的体积比而加以改变。加以改变。n分配层析法的一般原理分配层析法的一般原理分配层析法的一般原理分配层析法的一般原理n（逆流分溶或逆流分配）：3.

38、6.2 分配柱层析分配柱层析3.6.3 纸层析纸层析n3.6.4 薄层层析薄层层析n将支持剂（硅胶、纤维素粉等）涂布在玻璃板上制成均匀的薄层n分辨率高 所需样品极微 层析速度快3.6.5 3.6.5 离子交换层析离子交换层析Ion-exchange column chromatographyIon-exchange column chromatographyn氨基酸是两性电解质：氨基酸是两性电解质：n同一种氨基酸在不同同一种氨基酸在不同pHpH下带电状态不同下带电状态不同n不同氨基酸在同一不同氨基酸在同一pH pH 下带电状态不同下带电状态不同Ion-exchange column chrom

39、atographyIon-exchange column chromatographyCation groupCation group / /MatrixMatrixAnion groupAnion group/MatrixMatrixIon-exchange column chromatographyIon-exchange column chromatographyn基质基质( (matrix)-matrix)-聚苯乙烯聚苯乙烯苯二乙烯苯二乙烯- -不不溶性高分子化合物溶性高分子化合物n酸性酸性或或碱性碱性基团基团Ion-exchange column chromatographyIon-

40、exchange column chromatographyn阳离子阳离子交换树脂，含有酸性集团交换树脂，含有酸性集团 SOSO3 3H H（强酸型）强酸型） COOHCOOH（弱酸型）弱酸型）n在酸性环境中的氨基酸阳离子，可以和在酸性环境中的氨基酸阳离子，可以和H H+ +发生交换而发生交换而“结合结合”在树脂上在树脂上Ion-exchange column chromatographyIon-exchange column chromatographyIon-exchange column chromatographyIon-exchange column chromatographyn阴

41、离子交换树脂含有的碱性基团 N(CH N(CH3 3) )3 3OHOH（强碱型）强碱型） NH NH3 3OHOH（弱碱型）弱碱型）n可解离出OH-n能与溶液里的阴离子交换而结合在树脂上n分离氨基酸-强酸性离子交换树脂强酸性离子交换树脂n氨基酸在树脂上的牢固程度： 静电吸引静电吸引 疏水作用疏水作用Ion-exchange column chromatographyIon-exchange column chromatographyIon-exchange column chromatographyIon-exchange column chromatographyn在在pH3pH3左右，氨

42、基酸与阳离子交换树脂之左右，氨基酸与阳离子交换树脂之间的静电吸引力的大小次序是：间的静电吸引力的大小次序是：n碱性氨基酸（碱性氨基酸（A A2+2+）中性氨基酸中性氨基酸( (A A+ +) )酸性氨基酸（酸性氨基酸（A A- -）。）。n洗脱氨基酸的有效方法是洗脱氨基酸的有效方法是n逐步提高洗脱剂的逐步提高洗脱剂的pHpH和盐浓度（离子强和盐浓度（离子强度）度）。 I Ion-exchange chromatographyon-exchange chromatographyI Ion-exchange chromatographyon-exchange chromatographyn3.6.

43、6 3.6.6 气液层析气液层析n当层析系统的当层析系统的流动相为气体流动相为气体（如氢，氦、（如氢，氦、氮），固定相为涂渍在固体颗粒表面的氮），固定相为涂渍在固体颗粒表面的液体液体时，称为气液层析或气 液 色 谱时，称为气液层析或气 液 色 谱( (gasliquid chromatography)gasliquid chromatography)，简称简称气相层析气相层析或或气相色谱气相色谱。n待分析的待分析的样品被气化样品被气化，气化了的样品将，气化了的样品将在在流动的气相和固定的液体流动的气相和固定的液体之间发生分之间发生分配而被分离。被分开的组分和载气直接配而被分离。被分开的组分和载气直接进入检测器。进入检测器。n气相层析法具有微量快速的优点，限制气相层析法具有微量快速的优点，限制是要求样品是要求样品能气化能气化和热稳定性高和热稳定性高。n高压液相层析(high pressure liquid chromatography)。特点： 使用的固定相支持剂颗粒很细颗粒很细，因而表面积很大； 溶剂系统采取高压高压，因此洗脱速度增大。n多种类型多种类型的柱层析的柱层析都可用HPLCHPLC来代替: 分配层析 离子交换层析 吸附层析 凝胶过滤3.6.7 3.6.7 高效液相层析高效液相层析high perf