微生物和DNA粗提取和鉴定高三生物一轮复习

1、第三章第三章 微生物和微生物和DNA技术技术【考纲考点【考纲考点】考试说明考试说明等级要求等级要求微生物的分离和培养微生物的分离和培养A微生物的分离和培养微生物的分离和培养ADNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定B近五年江苏高考关于本章的考察情况：近五年江苏高考关于本章的考察情况：0921和和23考察考察DNA的鉴定和提取的鉴定和提取1032考察考察DNA粗提取的相关探究活动的实验设计粗提取的相关探究活动的实验设计1119考察考察DNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定1218考察考察DNA粗提取与鉴定粗提取与鉴定134DNA粗提取与鉴定，粗提取与鉴定，18微生物的培养方法微生物的培养方法命题趋势命题趋

2、势 由上述的分析可以看出这部分知识在每年的生物由上述的分析可以看出这部分知识在每年的生物高考题都有出现，且主高考题都有出现，且主要集中在对要集中在对DNA粗提取粗提取与鉴定试验的考察。与鉴定试验的考察。微生物的知识由于在微生物的知识由于在13年考年考试说明中新添加，其考察的知识点主要以试说明中新添加，其考察的知识点主要以微生物微生物培养和分离的方法知识为主培养和分离的方法知识为主。因此复习备考的过。因此复习备考的过程中，要注意加强这部分相关知识的学习。程中，要注意加强这部分相关知识的学习。第一讲第一讲 微生物的分离和培养微生物的分离和培养 学习目标：学习目标：1.简述培养基的用途和分类简述培养

3、基的用途和分类2.说出培养基的基本成分说出培养基的基本成分3.简述无菌技术的概念含义简述无菌技术的概念含义4.尝试制备牛肉膏蛋白胨培养基尝试制备牛肉膏蛋白胨培养基5.尝试通过平板划线法纯化一种微生物尝试通过平板划线法纯化一种微生物微生物的类群微生物的类群原生生物原生生物原核生物原核生物真菌真菌病毒病毒如酵母菌如酵母菌单细胞的动植物单细胞的动植物如草履虫、单细胞藻类等如草履虫、单细胞藻类等微生物包含了除微生物包含了除植物界植物界和和动物界动物界以外的所有生物以外的所有生物无细胞结构无细胞结构真核细胞真核细胞细菌、蓝藻细菌、蓝藻 原核细胞原核细胞基础知识梳理基础知识梳理一一. .培养基培养基 培养

4、基（培养液）是由人工方法配制而成的，专培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。供微生物生长繁殖使用的混合营养液。（1 1）按物理状态来分：培养基可分为）按物理状态来分：培养基可分为固体培养固体培养基、液体培养基和半固体培养基基、液体培养基和半固体培养基。（2 2）按成分来分，可分为）按成分来分，可分为天然培养基和合成培天然培养基和合成培养基。养基。（3 3）按功能来分，可分为）按功能来分，可分为选择培养基和鉴别培选择培养基和鉴别培养基。养基。（一）分类：（一）分类：( (微生物生存的环境和营养物质微生物生存的环境和营养物质) )(1)固体培养基、液体培养基和

5、半固体培养基固体培养基、液体培养基和半固体培养基固体培养基固体培养基：（观察菌落和分离提纯微生物）：（观察菌落和分离提纯微生物）在一般培养温度下呈固体状态的培养基。在一般培养温度下呈固体状态的培养基。一类是用天然的固体状物质制成的，如用马铃薯块、麸皮、米糠、一类是用天然的固体状物质制成的，如用马铃薯块、麸皮、米糠、豆饼粉、花生饼粉制成的培养基，酒精厂、酿造厂等常用这种培豆饼粉、花生饼粉制成的培养基，酒精厂、酿造厂等常用这种培养基；养基；另一类是在液体中添加凝固剂而制成的，如实验室中常用的琼脂固另一类是在液体中添加凝固剂而制成的，如实验室中常用的琼脂固体斜面和固体平板培养基。这种培养基广泛用于微

6、生物的分离、体斜面和固体平板培养基。这种培养基广泛用于微生物的分离、鉴定、保藏、计数及菌落特征的观察等。鉴定、保藏、计数及菌落特征的观察等。 液体培养基或培养液或发酵液液体培养基或培养液或发酵液：（工业大规模培养：（工业大规模培养 ）呈液体状态的培养基。液体培养基因营养物质分布均匀，与菌体表呈液体状态的培养基。液体培养基因营养物质分布均匀，与菌体表面接触充分，还能大量溶解微生物的代谢产物等优点，广泛用于面接触充分，还能大量溶解微生物的代谢产物等优点，广泛用于微生物的生理、代谢研究以及大规模的工业化生产中。微生物的生理、代谢研究以及大规模的工业化生产中。半固体培养基：（半固体培养基：（观察微生物

