实验一 洋葱根尖Feulgen染色、有丝分裂制片及染色体变异观察

1、基础遗传学实验基础遗传学实验2012.10-2012.11 授课及辅导教师：授课及辅导教师：薛 挺 3607438刘晓燕 3600453助助 教：教：张 旭 3607438础遗传学实验 有丝分裂制片及染色体变异观察 临时制片技术 减数分裂制片及观察 果蝇幼虫的唾腺染色体制片 果蝇的伴性遗传 果蝇的形态，性状及生活史观察 小白鼠骨髓细胞染色体制片技术 *开放性、自主性实验实验项目 态度端正态度端正 规范操作规范操作 爱护仪器设备爱护仪器设备 节约试剂节约试剂 注意安全注意安全 保持环境卫生保持环境卫生实验要求 实验报告

2、实验报告 50 实验记录、实验结果真实可靠实验记录、实验结果真实可靠 *总结与分析总结与分析 独创性独创性 课外文献查阅课外文献查阅 增加知识增加知识 课堂考核课堂考核 40 课前提问课前提问 预习预习 现场评分现场评分 部分实验的实验中考核部分实验的实验中考核 操作是否规范操作是否规范 实验方法，仪器使用等实验方法，仪器使用等 其它其它 10 纪律，着装，公共服务等纪律，着装，公共服务等成绩评判标准洋葱根尖洋葱根尖FeulgenFeulgen染色、有丝分染色、有丝分裂制片及染色体变异观察裂制片及染色体变异观察实验目的实验目的1 1、掌握植物根尖染色体制片技术、掌握植物根尖染色体制片技术2 2

3、、掌握、掌握FeulgenFeulgen染色方法染色方法3 3、熟悉有丝分裂过程中染色体的形态特征和动态变、熟悉有丝分裂过程中染色体的形态特征和动态变化化实验原理实验原理 有丝分裂（有丝分裂（mitosismitosis） 植物细胞分裂的主要方式，细胞分裂过程中，核内染色体准确地复制，并有规律地、均匀地分配到两个子细胞中去，保证了植物细胞的遗传性状的一致。各种生长旺盛的植物组织中，如根尖组织、茎尖组织、居间分生组织、愈伤组织等，有大量处于分裂高峰期的细胞，此时经预处理，固定、解离、染色和涂抹压片等方法，在显微镜下可以观察到处于有丝分裂各时期的细胞和染色体。有丝分裂（有丝分裂（mitosismi

4、tosis） 分裂间期分裂间期 （染色质没有高度螺旋化形成染色体，而是以染色质的形式进行DNA单链复制） 分裂期分裂期 前期前期 （prophase） 膜仁失，两体现； 中期中期 （metaphase）体列中，数清晰； 后期后期 （anaphase） 点裂增，体均分； 末期末期 （telophase） 前期反，中现板（植物）秋水仙素 秋水仙素，一种生物碱，因最初从百合科植物秋水仙中提取出来，故名,也称秋水仙碱。纯秋水仙素呈黄色针状结晶，熔点157。易溶于水、乙醇和氯仿。味苦，有毒。 秋水仙素能抑制有丝分裂，破坏纺锤体，使染色体停滞在分裂中期。这种由秋水仙素引起的不正常分裂，称为秋水仙素有丝分裂

5、。在这样的有丝分裂中，染色体虽然纵裂，但细胞不分裂，不能形成两个子细胞，因而使染色体加倍。 自1937年美国学者布莱克斯利（A.F.Blakeslee）等用秋水仙素加倍曼陀罗等植物的染色体数获得成功以后，秋水仙素就被广泛应用于细胞学、遗传学的研究和植物育种。孚尔根孚尔根(Feulgen)染色法染色法 细胞内的DNA在1N HCl 60水解时部分地破坏了脱氧核糖与嘌呤碱之间的糖苷键而使嘌呤碱脱掉，从而使脱氧核糖的第一个碳原子上潜在的醛基获得了自由状态。 用无色的亚硫酸品红（schiff试剂）去染经酸解的细胞时，可与染色体DNA上游离的醛基结合，生成呈红色的醌式结构，从而使DNA分子着色。这一反应

6、是1924年由Feulgen 和Rossonbek 所发现和确定的，已广泛用作鉴别DNA的一种特异性检查方法。实验用品器具： 解剖针解剖针 载玻片载玻片 盖玻片盖玻片 离心管离心管 试管架试管架 吸水纸吸水纸 长滴管长滴管 废液缸废液缸 试剂： 漂染液漂染液 蒸馏水蒸馏水 45%45%醋酸醋酸每大组（每张桌子）： 1NHCL1NHCL 带盖瓷缸（内有保鲜膜）带盖瓷缸（内有保鲜膜）实验方法和步骤实验方法和步骤1、材料准备、材料准备 洋葱根尖：通过休眠的洋葱鳞茎，经日晒后，置于盛有清水的小烧杯上，根部与水接触，2025光照条件下培养23天以后，待根长12cm或更长时，于上午9：00-11：00剪下

7、根尖备用。2、预处理、预处理 为获得较多中期分裂相的细胞，且使染色体缩短和分散，可对根尖进行预处理，方法如下（取其一即可）：（1）0.050.2的秋水仙碱水溶液处理24小时；（2）0.002M的8羟基喹啉溶液处理34小时； (3) 根尖浸在蒸馏水中于在14低温下处理24小时。3、固定、固定 用蒸馏水洗净材料，再用卡诺氏固定液室温下固定至少3060分钟。固定的材料如暂不制片，可经90酒精80酒精70酒精（各半小时）浸泡进行转换，最后置于70酒精内放入04冰箱，约可保存半年。如保存时间太长，需重新固定后再用。实验步骤实验步骤1、洋葱(2n=16)根尖(老师预先放入离心管中)，充分吸去试管里的液体。2 2、到水浴锅加预热好的、到水浴锅加预热好的1N HCl 601N HCl 60，8-108-10分钟分钟3、水洗2-3次（加5-10ML水），每次1-2分钟4、吸净水分，加入Schiff试剂(老师统一加)，在黑暗条件下染色至少30分钟，也可过夜（每组一个带盖瓷缸，千万不要洒的到处都是）5、漂染液冲洗三次（5 ML），每次至少1-2分钟（漂染液每大组一份，放在水池上）6、水冲洗三次（每4-6 ML），每次1-2 MIN, 放于蒸馏水中待用7、取根尖（紫红色部分）置载玻片上，加一滴45醋酸（或蒸馏水），盖上盖玻片，压片。显微观察显