lecture9Citricacid

1、Citric acid and its production柠檬酸及其生产柠檬酸及其生产Introduction 柠檬酸（柠檬酸（Citric acid ） C6H8O7又名：枸橼酸、又名：枸橼酸、2-羟基丙烷三羧酸羟基丙烷三羧酸 It was first discovered as a constituent of lemons but is today known as an intermediate of the ubiquitous tricarboxylic acid cycle and therefore occurs in almost every living organism

2、. History 1784年，瑞典化学家首次从柠檬汁中提出柠檬酸并结晶出固体柠檬酸。年，瑞典化学家首次从柠檬汁中提出柠檬酸并结晶出固体柠檬酸。 1838年，由年，由Liebig鉴定出它是一种含有一个羟基的三元酸。鉴定出它是一种含有一个羟基的三元酸。 1860年，意大利开始从果汁中用添加石灰乳的办法得到柠檬酸，开始了工业化生产。年，意大利开始从果汁中用添加石灰乳的办法得到柠檬酸，开始了工业化生产。 1880年，美、法、英等国也开始从果汁中工业化生产柠檬酸年，美、法、英等国也开始从果汁中工业化生产柠檬酸 1893年，德国年，德国wehmer发现一种青霉菌能产柠檬酸，但到发现一种青霉菌能产柠檬酸，

3、但到1903年停止研究。主要原因：年停止研究。主要原因： 难以获得适当菌种；菌种易退化；易污染杂菌。难以获得适当菌种；菌种易退化；易污染杂菌。 1913年，年，Zahorski首先利用黑曲霉首先利用黑曲霉(A.niger)生产柠檬酸。生产柠檬酸。 1916年，两位美国学者对曲霉属进行过普查，发现很多菌种能产柠檬酸，奠定了发年，两位美国学者对曲霉属进行过普查，发现很多菌种能产柠檬酸，奠定了发 酵法生产柠檬酸的科学基础。酵法生产柠檬酸的科学基础。 1919年，比利时一家工厂成功地进行了浅盘发酵法生产柠檬酸。年，比利时一家工厂成功地进行了浅盘发酵法生产柠檬酸。 1923年，美国年，美国Pfizer公

4、司开始采用黑曲霉浅盘发酵法工业化生产柠檬酸。公司开始采用黑曲霉浅盘发酵法工业化生产柠檬酸。 1952年，美国年，美国Miles公司，首先成功地采用深层发酵法工业化规模生产柠檬酸。由于公司，首先成功地采用深层发酵法工业化规模生产柠檬酸。由于 这种新工艺比传统的浅盘工艺有更多的优越性，因而推动了世界发酵柠檬这种新工艺比传统的浅盘工艺有更多的优越性，因而推动了世界发酵柠檬 酸工业迅速发展。酸工业迅速发展。The production of citric acidlOriginally citric acid was produced from lemons by an Italian cartel.

5、lThe discovery of its accumulation by Aspergillus niger in the early 1920s led to a rapid development of a fermentation process.Its application Pleasant taste, low toxicity and excellent palatability. Widely used in industry for the preparation of food and sugar confectionery and beverages. Drug and

6、 cosmetic OthersIts market Today, citric acid is produced in bulk amounts with an estimated worldwide production of 1,000,000-1,200,000 tonnes per year, most of which is produced by fermentation with the fungus A. niger. 我国的柠檬酸产业我国的柠檬酸产业我国柠檬酸是发酵行业中出口换汇最多的一种产品，我国柠檬酸是发酵行业中出口换汇最多的一种产品，80%-80%-90%90%出口出

7、口我国是柠檬酸生产的强国我国是柠檬酸生产的强国 目前我国年产目前我国年产9090万万t t柠檬酸，占世界总产量的柠檬酸，占世界总产量的60%-70%60%-70%，从，从产量来说是名副其实的生产大国。产量来说是名副其实的生产大国。 柠檬酸工业的集约化已经达到世界领先水平。生产企业的柠檬酸工业的集约化已经达到世界领先水平。生产企业的数量从过去的数量从过去的100100多家减少到目前多家减少到目前9 9家，骨干企业的生产规家，骨干企业的生产规模模2020万万t t左右，有的达左右，有的达3030万万t t，已大大超过卡吉尔。，已大大超过卡吉尔。 柠檬酸品质大为改观。几家骨干企业（日照金禾、丰原生柠

