芎冰滴丸的药学研究PPT学习教案

1、会计学1第1页/共60页第2页/共60页第3页/共60页第4页/共60页第5页/共60页第6页/共60页第7页/共60页第8页/共60页第9页/共60页第10页/共60页第11页/共60页川芎川芎冰片冰片制剂处方制剂处方成型工艺成型工艺挥发油挥发油提取工艺提取工艺质量标准质量标准稳定性稳定性脱水工艺脱水工艺质量标准质量标准 稳定性稳定性 成品成品 第12页/共60页第13页/共60页n结果见表1。XD行测定。第14页/共60页表表1 不同产地挥发油含量测定结果不同产地挥发油含量测定结果批次产地药材量（g）挥发油量（ml）药材中挥发油含量（%）（ml/g）平均值1都江堰60.0050.61.00

2、1.052都江堰60.0020.81.333都江堰59.9980.50.834彭州60.0030.40.670.955彭州59.9990.61.006彭州60.0000.71.177崇州60.0010.30.500.728崇州59.9980.40.679崇州60.0060.61.00 根据上述测定结果，都江堰产地川芎药材中挥发油含量相对于崇州和彭州更高，故选择都江堰川芎作为实验用药材。 第15页/共60页第16页/共60页表表2 不同提取方法所得挥发油的比较结果不同提取方法所得挥发油的比较结果实验方法外观性状提取时间（h）得油率（%）藁本内酯含量（%）共水蒸馏法金黄色的油状物180.3858.

3、3重蒸馏法金黄色的油状物240.4253.8有机溶剂提取法黄褐色油状物243.023.6中性乙醇提取法棕黄色油状物241.032.8上述试验结果表明，采用共水蒸馏所得挥发油中藁本内酯含量最高，而有机溶剂等提取法纯度过低且有溶剂残留等问题，故选择共水蒸馏法进行提取。第17页/共60页第18页/共60页表表3 因素水平表因素水平表水平ABCD浸泡时间（h）提取时间（h）加水量（倍）空白16682128103181012表表4 正交试验设计及结果正交试验设计及结果序号ABCD藁本内酯含量（%）挥发油收得率（%）评分1111155.400.3079.62122252.100.3873.04313335

4、5.490.3573.984212353.290.4186.485223157.060.3988.66231255.490.4591.937313260.320.49100.008321354.390.4691.659332158.690.4393.48j226.62266.08263.18261.68j267.01253.29253.00264.97j285.13259.39262.58252.11R58.5112.7910.1812.86第19页/共60页表表5 方差分析表方差分析表方差来源离差平方和（SS）自由度（V）均方（MS）FPA598.122299.0620.10*B27.282

5、13.640.92C21.75210.880.73D29.75214.88 从以上方差分析结果可以看出：A因素有显著的影响，影响因素ABC；且A3、B1、C1为佳，即最佳工艺为：加8倍量的水，浸泡18小时，共水蒸馏提取6小时。第20页/共60页（3）验证实验 为了验证上述结果的准确性，以保证提取工艺的合理可行，称取川芎药材3份，每份500g，按上述确定的工艺条件，安排重复实验，实验结果见表6。表表6 验证实验结果验证实验结果方案试验号油中藁本内酯含量（%）挥发油得率（%）A3B1C1158.030.47259.210.45358.490.48 验证实验结果表明：此共水蒸馏法工艺稳定，具有重现性

6、和可操作性。因此，最后确定实验方案为A3B1C1 。即：加8倍量的水，浸泡18小时，共水蒸馏提取6小时。第21页/共60页表表7 挥发油脱水工艺研究结果（挥发油脱水工艺研究结果（n=3）处理方法含水量（%）挥发油得率（%）藁本内酯含量（%）未处理前8.28100.0058.03冷冻分离1.0192.0361.29乙醚1.0589.3760.35石油醚（3060）1.2191.5659.97醋酸乙酯0.9585.1761.98 上述试验结果表明，采用冷冻分离法和石油醚萃取法所得挥发油损失都较小，且藁本内酯含量均较高。冷冻分离法为物理方法，简便，易行，不会使有机溶剂残留，不加热，故最终选择将其作为