7、的运动）观察微生物的运动）加入少量的凝固剂加入少量的凝固剂( (如如0.20.20.50.5的琼脂的琼脂) )而制成的培养基。这而制成的培养基。这种培养基常用于观察细菌的运动、厌氧菌的分离和菌种鉴定等。种培养基常用于观察细菌的运动、厌氧菌的分离和菌种鉴定等。 （2）天然培养基和合成培养基天然培养基和合成培养基天然培养基：（工业生产降低成本）天然培养基：（工业生产降低成本）主要取自动物体液或从动物组织分离提取。主要取自动物体液或从动物组织分离提取。其优其优点是营养成分丰富，培养效果良好，缺点是成分点是营养成分丰富，培养效果良好，缺点是成分复杂，来源受限。天然培养基复杂，来源受限。天然培养基/ /

8、液的种类很多，液的种类很多，包括生物性液体（如血清）；组织浸液（如胚胎包括生物性液体（如血清）；组织浸液（如胚胎浸液）；凝固剂（如血浆）等。浸液）；凝固剂（如血浆）等。合成培养基：（菌种的分类，鉴定，营养、代合成培养基：（菌种的分类，鉴定，营养、代谢谢 ，遗传、鉴定和生物测定等定量要求较高的，遗传、鉴定和生物测定等定量要求较高的研究）研究）是通过顺序加入准确称量的高纯度化学试是通过顺序加入准确称量的高纯度化学试剂与蒸馏水配制而成的。剂与蒸馏水配制而成的。其所含的成分（包括微其所含的成分（包括微量元素在内）以及他们的量都是确切可知的。量元素在内）以及他们的量都是确切可知的。（3）选择培养基和鉴别

9、培养基：选择培养基：配制特点：添加或减少某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需微生物的生长。从而使后者从含有杂菌的标本中分离从而使后者从含有杂菌的标本中分离出。（即出。（即筛选你所需要培养的微生物，令其生长，其筛选你所需要培养的微生物，令其生长，其余微生物不生长余微生物不生长 ）例如：(1)(1)基本的培养基通过加青霉素，实现分离纯化酵母菌、基本的培养基通过加青霉素，实现分离纯化酵母菌、霉菌；霉菌；（2 2）加高浓度的食盐分离纯化金黄色葡萄球菌（有高度加高浓度的食盐分离纯化金黄色葡萄球菌（有高度的耐盐性，可在的耐盐性，可在1015%NaCl1015%NaCl肉汤中生长肉汤中生长 ）（

10、3 3）无氮培养基可分离纯化固氮菌（固氮细菌无氮培养基可分离纯化固氮菌（固氮细菌 ）。（4 4）不含有机碳的培养基可分离纯化自养型细菌如硝化不含有机碳的培养基可分离纯化自养型细菌如硝化细菌。细菌。鉴别培养基：配制特点：在培养基中加入某种指示剂或化学药品，以鉴别不同种类的微生物。（即只能鉴别出你此种微生物是不是你所需要的微生只能鉴别出你此种微生物是不是你所需要的微生物，而不能抑制其余种类的微生物生长物，而不能抑制其余种类的微生物生长 ）例如：伊红美蓝培养基（1）用途：伊红美篮培养基一般用于检测）用途：伊红美篮培养基一般用于检测饮用水饮用水和乳制品中是否存在和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌。大肠杆

11、菌等细菌。（2 2）原理）原理：伊红为酸性染料，美篮为碱性染料。：伊红为酸性染料，美篮为碱性染料。当大肠杆菌分解当大肠杆菌分解乳糖产酸乳糖产酸时细菌带正电荷被染成时细菌带正电荷被染成红色红色，再与，再与美篮美篮结合形成结合形成紫黑色紫黑色菌落，并带有菌落，并带有金金属光泽。属光泽。例例1 1、要将土壤中的自生固氮菌（如原褐固氮菌）与其它、要将土壤中的自生固氮菌（如原褐固氮菌）与其它细菌分离出来，应将它们接种到（细菌分离出来，应将它们接种到（ ）A A加入指示剂的鉴别培养基加入指示剂的鉴别培养基 B B含有蛋白胨的固体含有蛋白胨的固体培养基培养基C C没有有机氮的选择培养基没有有机氮的选择培养基