8、檬酸品质大为改观。几家骨干企业（日照金禾、丰原生化、宜兴协联等）的产品已经与欧美发达国家的产品质量化、宜兴协联等）的产品已经与欧美发达国家的产品质量相当。相当。 柠檬酸生产技术水准和原料、能耗和水耗指标都取得了巨柠檬酸生产技术水准和原料、能耗和水耗指标都取得了巨大的进步大的进步我国不同时期生产水平比较我国不同时期生产水平比较柠檬酸产业问题柠檬酸产业问题 我国柠檬酸盲目发展的势头不减我国柠檬酸盲目发展的势头不减 出口价格不断下跌已引起相关国家的抵制出口价格不断下跌已引起相关国家的抵制 19991999年年1212月，美国有关企业就以我国柠檬酸对其月，美国有关企业就以我国柠檬酸对其同类产品有损害的

9、威胁为由，提出反倾销投诉，同类产品有损害的威胁为由，提出反倾销投诉，涉及国内涉及国内180180多家企业，最后仅有多家企业，最后仅有1212家企业积极应家企业积极应诉，并最终获胜诉，并最终获胜 20012001年我国向捷克出口柠檬酸年我国向捷克出口柠檬酸28002800吨，占捷克进吨，占捷克进口总量的口总量的48%48%。该国认为对其行业造成损害，于。该国认为对其行业造成损害，于20022002年年3 3月下旬，对柠檬酸进口实施保障措施月下旬，对柠檬酸进口实施保障措施 柠檬酸产业问题柠檬酸产业问题 20022002年年1010月欧盟最大的柠檬酸生产商之一，奥地月欧盟最大的柠檬酸生产商之一，奥地

10、利利JBLJBL公司就我柠檬酸近年来产量、出口量大幅增公司就我柠檬酸近年来产量、出口量大幅增加，环保不达标等不公平竞争问题向我政府主管加，环保不达标等不公平竞争问题向我政府主管部门提出意见，并拟准备对此采取保护措施。部门提出意见，并拟准备对此采取保护措施。 国家经济贸易委员会、对外贸易经济合作部、国国家经济贸易委员会、对外贸易经济合作部、国家环境保护总局于家环境保护总局于20022002年年1212月月1313日发出日发出禁止未禁止未达到排污标准的企业生产、出口柠檬酸产品达到排污标准的企业生产、出口柠檬酸产品的的公告。公告。 Production of citric acid by ferme

11、ntation柠檬酸生产菌株柠檬酸生产菌株 很多微生物都能产生柠檬酸，例如黑曲霉很多微生物都能产生柠檬酸，例如黑曲霉(A.niger)、棒曲霉、文、棒曲霉、文氏曲霉、泡盛曲霉、芬曲霉、丁烯二酸曲霉、淡黄青霉、桔青霉、氏曲霉、泡盛曲霉、芬曲霉、丁烯二酸曲霉、淡黄青霉、桔青霉、二歧拟青霉、绿色木霉及假丝酵母属中的一些种。二歧拟青霉、绿色木霉及假丝酵母属中的一些种。 最具竞争优势：黑曲霉、文氏曲霉和解脂假丝酵母等菌种的深层最具竞争优势：黑曲霉、文氏曲霉和解脂假丝酵母等菌种的深层发酵法。发酵法。 在现代，使用黑曲酶发酵糖质原料，因为它的柠檬酸产量最高，在现代，使用黑曲酶发酵糖质原料，因为它的柠檬酸产量

12、最高，且能利用多样化的碳源。且能利用多样化的碳源。 黑曲霉的生活周期黑曲霉的生活周期黑曲霉高产柠檬酸的特征黑曲霉高产柠檬酸的特征(1)能耐高浓度的柠檬酸能耐高浓度的柠檬酸(15以上以上)，而不利用和分解柠檬酸。，而不利用和分解柠檬酸。(2)耐高浓度葡萄糖能产生和分泌大量的酸性淀粉酶和酸性糖化酶。耐高浓度葡萄糖能产生和分泌大量的酸性淀粉酶和酸性糖化酶。 (3)能抗微量金属离子，尤其能抗较高浓度的能抗微量金属离子，尤其能抗较高浓度的Mn2+、Zn2+、Cu2+。(4)在深层液体发酵培养时，能形成大量的细小菌球体，菌球体直径为在深层液体发酵培养时，能形成大量的细小菌球体，菌球体直径为0.1mm，菌球

