我用DNA重组技术的基本工具

1、 1 1、大肠杆菌的一种限制酶大肠杆菌的一种限制酶（EcoREcoR)能识别能识别GAATTCGAATTC序列，序列，并在并在G G和和A A之间切开形成之间切开形成黏性黏性末端。末端。 2 2、SmaSma能识别能识别CCCGGGCCCGGG序列，序列，并在并在C C和和G G之间切割形成之间切割形成平平末端末端 。常见的两种限制酶AATCTGAATGCT限制性内切酶作用过程黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端基因的针线：DNADNA连接酶G A A T T CC T T A A GG A A T T CC T T A A GG C T T A A A A T T C GG C T T A A

2、A A T T C GG C T T A A A A T T C G用同种限制酶切割用同种限制酶切割连接连接黏性黏性末端末端连接连接黏性黏性末端末端和和平平末端末端分类分类作用作用E.coli DNA连接酶连接酶连接酶种类：连接酶种类：T4DNA连接酶连接酶DNA聚合酶聚合酶和和DNA连接酶有何相同点和连接酶有何相同点和不同点？不同点？DNA连接酶连接酶DNA聚合酶聚合酶连接连接DNA链链连接部位连接部位双链双链在两在两DNADNA片片断断之间形之间形成成磷酸二磷酸二脂键脂键单链单链将将单个单个核苷酸核苷酸加到已存在的加到已存在的核酸片段末端核酸片段末端形成形成磷酸二脂磷酸二脂键键三、分子运输

3、车基因进入受体细胞的载体 要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达，首先得将这个基因送到乙生物的物体内进行表达，首先得将这个基因送到乙生物的细胞内去！细胞内去！能将外源基因送入受体细胞的工具能将外源基因送入受体细胞的工具就是就是载体载体。1 1、基因工程的载体被喻为、基因工程的载体被喻为：分子运输车分子运输车2 2、基因工程的载体来源、基因工程的载体来源：作为基因工程的载体需要怎样的条件呢？作为基因工程的载体需要怎样的条件呢？作为载体的必要条件1. 1.能自我复制能自我复制能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达能进入受体生物细胞并在

4、受体生物细胞内复制并表达；2.2.有一个至多个限制酶切割位点有一个至多个限制酶切割位点能与目的基因结合能与目的基因结合3.3.有遗传标记基因有遗传标记基因便于观察便于观察4.4.对受体细胞无害、易分离对受体细胞无害、易分离安全、比较容易得到安全、比较容易得到课本知识回顾 1 1、基因工程又叫做基因工程又叫做 或或 。通俗地说，就是按照。通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种人们的意愿，把一种生物的某种 提取出来，加以提取出来，加以 ， 然后放到另一种生物的细胞里，然后放到另一种生物的细胞里， 改造生物的遗传性状改造生物的遗传性状。基因拼接技术基因拼接技术DNA重组技术重组技术基因基因修

5、饰改造修饰改造定向地定向地2、DNA 重组技术的基本工具重组技术的基本工具“分子手术刀分子手术刀” “分子缝合针分子缝合针” “分子运输车分子运输车”限制（性核酸内切）酶限制（性核酸内切）酶DNA连接酶连接酶基因进入受体细胞的载体基因进入受体细胞的载体原核生物中分离纯化出来原核生物中分离纯化出来特定的核苷酸序列特定的核苷酸序列磷酸二酯键磷酸二酯键黏性末端黏性末端平末端平末端1、种类：、种类：2、作用部位：、作用部位：两类两类连接黏性末端连接黏性末端Ecoli DNA连接酶连接酶T4 DNA连接酶连接酶磷酸二酯键磷酸二酯键连接黏性末端和平末端连接黏性末端和平末端通常有三种通常有三种: :作为载体

6、的条件：作为载体的条件： 在进行基因工程操作中在进行基因工程操作中, ,真正被用作载体的质粒都真正被用作载体的质粒都是在是在 质粒质粒噬菌体衍生物噬菌体衍生物动植物病毒动植物病毒天然质粒天然质粒人工改造人工改造的的能自我复制；有切割位点；能自我复制；有切割位点；有遗传标记基因；对受体细胞无害、易分离有遗传标记基因；对受体细胞无害、易分离基础上进行过基础上进行过1 1、在基因工程中，切割运载体和、在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的含有目的基因的DNADNA片段，需使片段，需使用（用（ ）A.A.同种限制酶同种限制酶 B. B. 两种限制酶两种限制酶C.C.同种连接酶同种连接酶 D. D. 两种连接酶两种连接酶(2012高考)4.根据基因工程的有关知识，回答：（1）限制酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有_和_。（2）质粒运载体用EcoR 切割后产生的片段如下: AATTCG GCTTAA为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoR 切割外，还可用另一种限制酶切割，该酶必须具有的特点是_（3）按其来源不同，基因工程找那个所使用