12、 D D营养要素全面的液营养要素全面的液体培养基体培养基练一练练一练例例2 2、某同学在做微生物实验时，不小心把、某同学在做微生物实验时，不小心把原褐固氮菌和原褐固氮菌和酵母菌酵母菌混在一起，为了得到纯度较高的酵母菌，配制好混在一起，为了得到纯度较高的酵母菌，配制好的培养基中应再加入的培养基中应再加入（ ）A A高浓度的食盐高浓度的食盐 B B硝酸盐硝酸盐 C C伊红美蓝溶液伊红美蓝溶液 D D青霉素青霉素例例3 3、在培养、在培养金黄色葡萄球菌时污染了青霉菌金黄色葡萄球菌时污染了青霉菌，青霉菌菌，青霉菌菌落周围区域内金黄色葡萄球菌不能生存。下列相关叙述落周围区域内金黄色葡萄球菌不能生存。下列

13、相关叙述错误的是错误的是 （ ）A A青霉菌和金黄色葡萄球菌之间的关系为竞争青霉菌和金黄色葡萄球菌之间的关系为竞争B B要保留金黄色葡萄球菌，可用含高浓度食盐的培养基要保留金黄色葡萄球菌，可用含高浓度食盐的培养基进行选择进行选择C C若金黄色葡萄球菌仍然生存，可能发生了抗青霉素的若金黄色葡萄球菌仍然生存，可能发生了抗青霉素的基因突变基因突变D D补充适合金黄色葡萄球菌的营养能保存该菌补充适合金黄色葡萄球菌的营养能保存该菌（二）培养基配制原则（二）培养基配制原则：（1 1）目的要明确目的要明确：根据微生物的种类、培养目的等确：根据微生物的种类、培养目的等确定配制培养基的种类，因为不同的微生物对培

14、养物质定配制培养基的种类，因为不同的微生物对培养物质的需求不同。的需求不同。（2 2）营养要协调营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。：注意各种营养物质的浓度和比例。（3 3）pHpH要适宜要适宜：各种微生物适宜生长的：各种微生物适宜生长的pHpH范围不同。范围不同。细菌细菌pHpH为：为：6.5-7.56.5-7.5（偏碱）；（偏碱）；放线菌放线菌pHpH为：为：7.5-8.57.5-8.5；真菌真菌pHpH为：为：5.0-6.05.0-6.0（偏酸）。（偏酸）。a.异养型微生物的碳源为：异养型微生物的碳源为：含碳有机物（有机碳）含碳有机物（有机碳）b.自养型微生物的碳源为：自养型微生物

15、的碳源为：含碳无机物（无机碳）含碳无机物（无机碳）氨盐氨盐硝酸盐硝酸盐氮气氮气牛肉膏当中含有牛肉膏当中含有肌酸、肌酸酐、多肽类、氨基酸类、核苷酸类、肌酸、肌酸酐、多肽类、氨基酸类、核苷酸类、有机酸类、矿物质类及维生素类。有机酸类、矿物质类及维生素类。的水溶性物质。的水溶性物质。牛肉膏为微生物提供碳牛肉膏为微生物提供碳源源、氮源、氮源、能源、磷酸盐和维生素，能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供蛋白胨主要提供氮源氮源和和维生素维生素。 1.1.无菌范围：无菌范围：实验操作空间实验操作空间, ,操作者的手、衣着操作者的手、衣着消毒消毒. .将用于微生物培养的将用于微生物培养的器皿、接种器皿、接种用具

16、和培养基用具和培养基等器具进行灭菌。等器具进行灭菌。为避免周围环境中微生物的污染，为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在实验操作应在酒精灯火焰附近酒精灯火焰附近进行进行.实验操作时应避免已经实验操作时应避免已经灭菌处理灭菌处理的材料用具的材料用具与周围的物品相接触与周围的物品相接触.超净工作台超净工作台二二. .无菌技术：无菌技术：防止外来杂菌的污染防止外来杂菌的污染耐高温需保持干燥的耐高温需保持干燥的 物品，物品，160170 12小时小时接种环、接种针等接种环、接种针等 金属用具金属用具7075、30min 80、15min100、56min消毒消毒灭菌灭菌定义定义方法方法较为较为温和

17、温和理化方法，理化方法，杀死杀死部分有害菌体部分有害菌体（不不包括芽孢、孢子）包括芽孢、孢子）强烈强烈的理化方法，的理化方法，杀死杀死所有微生物所有微生物（包括（包括芽孢、孢子芽孢、孢子）煮沸消毒法煮沸消毒法巴氏消毒法巴氏消毒法化学药剂化学药剂紫外线紫外线灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌干热灭菌酒精、氯气、石炭酸等酒精、氯气、石炭酸等高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌培养基，培养基，100KPa、121、1530min2.2.消毒与灭菌：消毒与灭菌：1000ml1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O 定容至定容至1000mlNacl 5g蛋白胨蛋白胨 10g牛肉膏牛肉膏 5g琼脂琼脂