13、量达，菌球量达104个个/mL以上。以上。(5)在以葡萄糖为唯一碳源的合成培养基上，生长不好，孢子形成能力弱。在以葡萄糖为唯一碳源的合成培养基上，生长不好，孢子形成能力弱。(6)在生长、繁殖期，细胞内具有较高水平的氨基酸、在生长、繁殖期，细胞内具有较高水平的氨基酸、NH4+ (7)菌丝体中含有低水平的甘油三酯和磷酸酯菌丝体中含有低水平的甘油三酯和磷酸酯。(8)细胞壁几丁质含量高，但葡聚糖和聚半乳糖含量低。细胞壁几丁质含量高，但葡聚糖和聚半乳糖含量低。(9)在生长和产酸期，细胞内蛋白质、核酸水平低。在生长和产酸期，细胞内蛋白质、核酸水平低。(10)具有很强的侧系呼吸链活性，此侧系呼吸链不产生具有

14、很强的侧系呼吸链活性，此侧系呼吸链不产生ATP。黑曲霉的筛选黑曲霉的筛选p 菌样来源：腐烂植物、水果表皮、从含有腐烂未熟水果的酸菌样来源：腐烂植物、水果表皮、从含有腐烂未熟水果的酸性土壤中分离。性土壤中分离。p 菌种分离：菌种分离： 含菌样品经适当的增殖培养，或将样品含菌样品经适当的增殖培养，或将样品 浸出稀释液浸出稀释液100mL和和10薯干粉、薯干粉、10柠檬酸混合。在振柠檬酸混合。在振荡摇床上于荡摇床上于33-35下下“富集富集”培养培养3-5d然后进行平板划线然后进行平板划线或者平板稀释分离筛选。或者平板稀释分离筛选。p 从分离筛选平板上，挑出单一菌落，移接于麦芽汁琼脂斜面从分离筛选平

15、板上，挑出单一菌落，移接于麦芽汁琼脂斜面上，于上，于33培养培养6-7d孢子长好后，分别接入三角瓶，摇瓶发孢子长好后，分别接入三角瓶，摇瓶发酵试验酵试验(初筛、复筛初筛、复筛)，从中筛选出产柠檬酸高、糖转化率高、，从中筛选出产柠檬酸高、糖转化率高、且产酸稳定性强的菌种，作为生产用菌株。且产酸稳定性强的菌种，作为生产用菌株。黑曲霉的诱变黑曲霉的诱变 射线射线 硫酸二乙酯硫酸二乙酯 亚硝基胍（亚硝基胍（NTG) 高温高温 复合诱变复合诱变黑曲霉诱变育种实例黑曲霉诱变育种实例 TD01菌种是天津工业微生物研究所从采集菌种是天津工业微生物研究所从采集148个土样中分个土样中分离筛选出离筛选出1220支

16、单株菌，产酸支单株菌，产酸2以上的有以上的有88株。选择其株。选择其中数株经多次中数株经多次60Co 射线的诱变处理，获得以淀粉为原料射线的诱变处理，获得以淀粉为原料的高产柠檬酸菌株，其诱变育种谱系如下；的高产柠檬酸菌株，其诱变育种谱系如下； TD01菌株在菌株在2500L和和4000L发酵罐发酵罐中连续中连续5批中试，平均产酸批中试，平均产酸19.56，周期周期4天，转化率达天，转化率达97.28。黑曲霉诱变育种实例黑曲霉诱变育种实例Co827菌种是上海工业微生物研究所选育，菌种是上海工业微生物研究所选育，可直接利用薯干粉发酵，产酸达可直接利用薯干粉发酵，产酸达13以上，以上，平均转化率为平

17、均转化率为95以上。以上。高温生产菌株选育高温生产菌株选育 HQL60l是无锡轻工业大学以黑曲霉是无锡轻工业大学以黑曲霉H-142为出发菌为出发菌株，通过株，通过Y-射线、硫酸二乙酯、高温、单独或复合射线、硫酸二乙酯、高温、单独或复合诱变处理，通过高温、高酸及高渗培养条件的加压诱变处理，通过高温、高酸及高渗培养条件的加压定向筛选，从定向筛选，从600多株突变株中筛选出来的。它的发多株突变株中筛选出来的。它的发酵温度为酵温度为40-41，周期，周期60-64h 20薯干粉摇瓶产酸薯干粉摇瓶产酸13，其产酸纯度明显优于现有生产菌。，其产酸纯度明显优于现有生产菌。 保藏方法保藏方法p斜面低温保藏斜面

