细菌常见的生化反应试验

1、细菌常见的生化反应试验()什么是生化试验 ？指通过利用生物化学的方法来测定微生物的代谢产物、代谢方式和条件等来鉴别细菌的类别、属种的试验。生化试验或称生化反应：细菌的酶不完全相同， 对营养物质的分解能力不一致， 因此其代谢产物各异。 在培养 基中加入可与被测终产物反应的指示剂，产生肉眼可见的变化，如颜色的改变等，利用生化方法来鉴定细菌的 试验，统称为细菌的生化试验或称生化反应(二) 生化试验的方法：1在培养物中加入某种底物与指示剂 ，经接种、培养后，观察培 养基的pH值变化。2在培养物中加入试剂，观察它们同细菌代谢产物所生成的颜色反应。3根据酶作用的反应特性，测定酶的存在。4根据细菌对理化条件

2、和药品的敏感性，观察细菌的生长情况。（三）生化试验的注意事项1. 待检菌应是新鲜培养物，培养1824h。2. 待检菌应是纯种培养物。3. 遵守观察反应的时间。观察结果的时间，多为24或48小时。4. 应做必要的对照试验。5. 提高阳性检出率，至少挑取23待检的疑似菌落分别进行试验。（四）检验细菌的生化试验范围:1、糖（醇）类代谢试验2 、氨基酸和蛋白质代谢试验3、有机酸盐和铵盐的利用试验4、呼吸酶类试验5、毒性酶类试验二、糖醇类代谢试验（一）糖醇类发酵试验（二）葡萄糖氧化发酵（0/F）试验（三）V-P试验（四）甲基红（Methyl Red ）试验 MR（五）七叶苷水解试验（六）甘油品红试验（一

3、） 糖醇类发酵试验1、原理：不同的细菌对各种糖醇的分解能力及所产生的代 谢产物各不同，有的能分解多种糖 （醇），有的只能分解 12 种糖（醇），有的分解糖（醇）能产酸产气，有的分解糖 （醇）只 产酸不产气，根据这些特点，可鉴别细菌。常用的糖醇单糖：葡萄糖、甘露糖醇、木糖、半乳糖鼠李糖双糖：乳糖、蔗糖、麦芽糖、蕈糖三糖：棉子糖多糖：菊糖、肝糖、淀粉醇类：甘露醇、山梨醇、肌醇、卫茅醇2试验方法：用接种针或环移取纯培养物少许，接种于糖发酵管中，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。置36 1.0 C培养13天，每天观察结果。3、结果观察和记录：?产酸产气，阳性，以“”表示?不产酸产气，阴性，以“”

4、表示sf*、气rr-阳性性阳性+I冶1車羽宓为董俠 - 阴哇-阴叶应用：沙门氏菌可发酵葡萄糖但不发酵乳糖。大肠埃希菌可 发酵葡萄糖及乳糖。有些菌可发酵同一种糖类，其发酵产生的代谢产物也不尽相 同。如大肠埃希菌和志贺菌均可发酵葡萄糖，但前者产酸产 气，而后者仅产酸，故可利用此试验来鉴定细菌。（二）葡萄糖氧化发酵 OF试验 1、原理：细菌对葡萄糖的分解，分为氧化型和发酵型。氧化型细菌在有氧的条件下才能分解葡萄糖，无氧的条件下 不能分解葡萄糖;发酵型细菌在有氧无氧条件下均可分解葡萄糖；不分解葡萄糖的细菌称为产碱型。根据糖管的色泽变化可鉴别细菌。2、方法:取待检菌，以穿刺法接种于两管葡萄糖半固体培养基

5、上，在其中一管加入一层（约 1cm ）灭菌的液体石蜡以隔绝空气， 在37 C培养24h天，每天观察结果。应用：可用于鉴别肠杆菌科细菌（发酵型）与非发酵菌（氧 化型或产碱型）。也可用于鉴定葡萄球菌（发酵型）和微球 菌（氧化型）。3、结果观察与记录产酸 典代产酸C黄色、不产酸C專苗）产橄型不产酸C绿色不产酸t绿电（三）V-P试验1、原理：某些细菌能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸经缩合、脱羧生成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中的02氧化为二乙酰，在a -萘酚和肌酸的催化作用下，二乙酰与培养基中的蛋白胨中精氨酸等所含的胍基生成红色化合物，即V-P试验阳性，称V P（ +）反应。应用：本试验常与甲

6、基红试验一起使用。二者结果通常相反。即如大肠埃氏菌、沙门菌、志贺菌等甲基红呈阳性反应，而VP反应则为阴性。沙雷菌、阴沟肠杆菌等，VP反应为阳性， 而甲基红反应为阴性。2、试验方法（1）奥梅拉（0 Meara）法 （2）贝立脱（Barritt ）氏法（3）快速法（1）奥梅拉法将试验菌接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基，于36 1 C培养48h , 每1mL培养液加奥梅拉 0 Meara试 剂0.1ml，摇动试管12min，静置于37C恒温箱4h , 或在4850 C水浴放置2h后判定结果。(2) 贝立脱法将试验菌接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基，于36 1C培养2天，每2mL培养液先加入6%a-萘酚纯酒 精溶液1mL，再加40%氢氧化钾水溶液 0.4ml，摇动 25min ,阳性菌常立即呈现红色， 若无红色出现，静置 于室温或36 1 C培养4h，如显现红色为阳性，呈 黄色或有类似铜色者，可判定为阴性。(3) 快速法将0.5%肌酸溶液2滴放于小试管中，挑取产酸反应的 三糖铁琼脂斜面培养物一接种环，乳化接种于其中，加入5% a -萘酚3滴，40%氢氧化钠水溶液2滴，振动后 放置5min，判定结果。不产酸的