18、20.0g三三. .大肠杆菌的大肠杆菌的纯化纯化培养培养：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.1.计算：计算：培养基用量培养基用量依配方计算各成分的用量依配方计算各成分的用量2.2.称量：称量：3.3.溶化：溶化：牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、称量纸牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解、少量水加热溶解 取纸取纸蛋白胨、蛋白胨、NaClNaCl琼脂琼脂 补水定容补水定容4.4.调调pHpH、分装、封口：、分装、封口：1mol1mollNaoH调制微碱调制微碱5.5.灭菌：灭菌：6.6.倒平板

19、：倒平板：培养基、培养皿培养基、培养皿由由一个细胞一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，就是菌落繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，就是菌落约约50防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染灼烧灭菌，灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基防止瓶口的微生物污染培养基纯化大肠杆菌：纯化大肠杆菌：1.1.纯化的方法：纯化的方法：（1 1）平板划线法：）平板划线法：通过接种环在琼脂通过接种环在琼脂固体培养基固体培养基表面表面连续画线操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表连续画线操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，在数次画线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来面，

20、在数次画线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的子细胞群体，这就是菌落。的子细胞群体，这就是菌落。（2 2）稀释涂布平板法：）稀释涂布平板法：将菌液进行将菌液进行一系列的梯度稀释，一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基固体培养基的表的表面进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微面进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而在培养基表面形成单个菌生物将被分散成单个细胞，从而在培养基表面形成单个菌落。落。将接种环放在火将接种环放在火焰上灼烧，直到焰上灼烧，直到接种环接种环_在在_旁冷旁冷却接种环，

21、并却接种环，并打开棉塞打开棉塞 将试管口通过火焰将试管口通过火焰 .将已将已_的接种环伸的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液入菌液中蘸取一环菌液 左手将皿盖打开一条缝隙，右手左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，板内，划划_条平行线，条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。盖上皿盖。注意不要划破培养基。.将试管通过火将试管通过火焰，并塞上棉塞焰，并塞上棉塞 火焰火焰冷却冷却三至五三至五灼烧接种环，待其冷却后，从灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的第一区域划线的_开始开始往第二区域内划线。重复以上往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内

22、划操作，在三、四、五区域内划线。线。注意不要将最后一区的划注意不要将最后一区的划线与第一区相连。线与第一区相连。末端末端烧红烧红将平板将平板_放放入培养箱中培养。入培养箱中培养。 倒置倒置划划3 3个平板个平板1 1个不划线个不划线（空白对照）（空白对照）6 6支试管，分别加入支试管，分别加入9ml9ml无菌水无菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106稀释涂布平板法稀释涂布平板法：a.a.梯度稀释菌液梯度稀释菌液：菌液菌液微量微量 移移液器液器b.b.涂布平板涂布平板：不超过不超过0.1ml0.1ml各梯度分别涂布各梯度分别涂布3个平板个平板1 1个不涂布作

23、空白对照个不涂布作空白对照滴滴灼灼试试涂涂稀稀释释10103 3倍倍稀稀释释10104 4倍倍稀稀释释10105 5倍倍2.2.菌种培养菌种培养：3.3.实验结果观察实验结果观察将将接种后接种后的培养基和一个的培养基和一个未接种未接种的培养基的培养基放入放入3737恒温箱中培养恒温箱中培养12h12h24h24h后，后，观察并记录观察并记录四四. .菌种的保藏：菌种的保藏：1.1.临时保藏：临时保藏： 试管固体斜面培养基上试管固体斜面培养基上442.2.长期保存：长期保存：菌种易被污染、变异菌种易被污染、变异甘油管藏甘油管藏1ml1ml甘油甘油1ml1ml菌液菌液2020 (2013.18)

24、某研究小组从有机废水中分离微某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是生物用于废水处理。下列叙述正确的是() A培养基分装到培养皿后进行灭菌培养基分装到培养皿后进行灭菌 B转换划线角度后需灼烧接种环再进行划转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线线 C接种后的培养皿须放在光照培养箱中培接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养养 D培养过程中每隔一周观察一次培养过程中每隔一周观察一次【真题练习【真题练习】纤维素纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是含量最丰富的多糖类物质含量最丰富的多糖类物质。纤维素能被土壤中某些微生物。纤维素能