18、低温保藏p载体吸附保藏（砂土管保藏）载体吸附保藏（砂土管保藏）p真空冷冻干燥真空冷冻干燥p液氮超低温（液氮超低温（-196）保藏法）保藏法培养方式培养方式 按照发酵状态可分为：深层、浅盘、固体；按照发酵状态可分为：深层、浅盘、固体； 以原料可分为：糖蜜、淀粉水解糖、葡萄糖母液、以原料可分为：糖蜜、淀粉水解糖、葡萄糖母液、淀粉、淀粉质原料淀粉、淀粉质原料(如玉米粉、薯干粉等如玉米粉、薯干粉等)； 由于发酵方法和使用原料的不同，采用的菌种也由于发酵方法和使用原料的不同，采用的菌种也不同。不同。 柠檬酸发酵过程柠檬酸发酵过程斜面培养斜面培养 菌种要纯，不得混有任何耐酸的其他霉菌和酵母。培养条菌种要纯

19、，不得混有任何耐酸的其他霉菌和酵母。培养条件应有利于菌种的增殖和孢子生长，培养基以多含碳源、件应有利于菌种的增殖和孢子生长，培养基以多含碳源、少含氮源为原则。少含氮源为原则。 察氏察氏-多氏琼脂培养基多氏琼脂培养基 察氏琼脂培养基察氏琼脂培养基 蔗糖合成琼脂培养基蔗糖合成琼脂培养基三角瓶培养三角瓶培养p 麸曲培养基：取新鲜麸皮，按照麸皮：水麸曲培养基：取新鲜麸皮，按照麸皮：水=1：1.0-1.3比例加入水，比例加入水，拌匀后，分装入拌匀后，分装入2000ml三角瓶中，三角瓶中，2000ml三角瓶装湿麸皮约三角瓶装湿麸皮约100g。用用8层纱布封扎瓶口，在层纱布封扎瓶口，在0.1MPa表压下灭菌

20、表压下灭菌40-60min, 趁热摇散，冷趁热摇散，冷却至却至35，培养，培养1天未发现异常即可使用。天未发现异常即可使用。p在无菌操作条件下，每一个三角瓶中接入在无菌操作条件下，每一个三角瓶中接入1-2环已活化好的环已活化好的斜面菌种孢子，或斜面菌种孢子，或2mL斜面菌种的孢子悬浮液，于斜面菌种的孢子悬浮液，于30-32下下培养培养16-20h后，白色小菌落已盖满曲层表面，这时应摇瓶一后，白色小菌落已盖满曲层表面，这时应摇瓶一次，使培养基琉松、铺平、继续培养。再经次，使培养基琉松、铺平、继续培养。再经4-6h，待长出的，待长出的黑色袍子布满丰盛后，即可使用黑色袍子布满丰盛后，即可使用。孢子悬

21、浮液的制备孢子悬浮液的制备 将上述符合质量要求的三角瓶麸曲，在无菌操作下，每瓶将上述符合质量要求的三角瓶麸曲，在无菌操作下，每瓶加入加入500一一600mL无菌水，摇匀，切勿将棉塞打湿，在火无菌水，摇匀，切勿将棉塞打湿，在火焰下并瓶或并入接种罐中焰下并瓶或并入接种罐中。种子培养种子培养 种子培养基种子培养基(每升中每升中)：黄血盐处理过的甜糖：黄血盐处理过的甜糖蜜蜜80g（含蔗糖（含蔗糖50%），），NH4NO3 1.7g，KH2PO4 0.08-0.12g，MgSO47H2O 0.3g，ZnSO4 1g，pH5 34-35,18-28h34-35,18-28h 种子质量检查：镜检、种子质量检