7、脱水方法进行川芎挥发油的脱水处理。 第22页/共60页n2.2.2.1川芎挥发油质量标准研究n（1）挥发油中功能基的鉴定：n 根据实验结果，鉴定出挥发油中含有酚类，醛类，内酯类及不饱和化合物。n（2）物理常数测定n 相对密度n 暂定为0.89171.0899。n 折光率n 暂定为1.36001.6641。n pH值n 暂定为3.834.67。 n 酸值n 暂定酸值为24.830.4。n 皂化值n 暂定为201245。第23页/共60页（3）川芎挥发油的TLC鉴别 取本品10mg，加甲醇20ml使溶解，作为供试品溶液。另取川芎对照药材1g，加乙醇20ml，加热回流1小时，滤过，滤液挥干，残渣加醋

8、酸乙酯2ml使溶解，作为对照药材溶液。取藁本内酯对照品适量，加甲醇使溶解作为对照品溶液，照薄层色谱法（附录B）试验，以正己烷-醋酸乙酯（9:1）和石油醚-醋酸乙酯（9：1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，结果见图4和图5。 图图4 川芎挥发油的川芎挥发油的TLC鉴别鉴别 图图5川芎挥发油的川芎挥发油的TLC鉴别鉴别 展开剂：石油醚-醋酸乙酯（9：1） 展开剂：正己烷-醋酸乙酯（9:1）1藁本内酯对照品；2川芎对照药材；3、4、5川芎挥发油 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5第24页/共60

9、页（4）川芎挥发油中藁本内酯的含量测定色谱条件色谱柱：Kromasil C18柱（4.6mm250mm）；流动相：甲醇-水（75：25）；流速：1ml/min；检测波长：280nm；灵敏度：0.01AUFS。在上述色谱条件下藁本内酯与其他组分均能达到基线分离（结果见图6、图7）。图图6 藁本内酯对照品的藁本内酯对照品的HPLC图图图图7 川芎挥发油的川芎挥发油的HPLC图谱图谱第25页/共60页标准曲线的制备取藁本内酯对照品约20mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，再精密吸取1ml置25ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得（每1ml含32.032g藁本内酯）。分别吸取1、2

10、、4、6、8、10l进样，测定，记录色谱图，测定峰面积，结果见下表。并以峰面积A对进样量C（g）回归得回归方程为：A=12684557.6513C-47471.5452，r=0.9999，结果见表13和图8。 表表13 进样量与峰面积线性关系进样量与峰面积线性关系 进样量(g)0.0320320.0640640.1281280.1921920.2562560.32032峰面积38023977005815387922391378320209640282720100000020000003000000400000050000000.000.060.120.180.240.300.36C(g)A 图

11、图8 线性关系图线性关系图 测定结果表明，藁本内酯进样量在0.032032g0.320320g内呈良好线性关系。第26页/共60页精密度实验试验结果表明，该仪器精密度良好。重复性实验结果表明该测定方法重复性良好。稳定性实验结果表明：供试品溶液峰面积值在8小时内无显著性变化，可满足测定要求。加样回收率实验表明该含量测定方法合理可行。 样品含量测定表表18 川芎挥发油中藁本内酯的含量测定结果（川芎挥发油中藁本内酯的含量测定结果（n=3）批次藁本内酯含量（%）平均值（%）161.64261.9161.86362.03测定结果表明：三批样品的测定结果表明，川芎挥发油中藁本内酯含量稳定，暂定其标示量为6

12、1.86%，样品的含量以标示量计应在10%以内，即55.67%68.05%。第27页/共60页贮存条件贮存时间（d）性状藁本内酯含量（%）未贮存0金黄色、澄明油状液体61.64室温不避光密闭1金黄色、澄明油状液体59.1115黄棕色、浑浊油状液体45.2830棕褐色、浑浊油状液体39.2960棕褐色、浑浊油状液体37.3390棕褐色、浑浊油状液体35.25室温避光密闭1金黄色、澄明油状液体59.1815浅黄棕色、浑浊油状液体52.3930黄棕色、浑浊油状液体46.8860深黄棕色、浑浊油状液体44.6890棕褐色、浑浊油状液体43.304避光密闭1金黄色、澄明油状液体59.1715金黄色、澄明

13、油状液体57.9830金黄色、澄明油状液体55.3360浅黄棕色、稍有浑浊油状液体54.0190浅黄棕色、稍有浑浊油状液体52.64第28页/共60页4避光不密闭1金黄色、澄明油状液体59.0115黄棕色、稍有浑浊油状液体31.1030棕褐色、浑浊油状液体28.0560棕褐色半固体24.2190棕褐色半固体20.6537避光密闭1金黄色、澄明油状液体59.1815棕褐色、浑浊油状液体42.2830棕褐色、浑浊油状液体34.5160棕褐色、浑浊油状液体31.2190棕褐色、浑浊油状液体30.1720避光密闭1金黄色、澄明油状液体61.1315金黄色、澄明油状液体61.0130金黄色、澄明油状液体