25、被土壤中某些微生物分解利用，这是分解利用，这是因为它们能够产生因为它们能够产生纤维素酶纤维素酶。课题课题3 分解纤维素的微生物的分离分解纤维素的微生物的分离（一）纤维素与纤维素酶（一）纤维素与纤维素酶 是自然界中纤维素含量最高的天然产物，是自然界中纤维素含量最高的天然产物，纤维素的分解需要在纤维素的分解需要在 的催化作用下完的催化作用下完成。成。棉花棉花纤维素酶纤维素酶纤维素酶是一种纤维素酶是一种 ，一般认为它至，一般认为它至少包括三种组分少包括三种组分，即，即 、C CX X酶酶和和 ，前两种酶使纤维素分解，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解酶将纤维二糖

26、分解成葡萄糖。成葡萄糖。纤维素纤维素纤维纤维二糖二糖葡萄糖葡萄糖C C1 1酶酶CxCx酶酶葡萄糖葡萄糖苷酶苷酶复合酶复合酶C1 1酶酶葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶(2009.22)(2009.22)加工橘子罐头，采用酸碱处理脱去加工橘子罐头，采用酸碱处理脱去中果皮中果皮( (橘络橘络) )，会产生严重污染。目前使，会产生严重污染。目前使用用酶解法酶解法去除橘络，可减少污染。下列生去除橘络，可减少污染。下列生长在特定环境中的长在特定环境中的4 4类微生物，可以大量产类微生物，可以大量产生所用酶的有生所用酶的有A A生长在麦麸上的黑曲霉生长在麦麸上的黑曲霉 B B生长在酸奶生长在酸奶中的乳酸菌中的乳酸菌

27、C C生长在棉籽壳上的平菇生长在棉籽壳上的平菇 D D生长在木屑生长在木屑上的木霉上的木霉（二）纤维素分解菌的筛选（二）纤维素分解菌的筛选1 1、筛选纤维素分解菌的方法是、筛选纤维素分解菌的方法是_。该方法可以通过该方法可以通过_反应直接筛选。反应直接筛选。刚果红染色法刚果红染色法颜色颜色2 2、其原理是：刚果红可以与纤维素形成、其原理是：刚果红可以与纤维素形成_，当纤维素被，当纤维素被_分解后，分解后，红色复合物无法形成，出现以红色复合物无法形成，出现以_为为中心的中心的_，我们可以通过，我们可以通过_来来筛选纤维素分解菌。筛选纤维素分解菌。红色复合物红色复合物纤维素酶纤维素酶纤维素分解菌纤

28、维素分解菌 透明圈透明圈是否产生透明圈是否产生透明圈土壤取样土壤取样选择培养选择培养梯度稀释梯度稀释将样品涂布到鉴别纤维将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上素分解菌的培养基上挑选产生透挑选产生透明圈的菌落明圈的菌落（此步可省略）（此步可省略）三三.实验流程实验流程1.1.选择培养选择培养增加纤维素分解菌的浓度增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品，以确保能够从样品中分离所需要的微生物。中分离所需要的微生物。 目的：目的：制备选择培养基：制备选择培养基：操作：操作：将土样加入装有将土样加入装有30ml30ml选择培养基的锥形瓶中，选择培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下震荡培

29、将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下震荡培养养1 12 2天，直至培养液变浑浊。也可重复选择天，直至培养液变浑浊。也可重复选择培养培养。培养基成分分析培养基成分分析培养基组成培养基组成提供主要的营养物质提供主要的营养物质纤维素粉纤维素粉 5g5g碳源（能源）碳源（能源）NaNONaNO3 3 1g 1g氮源、无机盐氮源、无机盐KCl 0.5g NaKCl 0.5g Na2 2HPOHPO4 47H7H2 2O O 1.2g1.2gKHKH2 2POPO4 4 0.9g MgSO0.9g MgSO4 4 7H7H2 2O O 0.5g0.5g无机盐无机盐酵母膏酵母膏 0.5g0.5g生长因子、生长

30、因子、氮源氮源水解酵素水解酵素 0.5g0.5g氮源、氮源、生长因子生长因子溶解后，蒸馏水定容至溶解后，蒸馏水定容至1000mL1000mL水水旁栏思考题为什么选择培养能够旁栏思考题为什么选择培养能够“浓缩浓缩”所需的微生物？所需的微生物？ 在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖，而那些不种营养条件的微生物得到迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到此可以起到“浓缩浓缩”的作用。的作用。指微生物的种类少了，而指微生物的种类少了，而某些微生物的数量多了某些微

