疟原虫血片制作及染色

1、疟原虫血片制作与染色云南省寄生虫病防治所赵晓涛血膜制作血膜染色影响染色效果的因素主要内容用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂呈用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂呈薄膜状，称薄膜状，称薄血膜；一种是血液涂成圆盘状，称；一种是血液涂成圆盘状，称厚血膜。厚血膜上的血细胞是重叠堆积在玻片上面，而。厚血膜上的血细胞是重叠堆积在玻片上面，而薄血膜上的血细胞则要求平辅在玻片上面。薄血膜上的血细胞则要求平辅在玻片上面。门诊或现场发热病人血片门诊或现场发热病人血片标本片标本片厚血膜用血量约为4l5l,涂制成直径0.8 1cm的厚血膜,由于在制备过程中红细胞已溶解，疟原虫在形态上仍可分辨，但胞浆

2、和胞核不可避免地形成一定程度的固缩。受影响较大的有大、裂殖体的形态。由于厚血膜与薄血膜相比血量大，须查范围小，节省时间，阳性检出率较高。厚血膜能查出疟原虫数是薄血膜的1525倍。所以，我们推荐疟疾诊断（门诊检验及现场普查）应以检查厚血膜为主。薄血膜用血量约为1-1.5l，涂制成2cm宽2.5cm长面积的薄血膜。由于在制备过程中，血片通常经甲醇固定，使红细胞及其内疟原虫的形态保持完整，适用于对疟原虫虫种的鉴定。由于用血量少，为保证检测的敏感性，常耗时较多，不适用于大规模调查。特别在医院的检验室，由于要求在短时间内作出诊断，因而极有可能出现漏诊。取血时机 现症病人一般可随时取血，疟疾普查时可不考虑

3、取血时机。但在诊断或需要某期疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。间日疟前驱期相当于肝内期疟原虫发育，因原虫密度太低， 镜检多为阴性。发冷（寒战）期相当于红内期成熟裂殖体涨破 红细胞期，镜检多为裂殖体和环状体。发热期外周血中以环状体（小滋养体）为主，也可见到裂殖 体；出汗期因原虫密度太低，镜检多为阴性。发作后数小时，间歇期外周血中以大滋养体为主，形态较易辩认，为诊断的有 利时机；发作36-48h，可检出裂殖体；发作1-2次后，配子体出 现较多。恶性疟较理想的取血时间是在发作后至 20h内取血，发作后2小时左右，此时环状体发育至最高峰，初发患者退热后常查不到原虫。末梢血血检到恶性疟原虫配子体，

4、是在末梢血出现环状 体之后的7-10天。一次性采血针、75%酒精、棉棒（球）,载玻片，推片，记号笔或铅笔。 血涂片质量评价： 血膜均匀、厚薄度合适、无空泡、无划痕 薄血膜头体尾位置和形状好、无停顿起伏、两侧留出空间注意：血滴大，速度快、角度大 血膜厚 血滴小，速度慢、角度小 血膜薄标本片发热病人血片标签标签 厚、薄血膜的位置厚、薄血膜的位置 每张载玻片上可做1个薄血膜和1个厚血膜，如图 2.5cm 2.5cm各种不同的疟疾血片涂制法：各种不同的疟疾血片涂制法：标准血片标准血片门诊发热病人血片门诊发热病人血片居民普查血片居民普查血片吉氏染色血片外观吉氏染色血片外观偏偏 酸酸偏偏 碱碱标标 准准

5、1、吉氏染液的配制：、吉氏染液的配制：这是目前最常用的疟原虫染色剂，它具有方便、染色效果稳定的优点，也是我们推荐的染色方法。 将吉氏粉5g置于研钵中，加入少量甘油充分研磨，然后边加边磨，至甘油250ml加完为止，倒入500ml有塞玻璃瓶中。在研钵中加入少量甲醇，洗掉剩余部分，倒入瓶内，再次加甲醇，洗后再倒入瓶中，至甲醇250ml洗清研钵中甘油为止。塞紧瓶塞，充分摇匀，置室温内，每天用力摇动溶液5分钟，3天后即可使用。 也可在带有紧口瓶塞的硬质玻璃瓶中放入约50个玻璃珠（直径3 5mm），用玻璃漏斗把甘油灌入瓶中，再把吉氏粉放入漏斗中，用甲醇缓慢地把所有染料粉冲入瓶内，塞紧瓶塞，置于室温内，每天

6、用力摇动5分钟，3天后即可使用。吉氏染液染色方法：吉氏染液染色方法： 先用先用甲醇甲醇固定固定薄血膜薄血膜，待干后进行染色。亦可，待干后进行染色。亦可在固定薄血膜后用清水对厚血膜溶脱血红蛋白，然在固定薄血膜后用清水对厚血膜溶脱血红蛋白，然后才进行染色。后才进行染色。 成批血片染色：将已固定薄血膜的血片插入染色缸，倒入2%吉氏染液稀释液（2毫升原液加中性蒸馏水98毫升稀释均匀即成），同时对厚薄血膜染色30分钟，然后用清水注入染缸将染液通过溢出方式洗去，再用清水浸洗1-2次，干净后将血片标本（血膜面朝下）插于晾干板上，待干后镜检。 单张血片染色单张血片染色：薄血膜经固定干燥后，用中性蒸馏水（或娃哈

7、哈矿泉水）1ml，加吉氏母液12滴，混合均匀后滴入血片标本上，染色1020分钟，然后用清水轻轻将片上的染液冲洗干净，晾干镜检。2、瑞式染液的配制：、瑞式染液的配制：将瑞氏染剂粉1g置于研钵内，加入15ml甘油充分研磨后，倒入有塞玻璃瓶中，再用500ml甲醇洗出研钵中的甘油溶液，倒入瓶中，摇匀后，置室温下，每天摇动5分钟，3天后即可使用。 此方法染色的时间短，但染色效果不如吉氏染液效果稳定，又不能大量血片染色，常用于门诊应急情况下血片染色。瑞氏染液的染色方法：瑞氏染液的染色方法： 血片染色好坏除了与玻片是否清洁，血片染色好坏除了与玻片是否清洁，血片制作质量好坏等有关外，还受到以下血片制作质量好坏

8、等有关外，还受到以下几个因素的影响：几个因素的影响：1. 染料溶剂的质量：染料、甲醇和甘油如果不纯，常使配制的染液偏酸或偏碱而影响染色效果。因此必须用分析纯的甲醇和中性甘油，而且在配制时所用的器具必须干净而无水份。2. 染液的新旧：新配制的染液因色素尚未充分溶解，染色力较弱且常有沉渣。染液存放时间越久，染色力越强。通常在染液配制12周后才使用，盛装染液的瓶子应加塞盖密。以防吸潮而影响染液质量。3.染液的稀释浓度：染液的浓度高其着色就快而深，染色时间相对缩短，疟原虫寄生红细胞的薛氏点粗大显著，但颜色常偏蓝；染液浓度过低则染色时间相对长一些，颜色偏酸红，薛氏点不明显或消失。4.染液稀释后使用时间：染液的主要成份是美蓝、伊红和由美蓝氧化产生的天青，三者能在醇溶液中溶解，但在水溶液中伊红遇到美蓝和天青即产生沉淀。因此，必须在稀释染液当时使用，一般在30分钟内染色力最强。5. 较差如果你染色的质量不高应该做些什么？首先，检查每一个技术步骤是否合理？如采