14、60.4560金黄色、澄明油状液体60.0890浅黄棕色、澄明油状液体58.33 根据上述试验结果对川芎挥发油的不同影响因素进行分析，结果见图9图11。第29页/共60页0.0015.0030.0045.0060.0075.000115306090贮存时间（天）藁本内酯含量（%）室温不避光、密闭室温避光、密闭图图9 光线对川芎挥发油稳定性的影响光线对川芎挥发油稳定性的影响0.0015.0030.0045.0060.0075.000115306090贮存时间（天）藁本内酯含量（%）4避光、密闭4避光、不密闭图图10 空气对川芎挥发油稳定性的影响空气对川芎挥发油稳定性的影响0.0015.0030.

15、0045.0060.0075.000115306090贮存时间（天）藁本内酯含量（%）4避光、密闭室温避光、密闭37避光、密闭20避光、密闭图图11 温度对川芎挥发油稳定性的影响温度对川芎挥发油稳定性的影响由此可见，为了保证川芎挥发油的质量和制剂临床疗效，应将其置于-20避光、密闭条件下保存，同时可选用不透光的棕色塑料瓶进行包装。第30页/共60页第31页/共60页表表20 川芎挥发油与冰片川芎挥发油与冰片配伍对小鼠的镇痛作用配伍对小鼠的镇痛作用（热板法）（热板法）（xs）组别给药前痛阈值（s）给药后不同时间痛阈值（s）15min30min45min60min空白对照组12.0354.4711

16、1.8663.90712.1224.88611.7502.67311.4565.213低剂量组12.7443.59014.9627.25014.8615.36216.4744.84817.4645.008中剂量组13.5865.56817.2955.02918.6876.63122.89413.52219.7518.216高剂量组12.3113.88815.9292.99717.7554.86823.0129.00923.62214.566注：与给药前相比P0.05、P0.01。 从上表可知，川芎挥发油与冰片配伍各剂量组给药后15min60min不同时间均可提高小鼠的痛阈值，显示其具有明显的镇

17、痛作用。第32页/共60页（2）扭体法镇痛试验表表21 川芎挥发油与冰片配伍对小鼠的镇痛作用（扭体法）（川芎挥发油与冰片配伍对小鼠的镇痛作用（扭体法）（xs）组别动物数（只）给药后扭体次数（次/30min）镇痛抑制率（%）P值空白对照组1047.9008.412-低剂量组1022.40019.77853.240.05中剂量组1016.0009.70766.600.05高剂量组1020.00013.92058.250.01 从上表可知，川芎挥发油与冰片配伍的各剂量组均可显著减少小鼠的扭体次数，与对照组相比有显著差异，提示该药具有明显的镇痛作用。 根据药效学实验结果，选择川芎、冰片的用量初步定为：

18、川芎挥发油0.67mg/kg，冰片0. 22mg/kg，即成人（60kg）一日用量为川芎挥发油40mg、冰片13mg。第33页/共60页第34页/共60页（3）冷却剂的选择 分别用植物油，液体石蜡，甲基硅油及后两者的混合液做冷却剂，结果见表22。 表表22 冷却剂的选择冷却剂的选择冷却剂圆整度（%）（n=20）丸重差异（%）（n=20）光洁度植物油77.612.1较差甲基硅油90.56.5较差液体石蜡85.77.8较差液体石蜡：甲基硅油混合液（2：1）87.85.8较好液体石蜡：甲基硅油混合液（1：1）92.24.5较好液体石蜡：甲基硅油混合液（1：2）88.66.2较好结果表明，用液体石蜡与

19、甲基硅油1：1的混合液为冷却剂较好。 第35页/共60页（4）药物与基质比例范围的筛选以PEG4000作基质，将其熔融后与药物混合均匀后，滴入80cm长的冷却柱中，以滴丸基本能成型为依据，结果见表23。 表表23 药物与基质比例的筛选药物与基质比例的筛选 药物：基质 圆整度（%）（n=20）丸重差异（%）（n=20）溶散时限（min）1：191.98.131：1.588.37.541：294.84.84.51：394.14.75经综合分析，筛选出药物与基质的最低配比为1：2 。第36页/共60页（5）成型处方筛选处方设计在药物与基质最低配比的基础上，以PEG6000替换PEG4000，设计出一