31、生物的数量多了按照课题按照课题1 1的稀释操作方法，将选择培养后的稀释操作方法，将选择培养后的培养基进行等比稀释的培养基进行等比稀释10101 110107 7倍。倍。2.2.梯度稀释梯度稀释10101 110102 210103 310104 410105 510106 63.3.将样品涂布到将样品涂布到鉴别纤维素分解菌鉴别纤维素分解菌的培养的培养基上基上（1 1）制备鉴别培养基）制备鉴别培养基: :见课本见课本P29P29（2 2）涂布平板：）涂布平板：将稀释度为将稀释度为10104 410106 6的菌悬液各取的菌悬液各取0.1ml0.1ml涂布涂布到平板培养基上，到平板培养基上，303

32、0倒置培养。倒置培养。方法一：后置法。方法一：后置法。先培养微生物，再加入刚先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应果红进行颜色反应方法二：前置法。方法二：前置法。在倒平板时就加入刚果红在倒平板时就加入刚果红思考：这两种方法各有哪些优点与不足思考：这两种方法各有哪些优点与不足染色法染色法优点优点缺点缺点方法一方法一（后加刚（后加刚果红）果红） 方法二方法二（先加刚（先加刚果红）果红） 颜色反应基本上颜色反应基本上是纤维素分解菌是纤维素分解菌的作用的作用操作繁琐，刚果红会使操作繁琐，刚果红会使菌落之间发生混杂菌落之间发生混杂操作简便，不存操作简便，不存在菌落混杂问题在菌落混杂问题产生淀粉酶的微生物

33、也产生模产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈，有些微生物能降解糊透明圈，有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。色素，形成明显的透明圈。1 1从土壤中分离能分解尿素的细菌，可以利用选从土壤中分离能分解尿素的细菌，可以利用选择培养基，其成分中一定有择培养基，其成分中一定有尿素尿素 有机氮化合物有机氮化合物 无机盐无机盐 有机碳有机碳化合物化合物 水水 无机碳化合物无机碳化合物A A B B C C D D 2. 2. 培养基中浓度过高抑制微生物生长的原因是培养基中浓度过高抑制微生物生长的原因是（ ）A A含热量太多含热量太多 B B 会使微生物失水会使微生物失水 C C 导致微生物休眠导致微生物休

34、眠 D D培养基中的碳源和氮源比例培养基中的碳源和氮源比例失衡失衡3作为自养生物唯一碳源的是（作为自养生物唯一碳源的是（ ）A糖类糖类 B 石油石油 C 二氧化碳二氧化碳 D 花生粉饼花生粉饼4有关倒平板的操作错误的是有关倒平板的操作错误的是( ) A将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上 B使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰 C将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌子上将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌子上 D等待平板冷却凝固后需要倒过来放置等待平板冷却凝固后需要倒过来放置5 5有关平板划线操作正确的是有关平板划线操作正确的是( )( )A A使用

35、已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌B B打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞塞 C C将沾有菌种的接种环迅速伸人平板内，划三至五条平行线即可将沾有菌种的接种环迅速伸人平板内，划三至五条平行线即可D D最后将平板倒置，放人培养箱中培养最后将平板倒置，放人培养箱中培养6.6.有关稀释涂布平板法，叙述错误的是有关稀释涂布平板法，叙述错误的是( )( )A A首先将菌液进行一系列的梯度稀释首先将菌液进行一系列的梯度稀释B B然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基然后将

36、不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面的表面C C再放在适宜条件下培养再放在适宜条件下培养 D D结果都可在培养基表面形成单个的菌落结果都可在培养基表面形成单个的菌落 7.7.在对纤维素分解菌进行选择培养时用液体培养在对纤维素分解菌进行选择培养时用液体培养基的目的是（基的目的是（ ） A A用液体培养基可获得大量菌体用液体培养基可获得大量菌体 B B纤维素分解菌适宜在液体培养基上生长纤维素分解菌适宜在液体培养基上生长 C C用液体培养基可以充分利用培养基中营养物用液体培养基可以充分利用培养基中营养物质质 D D用液体培养基可获得高纯度的纤维素分解菌用液体培养基可获得高纯度的纤维素分解菌

37、 8.8.尿素是尿素分解菌的氮源，因此在配制培养基尿素是尿素分解菌的氮源，因此在配制培养基时（时（ ） A A葡萄糖在培养基中含量越多越好葡萄糖在培养基中含量越多越好 B B尿素在培养基中含量越少越好尿素在培养基中含量越少越好 C C尿素分解菌有固氮能力，故培养基中尿素为尿素分解菌有固氮能力，故培养基中尿素为无机氮无机氮 D D尿素分解菌无固氮能力，故培养基中的尿素尿素分解菌无固氮能力，故培养基中的尿素为化合态氮为化合态氮 9.9.以纤维素为唯一碳源筛选出多种具有较高纤以纤维素为唯一碳源筛选出多种具有较高纤维降解能力的微生物，其中有真菌和细菌，试维降解能力的微生物，其中有真菌和细菌，试分析此类

