第五章分光光度法

1、第五章第五章 4 4 分光光度法分光光度法 分光光度法分光光度法是根据物质的是根据物质的吸收光谱吸收光谱和和光的吸光的吸收定律收定律，对物质进行定量，对物质进行定量、定性分析的一种仪器分析定性分析的一种仪器分析方法。方法。所选用的光源所选用的光源 紫外分光光度法可见分光光度法红外分光光度法一、物质对光的选择性吸收和吸收光谱一、物质对光的选择性吸收和吸收光谱（一）物质的颜色和光的波长的关系（一）物质的颜色和光的波长的关系光是一种电磁波。自然光是由光是一种电磁波。自然光是由 不同的电磁波不同的电磁波组成的混合光。组成的混合光。可见光，可见光， 在在400760nm范围。（见表范围。（见表5-4）可

2、见光的电磁波谱图可见光的电磁波谱图紫紫400红红660橙橙600黄黄560绿绿530青蓝青蓝450蓝蓝420青青500互补色光互补色光：黄光和蓝光；黄光和蓝光；紫光和绿光。紫光和绿光。溶液的颜色溶液的颜色实质实质是是它所吸收的色光的互补色它所吸收的色光的互补色。如：日光照射如：日光照射KMnO4，其中，其中绿光绿光被吸收，被吸收，故溶液呈故溶液呈紫色紫色。 CuSO4呈呈蓝色蓝色是由于溶液吸收了是由于溶液吸收了黄光黄光。溶液越浓，光选择吸收越多，颜色越深溶液越浓，光选择吸收越多，颜色越深比较溶液颜色的深浅，比较溶液颜色的深浅，实质实质比较溶液对光的比较溶液对光的吸收程度吸收程度。 max=51

3、9 A480 520 560nm 最大吸光度相对最大吸光度相对应的波长称为应的波长称为最最大吸收波长大吸收波长 ， max（二）吸收光谱曲线（二）吸收光谱曲线横坐标横坐标 ；纵坐标；纵坐标A A。 同种物质，同种物质，C不同，但不同，但 max都相同都相同定性分析定性分析 溶液的浓度愈大吸收光愈溶液的浓度愈大吸收光愈强强定量分析定量分析 max二、光的吸收定律二、光的吸收定律otIIT A = -lgT =lg toII透光率透光率吸光度吸光度I0ItIrIa透光率愈大，溶液对光的吸收愈少透光率愈大，溶液对光的吸收愈少吸光度愈大，溶液对光的吸收愈多吸光度愈大，溶液对光的吸收愈多单位单位b 液层

4、厚度：液层厚度：cmc 物质的量浓度：物质的量浓度：mol L-1 摩尔吸光系数摩尔吸光系数：L mol-1 cm-1A = a b 单位单位b 液层厚度：液层厚度：cm 质量浓度：质量浓度：g L-1a 质量吸光系数质量吸光系数：L g-1 cm-1Lambert- Beer 定律定律A = b c = a M例例5-5 解：解： （1） A = a b 0.22 = a 2 140 10-6 a = 785.7L/g cm （2） = a M = 785.7 112.4 = 8.83 104 L/mol cm （3 A = - lgT = 0.22 lgT = -0.22， T = 10-

5、0.22 = 0.60 = 60%例例1 Cd2+浓度为浓度为140m mg/L，双硫腙法显色测定波长为，双硫腙法显色测定波长为520nm，液层厚度，液层厚度2cm，吸光度为，吸光度为0.22，求，求a、 和和T三、分光光度计三、分光光度计分光光度计四大系统分光光度计四大系统光源系统光源系统 检测检测 器器 吸收吸收 池池分光系统分光系统数据处理器数据处理器四、定量分析法四、定量分析法（一）标准曲线法（一）标准曲线法根据Lambert-Beer定律定律， A与与C成正比成正比配制一系列标准液配制一系列标准液C1、C2、C3，在在 max下，测相应的下，测相应的A1、A2、A3。AxCxc（mg

6、/L）A =550nm 40 80 120 2000.60.40.20.0（二）标准对照法（二）标准对照法配制与被测液（C样）相近浓度标准液（C标），在max分别测得A标、A样。A样A标=C样C标A样A标=C样C标例例5-6（三）测量条件的选择（三）测量条件的选择入射光波长的选择入射光波长的选择选择波长为选择波长为 max的光作为入射光的光作为入射光1、 在在 max处，溶液的吸光度处，溶液的吸光度最大，测定的最大，测定的灵敏度灵敏度最高。最高。2、在、在 max附近，吸光度与附近，吸光度与浓度成浓度成线性线性关系。关系。吸光度读书范围的选择吸光度读书范围的选择（三）测量条件的选择（三）测量条

7、件的选择溶液透光度值：溶液透光度值：T =2065% (吸光度吸光度 A =0.700.20)。参比溶液的选择参比溶液的选择（三）测量条件的选择（三）测量条件的选择1. 溶剂空白溶剂空白2. 试剂空白试剂空白3. 试样空白试样空白空白溶液空白溶液小结小结u 基本概念基本概念：A、T、 、a及其关系及其关系u Lambert-Beer定律定律以及应用以及应用u分光光度法应用分光光度法应用定性、定量测定定性、定量测定u测定方法：测定方法：标准曲线法标准曲线法、标准对照法、标准对照法思考题思考题: :1、若将某波长的单色光通过液层厚度为、若将某波长的单色光通过液层厚度为1.00cm的溶液，则透过光强度为入射光强度的的溶液，则透过光强度为入射光强度的1/4，问，问当该溶液液层厚度为当该溶液液层厚度为2.00 cm时，透光率（时，透光率（T）和）和吸光度（吸光度（A）为多少）为多少?2、相对分子量为、相对分子量为180的某物质，其摩尔吸光系数的某物质，其摩尔吸光系数