22、查：镜检、pH2pH22.52.5、酸度、酸度1.51.52%2%发酵发酵 发酵培养基同种子培养基，补料液为黄血发酵培养基同种子培养基，补料液为黄血盐处理后的糖蜜，含糖盐处理后的糖蜜，含糖250g/L左右，左右，pH6.8-7.0 发酵温度发酵温度32 ，pH2.0g/L pH值低值低:1.6-2.2 溶氧量高溶氧量高: 金属离子浓度极低金属离子浓度极低: Mn2+10-8M;Fe2+10-4M;Zn2+10-20%Sugar type The type and concentration of the carbon source is the most crucial parameter f

23、or successful citric acid production as it applies both to the submerged as well as to the surface production process. Only Sugars which are rapidly catabolised by the fungus- such as sucrose, maltose or glucose allow high yields as well as high rates of acid accumulation.Sugar type In the currently

24、 used industrial processes, beet and cane molasses predominate as carbon source raw materials. However, both beet and cane molasses are very variable in quality both from season to season and from refinery to refinery. Sugar type Several components present in molasses have been identified to affect

25、citric acid production but, as the whole composition is so complex, as yet no general strategy for quality assessment can be claimed. Their selection therefore still depends on small-scale performance.Sugar concentration Concentration of the carbon source used for citric acid production is very high

26、(100 to over 200g/L), which seems logical when a bulk product is produced economically. Sugar concentration However, the carbon source concentration has also been shown to have an influence on the regulation of citrate overproduction The yields from glucose significantly decrease when the carbon con

27、centration decreases below 100g/L. Only very little citric acid is produced at sugar concentrations below 50g/L.Why high sugar conc. needed? If the sugar conc. is low, trehalose 6-phosphate will accumulate, which will inhibit the hexokinase. If the sugar conc. is high, the inhibition will be counter

28、acted. If A.niger strain in which the gene encoding trehalose 6-phosphate synthase has been knocked out, the accumulation of citric acid could be increased even at lower sugar conc. 如果糖浓度。低，海藻糖磷酸会累积，这将抑制己糖激酶。 如果糖浓度。高，将抵消的抑制作用。 如果在黑曲霉菌株的基因编码海藻糖磷酸合酶已被淘汰，积累柠檬酸能增加，即使在低糖协奏曲。pH Citric acid accumulation ha

29、s been reported to accumulate in significant amounts only when the pH is below 2.5. Because of the pK values for citric acid, a pH of 1.8 is automatically reached when certain amounts of it accumulate in the medium in the absence of any other buffering agent, and hence there is no problem with this

30、point. 柠檬酸积累已积累大量只有当PH值低于2.5。 由于峰为柠檬酸，PH值为1.8时达到一定数量的自动积累在中在没有任何其他缓冲，因此也没有问题，这一点。pH The reason for the requirement of a low pH is no clear at the moment. It may be related to the formation of glucose oxidase, as gluconic acid accumulates at the expense of citric acid if the pH is above 4. 原因为要求低值是没有

31、明确的此刻。 这可能与形成葡萄糖氧化酶，如葡萄糖酸积累为代价的柠檬酸如果值是4。pH Due to the extracellular location of the enzyme, it is directly susceptible to the external pH and will be inactivated once the pH decreases below 3.5. 由于细胞外位置的酶，它直接受到外部和将被灭活一次值降低3.5以下。pH 黑曲霉的生长与柠檬酸积累需要不同的酸度条件黑曲霉的生长与柠檬酸积累需要不同的酸度条件 黑曲霉可以在很宽的黑曲霉可以在很宽的pH范围内发育，

32、但范围内发育，但3-7比较适宜比较适宜 分生孢子在分生孢子在pH6.8-7.2发芽良好。如果起始发芽良好。如果起始pH较低（较较低（较低低4.5以下），会强烈抑制它的发育，在以下），会强烈抑制它的发育，在pH2.5以下时，以下时，分生孢子甚至不膨胀分生孢子甚至不膨胀 pH大于大于7.5时，分生孢子会剧烈膨胀，甚至破裂时，分生孢子会剧烈膨胀，甚至破裂pH pH3.0pH3.0以上容易产生草酸，以上容易产生草酸，pH5.0pH5.0容易形成容易形成葡糖酸，葡糖酸，pH3pH3以下是积累柠檬酸的条件以下是积累柠檬酸的条件 在长菌期完成以后使在长菌期完成以后使pHpH降到降到3 3以下是重要的，以下是