20、系列不同配比的复合基质处方，见表24。 表表24 成型处方组成成型处方组成组成处方号药物PEG4000PEG60001120211.50.53111410.51.55102 按上述表称取各处方的药物和基质，制成滴丸，以其圆整度，溶散时限，影响滴丸滴制时的难易程度及滴丸的硬度为考察指标，结果见表25。表表25 处方筛选结果处方筛选结果处方号圆整度（%）溶散时限（min）滴制难易硬度192.23易较差291.63.5较易较差392.94较易较好487.36.5较难较好582.58难好由表可看出，随着PEG6000量的增加，虽硬度得到改善但其它指标均有下降趋势，综合分析后选取PEG4000与PEG6

21、000二者以1：1的比例混合。第37页/共60页吸收剂的选择 由于方中含大量挥发油，为使滴丸硬度增加加入吸收剂。所加吸收剂种类及比例见表26。 表表26 吸收剂的选择吸收剂的选择吸收剂（%）圆整度（%）滴制难易硬度磷酸氢钙(10)89.5较易较好硫酸钙(10)90.2较易较好碳酸钙(10)89.6较易较好淀粉(5)91.5易较好淀粉(10)93.4易好淀粉(15)92.8较易好糊精(10)93.0易较好淀粉(5),糊精(5)92.3易好-环糊精(10)93.2较易好注：吸收剂的比例为占挥发油的比例 结果表明，加入吸收剂后能提高滴丸硬度。以淀粉为吸收剂的滴丸各指标较好，且价廉易得，最终选择淀粉为

22、吸收剂，加入量为10% 。第38页/共60页n表表27 抗氧剂的考察抗氧剂的考察抗氧剂（%）外观藁本内酯含量（%）0浅黄色52.35Na2S205 （2）浅黄色78.26Vit E （0.1）黄色98.88Vit C （0.5）黄色85.92C9H10O5 （0.5）黄色92.35 结果表明，加入抗氧剂后能有效提高藁本内酯含量，保证滴丸的质量。维生素E（Vit E）效果最好，故选用0.1%的Vit E为抗氧剂。 本实验筛选出滴丸最佳成型处方是药物（含占挥发油10%的淀粉和0.1% Vit E）与基质比例为1:2，基质为PEG4000与PEG6000（1:1）的混合物。第39页/共60页（6）成

23、型工艺研究药物的加入顺序实验发现，药物与基质混合的顺序对滴丸质量有一定影响。实验结果见表28。 表表28 药物与基质混合顺序的考察药物与基质混合顺序的考察混合顺序圆整度（%）(n=20)丸重差异（%）(n=20)滴制难易基质与药物一起熔融90.68.9较难基质熔融后加入药物95.33.8易 结果表明，药物在基质熔融后加入较理想。药物与基质熔融温度的考察实验中，对药物与基质混合熔融的温度进行了考察。结果见表29。 表表29 药物与基质熔融温度的考察药物与基质熔融温度的考察熔融温度（）圆整度（%）(n=20)丸重差异（%）(n=20)滴制难易7094.24.9易8092.64.5较易结果表明，药物

24、在70时圆整度较好，丸重差异相差不大，为避免温度过高对药物成分的影响，故选择在药物与基质的混合熔融温度为70。第40页/共60页n滴丸的优选方案为A3B1C1，并通过验证实验证明较优第41页/共60页冷却时间的考察 按优选的药物与基质的配比及滴制条件进行滴制，经冷却柱缓慢下降后冷凝成型，分别冷凝30min，60min，90min，120min后，取出，用石油醚洗去冷凝液，以圆整度、硬度、及藁本内酯含量作为评价标准。结果见表38。表表38 冷凝时间的考察冷凝时间的考察冷凝时间(min)圆整度（n=20）（%）硬度藁本内酯含量（%）30较差6098.12较好97.699098.26较好92.921