38、微生物在生态系统中的作用与下列哪分析此类微生物在生态系统中的作用与下列哪种生物类似（种生物类似（ ） A A硝化细菌硝化细菌B B蓝藻蓝藻 C C蚯蚓蚯蚓D D兔子兔子10.10.某同学在做微生物实验时，不小心把某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌和酵圆褐固氮菌和酵母菌母菌混在一起该同学设计下面的实验，混在一起该同学设计下面的实验，分离得纯度较高分离得纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌。的圆褐固氮菌和酵母菌。(1)(1)实验原理：实验原理：圆褐固氮菌是自生固氮菌圆褐固氮菌是自生固氮菌，能在无氮培养，能在无氮培养条件下生长繁殖而酵母菌则不能；条件下生长繁殖而酵母菌则不能；青霉素不影响酵母菌青霉素

39、不影响酵母菌的生长繁殖，而会抑制圆褐固氮菌的生长繁殖的生长繁殖，而会抑制圆褐固氮菌的生长繁殖。(2)(2)材材料用具：（略）料用具：（略） (3)(3)主要步骤：主要步骤：制备两种培养基，一种是制备两种培养基，一种是 培养基，另一种是培养基，另一种是 培养基，将两种培养基各自分成两份，依次标上培养基，将两种培养基各自分成两份，依次标上A A、a a和和B B、b b。分别向分别向A A、B B培养基中接种混合菌，适宜条件培养了培养基中接种混合菌，适宜条件培养了3 34 4天。天。分别从分别从A A、B B培养基的菌落中挑取生长良好的菌并分别接培养基的菌落中挑取生长良好的菌并分别接种到种到a a

40、、b b培养基中，适宜条件下培养培养基中，适宜条件下培养3 34 4天。天。(4)(4)请同答：请同答：将题中的空处填充完整：将题中的空处填充完整： 培养培养基和基和 培养基。培养基。本实验中，根据上述原理配制的培养基的类型本实验中，根据上述原理配制的培养基的类型属于属于 培养基。培养基。根据所需目的配制上述培养基时除营养要协调外还应注根据所需目的配制上述培养基时除营养要协调外还应注意意 。 实验步骤中第实验步骤中第步的目的步的目的是是 。圆褐固氮菌与酵母菌在结构上的主要差异圆褐固氮菌与酵母菌在结构上的主要差异为为 。青霉素抑制圆褐固氮菌的生长繁殖，其作用机理是破坏青霉素抑制圆褐固氮菌的生长繁

41、殖，其作用机理是破坏或抑制其细胞壁的形成。请据此推测不影响酵母菌等真或抑制其细胞壁的形成。请据此推测不影响酵母菌等真菌生长繁殖的原因是什么？菌生长繁殖的原因是什么？答案答案: :无氮无氮 含青霉素的含青霉素的 选择选择 pHpH要适宜要适宜 分离得到纯度较高的圆褐固氮分离得到纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌菌和酵母菌圆褐固氮菌无成形的细胞核圆褐固氮菌无成形的细胞核 圆褐固氮圆褐固氮菌为原核生物，其细胞壁主要为糖类和蛋白质，而酵母菌为原核生物，其细胞壁主要为糖类和蛋白质，而酵母菌则不同菌则不同第二讲第二讲DNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定一一.提取提取DNA的方法：的方法：（1）DNA的溶解性：的溶

42、解性：【思考【思考1】DNA在氯化钠溶液中的溶解度有什么特点？对在氯化钠溶液中的溶解度有什么特点？对此有什么应用？此有什么应用？ 【思考【思考2】利用什么原理可以来将】利用什么原理可以来将DNA与蛋白质进一步分与蛋白质进一步分离开？离开？ （2）DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性：对酶、高温和洗涤剂的耐受性：蛋白酶能水解蛋白酶能水解 ，但对，但对 没有影响；没有影响；大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白质不能忍受 的高温，而的高温，而DNA在在 以上才会变性。以上才会变性。 能够瓦解细胞膜，但对能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。没有影响。（3）DNA的鉴定：的鉴定：如何鉴定如何鉴定DNA？DNA在在

