圆盘电泳PPT学习教案

1、会计学1圆盘电泳圆盘电泳第1页/共22页盖盖。n核黄素核黄素（E）需避光保存。需避光保存。第2页/共22页第3页/共22页实验分组实验分组（每人做一管，每（每人做一管，每3-5人配一份胶）人配一份胶）认清试剂认清试剂（试剂和吸管对号、量器的使用）（试剂和吸管对号、量器的使用）封管封管分离胶配制与灌胶分离胶配制与灌胶（浓度为（浓度为6%，每组总体积为，每组总体积为10ml，灌胶高度为灌胶高度为78cm）封正丁醇封正丁醇3mm（手法、高度、观察界面变化和判断凝固、时间掌握手法、高度、观察界面变化和判断凝固、时间掌握15min）第4页/共22页浓缩胶配制浓缩胶配制（浓度为（浓度为3%，光聚合，每组总

2、体积为，光聚合，每组总体积为4ml，灌胶高度为灌胶高度为1.5cm,留留1cm空加样）空加样）倒掉正丁醇倒掉正丁醇灌浓缩胶灌浓缩胶封正丁醇封正丁醇3 3mmmm（观察界面，判断凝固时间）观察界面，判断凝固时间）安装电泳槽安装电泳槽（结构、原理、电流及电极的方向、（结构、原理、电流及电极的方向、不漏水、除气泡）不漏水、除气泡）第5页/共22页第6页/共22页第7页/共22页第8页/共22页带电粒子（胶体颗粒、离子等）在带电粒子（胶体颗粒、离子等）在电场的作用下在特定的介质中向与其电电场的作用下在特定的介质中向与其电荷性质相反的电极方向定向泳动的现象荷性质相反的电极方向定向泳动的现象。广泛应用于生

3、物大分子的分离和鉴定广泛应用于生物大分子的分离和鉴定第9页/共22页主要利用分子之间的两个方面的差异来分离：主要利用分子之间的两个方面的差异来分离：第10页/共22页蛋白质两性解离与等电点蛋白质两性解离与等电点溶液溶液pH与蛋白质与蛋白质PI决定蛋白质决定蛋白质电荷性质与数量电荷性质与数量不同蛋白质分子大小和分子形状不同蛋白质分子大小和分子形状的差异的差异第11页/共22页纸电泳纸电泳醋酸纤维膜电泳醋酸纤维膜电泳凝胶电泳凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳第12页/共22页带电粒子的性质带电粒子的性质电场强度电场强度溶液的溶液的pH溶液的离子强度溶液的离子强

4、度电渗现象电渗现象环境因素环境因素第13页/共22页第14页/共22页两单体构成的人工合成凝胶两单体构成的人工合成凝胶丙烯酰胺（丙烯酰胺（Acr）N，N-亚甲基双丙烯酰胺（亚甲基双丙烯酰胺（Bis）作为电泳介质的优点作为电泳介质的优点自由调节孔径；韧性好；性质稳定；自由调节孔径；韧性好；性质稳定；无电渗作用；无色透明。无电渗作用；无色透明。第15页/共22页化学合成系统化学合成系统过硫酸铵（过硫酸铵（AP）四甲基乙二胺（四甲基乙二胺（TEMED）光学合成系统光学合成系统核黄素核黄素四甲基乙二胺（四甲基乙二胺（TEMED）第16页/共22页不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳的三个不连续的三个不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳的三个效应的三个效应 凝胶孔径不同凝胶孔径不同缓冲液缓冲液pH不同不同缓冲液离子成分不同缓冲液离子成分不同浓缩效应浓缩效应电荷效应电荷效应分子筛效应分子筛效应第17页/共22页Gly-Pro-Cl-Gly-Pro-Cl-Cl-Cl-Cl-Pro-Pro-Pro-Gly-Gly-Gl