25、2098.21较好92.22通过外观与内在质量综合分析，确定冷凝时间为60min。第42页/共60页（7）去冷却剂方法的选择 滴制完成后，滴丸表面冷却剂的去除在实验室中选择了石油醚洗涤和用纸屑擦拭进行比较。以表面光洁度和藁本内酯含量变化作为评价指标进行分析，结果见表39。表表39 滴丸去冷却剂方法的比较滴丸去冷却剂方法的比较方法光洁度处理后藁本内酯含量（%）石油醚（3060）洗涤一般97.35石油醚（6090）洗涤一般97.36纸屑擦拭好99.68 结果表明，纸屑擦拭光洁度较好且对有效成分的影响较小。因此，在实验制备过程中选择纸屑擦拭作为去除冷却剂的方法，以保证滴丸的内在质量。第43页/共60

26、页（8）滴丸干燥方法的选择实验中以光洁度及藁本内酯含量变化作为评价指标进行分析，以选择最适合滴丸的干燥方法，结果见表40。表表40 滴丸干燥方法的选择滴丸干燥方法的选择方法光洁度处理后藁本内酯含量（%）40 烘干好92.1850 烘干好90.3660 烘干好85.79吸湿干燥好99.52微波干燥较好94.91结果表明吸湿干燥较理想。 第44页/共60页n（1）鉴别(对滴丸中的挥发油进行TLC鉴别）n样品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上（Rf=0.7），显相同颜色的亮蓝色荧光斑点。 图图9 滴丸的滴丸的TLC鉴别鉴别 图图10 滴丸的滴丸的TLC鉴别鉴别 展开剂：石油醚-醋酸乙酯（9：1） 展

27、开剂：正己烷-醋酸乙酯（9:1）1藁本内酯对照品；2川芎挥发油；3、4、5样品 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5第45页/共60页（2）检查溶出度检查测定藁本内酯含量，并计算相对累积溶出百分率，即得。结果见表41。表表41 藁本内酯累积溶出百分率（藁本内酯累积溶出百分率（%）（）（n=3）取样时间点lmin3min6min10min15min20min30min累积溶出百分率（%）17.844.169.584.892.393.193.7 以取样时间点为横坐标，藁本内酯累积溶出百分率为纵坐标作图，得藁本内酯溶出曲线。见图11。根据测定结果，暂定在6分钟时，本品的累积溶出百分率不得少于65%

28、。第46页/共60页含量均匀度检查取本品10粒，研细，分别置100ml量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，0.45m微孔滤膜滤过，测定藁本内酯含量，计算结果。结果见表42。表表42 样品均匀度测定结果（样品均匀度测定结果（n=10）批次相对含量（%）A+1.80S1100.13.82100.33.6399.74.3结果表明，A+1.80S均小于15.0，符合规定。 (3)含量测定第47页/共60页系统适应性实验线性关系的考察藁本内酯进样量在0.016213g0.16213g范围内呈良好线性关系。冰片进样量在0.044g0.265g范围内线性关系良好。供试品溶液的制备 A.溶媒的选择 B.制备方

29、法的选择 C.加入溶剂量的选择 D. 超声时间的选择精密度实验RSD值小于2，表明该仪器精密度良好。 RSD值小于2，表明该仪器精密度良好。重复性实验。结果表明该测定方法重复性良好结果表明该测定方法重复性良好稳定性实验供试品溶液峰面积值在8小时内无显著性变化，可满足测定要求。供试品溶液在10小时内稳定，可满足测定要求。加样回收率实验 该含量测定方法合理可行。该方法合理可行。样品测定结果芎冰滴丸中藁本内酯含量稳定，暂定其标示量为2.697mg/丸芎冰滴丸中冰片的含量稳定，暂定其标示量为1.05mg/丸第48页/共60页图图20 对照品对照品HPLC图图图图21 人工胃液人工胃液HPLC图图第49

30、页/共60页图图22 芎冰滴丸芎冰滴丸HPLC图图表表60 溶出介质的考察实溶出介质的考察实验验溶出介质水酸水人工胃液藁本内酯溶出百分率（%）3.9325.091.8结果表明，藁本内酯在人工胃液中的溶出率高于水和酸水，故选择人工胃液为溶出介质。 转速考察结果见表61。表表61 溶出度检查转速考察结果溶出度检查转速考察结果转速(r/min)50100150藁本内酯溶出百分率()89.7892.5392.65 结果表明，转速对溶出度影响不大，选择100r/min进行实验。制备标准曲线精密度试验重复性实验稳定性实验加样回收率实验 第50页/共60页2.4.2.3溶出度实验结果分析同法测定芎冰包合片及胶囊的溶出度。结果见表67。表表67 溶出度实验结果溶出度实验结果 取样时间点（min）藁本内酯累积溶出百分率（%）（n=3）芎冰滴