33、重要的，至少要降到至少要降到3.53.5Temperature 黑曲霉属于嗜温微生物，最适生长温度为黑曲霉属于嗜温微生物，最适生长温度为33-3733-37 积累柠檬酸的最适温度多数报道为积累柠檬酸的最适温度多数报道为3232 产酸期如果仍维持高于产酸期如果仍维持高于3232 ，虽然开始柠檬酸生，虽然开始柠檬酸生成较快，但长菌也较快，导致菌体量增加，大量成较快，但长菌也较快，导致菌体量增加，大量的糖被用来生成菌体和呼吸，氧化成的糖被用来生成菌体和呼吸，氧化成COCO和水和水 只从柠檬酸产率的角度考虑，产酸期的温度应维只从柠檬酸产率的角度考虑，产酸期的温度应维持在持在26 26 左右，这样可提高

34、产酸率左右，这样可提高产酸率10-20%10-20%，但发，但发酵期延长约酵期延长约2-32-3天天Nitrogen Nitrogen sources used in media for citric acid production have included ammonia salts, nitrates and potential ammonia source, urea. No one material has been shown to be definitely superior to another, as long as it was guaranteed that the co

35、mpounds did not lead to unfavourable changes in pH. No further nitrogen is necessary when beet molasses are used as carbon source.Phosphate The conc. of the phosphate source is usually not critical. However, an appropriate balance of nitrogen, phosphate and trace metals appears to be important for t

36、he accumulation of citric acid in batch cultures. Trace metal ions The effect of trace metal nutrition has been known for a long time and had been the key to the establishment of successful fermentation processes. While all usual trace metal ions are essential for A. niger growth, some of them- part

37、icularly Mn2+, Fe2+ and Zn2+ have to be present in the medium at growth-limiting concentrations to give high citric acid yields. 影响的微量金属营养已经知道了很长一段时间，关键是建立成功的发酵过程。 而所有常规微量金属离子是必不可少的尼日尔成长，他们中的一些人特别是Mn 2+，Fe 2+、Zn 2+是目前在中期在限浓度给高柠檬酸产量。Trace metal ions Since these conc. of metal ions, which affect citri

38、c acid production, are easily introduced into the medium by the high conc. of the carbon source. All carbon source to be used in citric acid fermentation have to be purified free of metal ions.Mn2+ The effect of manganese ions is particularly striking. Even its conc. as high as 2 g/L will decrease a

39、cid accumulation by about 20%. Mn2+ EMP途径中的磷酸果糖激酶（途径中的磷酸果糖激酶（PFK）是一）是一个调节酶，它显示典型的真核生物个调节酶，它显示典型的真核生物PFK的共的共同调节性质，是柠檬酸合成中的主要调节点。同调节性质，是柠檬酸合成中的主要调节点。 它在正常的生理条件下能被柠檬酸抑制，但它在正常的生理条件下能被柠檬酸抑制，但在柠檬酸发酵中柠檬酸浓度很高，为什么在柠檬酸发酵中柠檬酸浓度很高，为什么EMP途径仍能保持畅通呢？途径仍能保持畅通呢？Mn2+ 锰缺乏降低了锰缺乏降低了HMP途径和三羧酸循环酶的活性，途径和三羧酸循环酶的活性，也导致了某些合成代

40、谢的减弱，尤其是细胞内也导致了某些合成代谢的减弱，尤其是细胞内NH4+水平升高。水平升高。 这很可能是蛋白质的合成受干扰，从而导致蛋白这很可能是蛋白质的合成受干扰，从而导致蛋白质的分解相应增加。质的分解相应增加。 这种高浓度这种高浓度NH4+是是PFK的一种调节因子，已经证的一种调节因子，已经证实它能解除前述柠檬酸根对实它能解除前述柠檬酸根对PFK的抑制。的抑制。Mn2+ 用纯化的黑曲霉用纯化的黑曲霉PFKPFK的体外研究也证实，的体外研究也证实，NHNH4 4+ +在细胞内的生理浓度水平下，在细胞内的生理浓度水平下，PFKPFK对柠檬酸对柠檬酸几乎不敏感。锰效应是通过几乎不敏感。锰效应是通过NHNH4 4+ +水平升高而水平升高而减弱了柠檬酸对减弱了柠檬酸对EMPEMP途径关键酶的抑制。途径关键酶的抑制。Fe2+ 乌