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文档简介
1、细菌常见的生化反应试验()什么是生化试验 ?指通过利用生物化学的方法来测定微生物的代谢产物、代谢方式和条件等来鉴别细菌的类别、属种的试验。生化试验或称生化反应:细菌的酶不完全相同, 对营养物质的分解能力不一致, 因此其代谢产物各异。 在培养 基中加入可与被测终产物反应的指示剂,产生肉眼可见的变化,如颜色的改变等,利用生化方法来鉴定细菌的 试验,统称为细菌的生化试验或称生化反应(二) 生化试验的方法:1在培养物中加入某种底物与指示剂 ,经接种、培养后,观察培 养基的pH值变化。2在培养物中加入试剂,观察它们同细菌代谢产物所生成的颜色反应。3根据酶作用的反应特性,测定酶的存在。4根据细菌对理化条件
2、和药品的敏感性,观察细菌的生长情况。(三)生化试验的注意事项1. 待检菌应是新鲜培养物,培养1824h。2. 待检菌应是纯种培养物。3. 遵守观察反应的时间。观察结果的时间,多为24或48小时。4. 应做必要的对照试验。5. 提高阳性检出率,至少挑取23待检的疑似菌落分别进行试验。(四)检验细菌的生化试验范围:1、糖(醇)类代谢试验2 、氨基酸和蛋白质代谢试验3、有机酸盐和铵盐的利用试验4、呼吸酶类试验5、毒性酶类试验二、糖醇类代谢试验(一)糖醇类发酵试验(二)葡萄糖氧化发酵(0/F)试验(三)V-P试验(四)甲基红(Methyl Red )试验 MR(五)七叶苷水解试验(六)甘油品红试验(一
3、) 糖醇类发酵试验1、原理:不同的细菌对各种糖醇的分解能力及所产生的代 谢产物各不同,有的能分解多种糖 (醇),有的只能分解 12 种糖(醇),有的分解糖(醇)能产酸产气,有的分解糖 (醇)只 产酸不产气,根据这些特点,可鉴别细菌。常用的糖醇单糖:葡萄糖、甘露糖醇、木糖、半乳糖鼠李糖双糖:乳糖、蔗糖、麦芽糖、蕈糖三糖:棉子糖多糖:菊糖、肝糖、淀粉醇类:甘露醇、山梨醇、肌醇、卫茅醇2试验方法:用接种针或环移取纯培养物少许,接种于糖发酵管中,若为半固体培养基,则用接种针作穿刺接种。置36 1.0 C培养13天,每天观察结果。3、结果观察和记录:?产酸产气,阳性,以“”表示?不产酸产气,阴性,以“”
4、表示sf*、气rr-阳性性阳性+I冶1車羽宓为董俠 - 阴哇-阴叶应用:沙门氏菌可发酵葡萄糖但不发酵乳糖。大肠埃希菌可 发酵葡萄糖及乳糖。有些菌可发酵同一种糖类,其发酵产生的代谢产物也不尽相 同。如大肠埃希菌和志贺菌均可发酵葡萄糖,但前者产酸产 气,而后者仅产酸,故可利用此试验来鉴定细菌。(二)葡萄糖氧化发酵 OF试验 1、原理:细菌对葡萄糖的分解,分为氧化型和发酵型。氧化型细菌在有氧的条件下才能分解葡萄糖,无氧的条件下 不能分解葡萄糖;发酵型细菌在有氧无氧条件下均可分解葡萄糖;不分解葡萄糖的细菌称为产碱型。根据糖管的色泽变化可鉴别细菌。2、方法:取待检菌,以穿刺法接种于两管葡萄糖半固体培养基
5、上,在其中一管加入一层(约 1cm )灭菌的液体石蜡以隔绝空气, 在37 C培养24h天,每天观察结果。应用:可用于鉴别肠杆菌科细菌(发酵型)与非发酵菌(氧 化型或产碱型)。也可用于鉴定葡萄球菌(发酵型)和微球 菌(氧化型)。3、结果观察与记录产酸 典代产酸C黄色、不产酸C專苗)产橄型不产酸C绿色不产酸t绿电(三)V-P试验1、原理:某些细菌能分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸经缩合、脱羧生成乙酰甲基甲醇,后者在强碱环境下,被空气中的02氧化为二乙酰,在a -萘酚和肌酸的催化作用下,二乙酰与培养基中的蛋白胨中精氨酸等所含的胍基生成红色化合物,即V-P试验阳性,称V P( +)反应。应用:本试验常与甲
6、基红试验一起使用。二者结果通常相反。即如大肠埃氏菌、沙门菌、志贺菌等甲基红呈阳性反应,而VP反应则为阴性。沙雷菌、阴沟肠杆菌等,VP反应为阳性, 而甲基红反应为阴性。2、试验方法(1)奥梅拉(0 Meara)法 (2)贝立脱(Barritt )氏法(3)快速法(1)奥梅拉法将试验菌接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基,于36 1 C培养48h , 每1mL培养液加奥梅拉 0 Meara试 剂0.1ml,摇动试管12min,静置于37C恒温箱4h , 或在4850 C水浴放置2h后判定结果。(2) 贝立脱法将试验菌接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基,于36 1C培养2天,每2mL培养液先加入6%a-萘酚纯酒 精溶液1mL,再加40%氢氧化钾水溶液 0.4ml,摇动 25min ,阳性菌常立即呈现红色, 若无红色出现,静置 于室温或36 1 C培养4h,如显现红色为阳性,呈 黄色或有类似铜色者,可判定为阴性。(3) 快速法将0.5%肌酸溶液2滴放于小试管中,挑取产酸反应的 三糖铁琼脂斜面培养物一接种环,乳化接种于其中,加入5% a -萘酚3滴,40%氢氧化钠水溶液2滴,振动后 放置5min,判定结果。不产酸的
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