集中空调微生物检测技术及质量控制

1、集中空调微生物检测技术及质量控制集中空调微生物检测技术及质量控制20152015 集中空调通风系统微生物检测项目及相关检测方法 质量控制及检测过程中相关问题集中空调微生物检验项目 集中空调送风中细菌总数检验 集中空调送风中真菌总数检验 集中空调送风中-溶血性链球菌检验 集中空调送风中嗜肺军团菌检验（不作为许可的必检项目） 集中空调风管内表面微生物检验 集中空调系统冷却水、冷凝水中嗜肺军团菌检验集中空调送风中细菌总数检验 检验依据：WS 394-2012 附录D 采样仪器：六级筛孔撞击式微生物采样器 采样方法：每套系统35个检测点，流量 28.3L/min 515min 培养基：营养琼脂 培养：

2、3537培养48h集中空调送风中细菌总数检验 结果报告1.单位：CFU/m32.计算公式： 平皿菌落数之和1000测定值（ CFU/m3 ）= 流量（L/min） 采样时间（min）注意：平皿菌落数之和即为一个检测点6个平皿的菌落数的总和，送风中的其他项目的平皿菌落数之和的计算均与此相同。3. 报告值：一个系统送风中细菌总数的测定结果按该系统全部检测的送风口细菌总数测定值中的最大值给出集中空调送风中真菌总数检验 检验依据：WS 394-2012 附录E 采样仪器：六级筛孔撞击式微生物采样器 采样方法：每套系统35个检测点，流量 28.3L/min 515min 培养基：沙氏琼脂 培养：28培养

3、5d集中空调送风中真菌总数检验 结果报告1.单位：CFU/m32.计算公式： 平皿菌落数之和1000测定值（ CFU/m3 ）= 流量（L/min） 采样时间（min）3. 报告值：一个系统送风中真菌总数的测定结果按该系统全部检测的送风口真菌总数测定值中的最大值给出集中空调送风中-溶血性链球菌检验 检验依据：WS 394-2012 附录F 采样仪器：六级筛孔撞击式微生物采样器 采样方法：每套系统35个检测点，流量 28.3L/min 515min 培养基：血琼脂平板 培养：3537培养2448h集中空调送风中-溶血性链球菌检验 菌落特征：灰白色、表面突起、直径0.50.7mm、透明或半透明、菌

4、落周围有明显的24mm界限分明完全透明的无色溶血环 革兰氏染色镜检：革兰氏阳性无芽孢球菌、圆形或卵圆形、链状排列集中空调送风中-溶血性链球菌检验集中空调送风中-溶血性链球菌检验集中空调送风中-溶血性链球菌检验 结果报告1.单位：CFU/m32.计算公式： 平皿菌落数之和1000测定值（ CFU/m3 ）= 流量（L/min） 采样时间（min）3. 报告值：一个系统送风中-溶血性链球菌的测定结果按该系统全部检测的送风口-溶血性链球菌测定值中的最大值给出集中空调送风中嗜肺军团菌检验 检验依据： WS 394-2012 附录G 采样仪器：液体冲击式微生物气溶胶采样器 采样方法：每套系统35个检测点

5、 采样吸收液1.采样吸收液1：GVPC液体培养基2.采样吸收液2：酵母提取液集中空调送风中嗜肺军团菌检验 培养基：GVPC琼脂 BCYE琼脂 BCYE-CYE琼脂 培养： 3537 5%CO2培养箱 菌型确定：生化试验、血清学试验 采样点测定结果：任一吸收液培养出嗜肺军团菌即判定为阳性结果 结果报告：检出/未检出，一套系统中任意一个采样点检出，即报告该套空调送风中嗜肺军团菌检测结果为检出集中空调风管内表面微生物检验 检验依据： WS 394-2012 附录I 采样方法：1.刮拭法：表面积尘较多时采用该方法2.擦拭法：积尘较少时采用该方法3.采样面积：50cm2或100cm24.采样仪器：采样机

6、器人或采样规格板集中空调风管内表面微生物检验 检验项目：细菌总数、真菌总数 培养基：营养琼脂、沙氏琼脂 采样液及稀释液：0.1%吐温80水溶液 检验步骤：1.刮拭法：称取1g加入9mL吐温80水溶液中制成1:10样液，做10倍梯级稀释，取适宜稀释度接种平皿，倾注琼脂。2.擦拭法：擦拭物加入10mL吐温80水溶液中，此即为1:10样液，做10倍梯级稀释，取适宜稀释度接种平皿，倾注琼脂。集中空调风管内表面微生物检验 培养1.细菌总数： 3537培养48h2.真菌总数： 28培养5d 结果计算 1.刮拭法 平均菌落数测定值(CFU/cm2)= 积尘总重量稀释倍数 采样面积2.擦拭法 平均菌落数测定值

7、(CFU/cm2)= 稀释倍数 采样面积注意：此处为平均菌落数，即适宜稀释度的两个平皿的菌落数平均值。集中空调风管内表面微生物检验 结果报告1.单位：CFU/cm22.报告值：一个系统风管内表面细菌总数、真菌总数的测定结果按该系统全部检测的风管内表面细菌总数、真菌总数测定值中的最大值给出集中空调系统冷却水、冷凝水中嗜肺军团菌检验 检验依据： WS 394-2012 附录B 采样容器：灭菌500mL玻璃或聚乙烯材料磨口瓶，瓶中加有硫代硫酸钠溶液以中和样品中的氧化物。 培养基：GVPC琼脂 BCYE琼脂 BCYE-CYE琼脂 培养： 3537 5%CO2培养箱 菌型确定：生化试验、血清学试验 结果

8、报告：检出/未检出嗜肺军团菌质量控制及检测过程中相关问题 采样物品的准备：灭菌 实验室环境：1000级洁净室、生物安全实验室 各采样平皿质量1.对平皿的要求：直径90mm，厚度18mm2.平皿中培养基均匀性3.平皿中培养基厚度：加入2025mL相应培养基，以保证采样时喷孔与琼脂表面之间达到最佳撞击距离4.已加入培养基的采样平皿至少提前两天配制，经无菌试验合格后方可用于采样质量控制及检测过程中相关问题 真菌总数培养结果观察：从培养48h开始观察计数 细菌总数及真菌总数结果计数：检测细菌总数的营养琼脂平板中有真菌生长时不对其进行计数，反之亦然 风管内表面微生物计数结果适宜稀释度的选择 （编写作业指

9、导书）1.细菌总数：参照GB/T18204.2-2000 30300CFU2.真菌总数：参照GB/T18204.8-2000 30100CFU质量控制及检测过程中相关问题 结果报告（编写作业指导书）结果报告（编写作业指导书）1.集中空调送风中细菌总数、真菌总数所有检测点都无菌生长测定值均为0时，则报告11000/(流量采样时间）CFU/m3，如采样时间为5min，则报告为7 CFU/m3测定值不为0时，即直接以所有检测点中最大值为报告值，小数点后四舍五入，取整数报告。例如：某检测点采样流量28.3L/min 采样5min，平皿菌落数之和为14CFU，测定值为98.9CFU/m3，若该点测定值为

10、所有检测点中最大值，则结果报告为99CFU/m3质量控制及检测过程中相关问题2. 集中空调送风中-溶血性链球菌所有检测点都无菌生长测定值均为0时，报告未检出测定值不为0时，即直接以所有检测点中最大值为报告值，小数点后四舍五入，取整数报告。例如：某检测点采样流量28.3L/min 采样5min，平皿菌落数之和为14CFU，测定值为98.9CFU/m3，若该点测定值为所有检测点中最大值，则结果报告为99CFU/m3质量控制及检测过程中相关问题2.风管内表面微生物中细菌总数、真菌总数所有检测点都无菌生长测定值均为0时，则报告1CFU/cm2所有测定值均1CFU/cm2时，则报告1CFU/cm2最大测定值1CFU/cm2时，即直接以所有检测点中最大值为报告值，小数点后四舍五入，取整数报告补充说明 风管内表面微生物检测原始记录中公式里平皿平均数改为平均菌落数。 送风中-溶血性链球菌检测原始记录的计算公式中平皿菌落数改为平皿菌落数之和。 对结果报告为什么不取2位有效数的解释：方法结果报告中规定每套系统以所有检测点中最大