43、在NaClNaCl溶液浓度低于溶液浓度低于0.14 mol/L0.14 mol/L时，时，DNADNA的溶的溶解度随解度随NaClNaCl溶液浓度的溶液浓度的增 加 而 逐 渐 降 低 ； 在增 加 而 逐 渐 降 低 ； 在0.14 mol/L0.14 mol/L时，时，DNADNA溶解溶解度最小；当度最小；当NaClNaCl溶液浓溶液浓度继续增加时，度继续增加时，DNADNA的溶的溶解度又逐渐增大。解度又逐渐增大。当氯化钠的物质的量浓度为 2 molL时，DNA的溶解度比较大，浓度为 014 molL时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出。 1.必修一学习的

44、质壁分离，你还记得方法和原理吗? 2. （1）溶解细胞核内的溶解细胞核内的DNADNA在浓度较高的在浓度较高的NaClNaCl溶液中核蛋白容易解聚，游离出的溶液中核蛋白容易解聚，游离出的DNADNA溶溶解在溶液中。解在溶液中。方法方法：在溶液中加入两倍体积的浓度为：在溶液中加入两倍体积的浓度为2 mol/L2 mol/L的的NaClNaCl溶溶液，搅拌液，搅拌1 min1 min。注意应沿一个方向搅拌注意应沿一个方向搅拌，使，使DNADNA充分溶解。充分溶解。（2 2） DNADNA的析出的析出 加蒸馏水降低加蒸馏水降低NaClNaCl溶液浓度，使溶液浓度，使DNADNA析出。析出。方法方法：

45、实验中应该缓慢贴壁加入：实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水蒸馏水，并轻轻地，并轻轻地沿一个沿一个方向不停地均匀搅拌方向不停地均匀搅拌，以利于，以利于DNADNA分子的附着和缠绕。分子的附着和缠绕。同时应注意控制加水量，使同时应注意控制加水量，使NaClNaCl溶液的终浓度为溶液的终浓度为0.10.10.2 0.2 mol/Lmol/L。加水过程一般分三次进行，当总加水量为。加水过程一般分三次进行，当总加水量为300 mL300 mL左右时，左右时，DNADNA已基本析出。加水太多、溶液过稀，会使已基本析出。加水太多、溶液过稀，会使DNADNA分子又重新溶解。分子又重新溶解。用用3 34 4层纱布对层

46、纱布对DNADNA稀释液进行稀释液进行过滤过滤，滤去蛋白质，收集，滤去蛋白质，收集DNADNA的黏稠物。如果采用离心法，效果更好。用的黏稠物。如果采用离心法，效果更好。用4 000 4 000 r/minr/min转速的离心机，离心转速的离心机，离心15 min15 min，除去上清液，除去上清液( (含有蛋白含有蛋白质质) )，留下的沉淀物中含有，留下的沉淀物中含有DNADNA。此时注意观察。此时注意观察DNADNA黏稠物黏稠物的颜色。的颜色。（3）将）将DNA黏稠物再溶解，黏稠物再溶解， 思考：方案二与方案三的原理有什么不同？ 方案二方案二利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取利用蛋白酶分解杂

47、质蛋白，从而使提取的的DNA与蛋白质分开与蛋白质分开 方案三方案三利用的是利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离分离 思考：为什么加入预冷的酒精？预冷的乙醇溶液具有以下优点。预冷的乙醇溶液具有以下优点。1.1.抑制核酸水解酶活性，防止抑制核酸水解酶活性，防止DNADNA降解降解2.2.降低分子运动，易于形成沉淀析出降低分子运动，易于形成沉淀析出3.3.低温有利于增加低温有利于增加DNADNA分子柔韧性，减少断裂分子柔韧性，减少断裂二苯胺法二苯胺法在沸水浴的条件下，在沸水浴的条件下，DNADNA遇二苯胺变蓝。遇二苯

48、胺变蓝。DNADNA的鉴定的鉴定方法步骤方法步骤 加入物质加入物质 目的目的 1.制备鸡血细胞液制备鸡血细胞液 柠檬酸钠溶液柠檬酸钠溶液 2.提取鸡血细胞细胞核物质提取鸡血细胞细胞核物质 20 m120 m1蒸馏水蒸馏水 3.溶解细胞核内的溶解细胞核内的DNADNA 2 mo12 mo1 L 的 NaCl 溶液 40 mL 4.析出含DNA的黏稠物 蒸馏水 5.滤取含DNA的黏稠物 6.将DNA的黏稠物再溶解 2 molL 的NaCl溶液20 mL 7.过滤含DNA的NaCl 溶液 8.提取含有杂质较少的 DNA 冷却的95的酒精50 mL A:(1)向试管中加入2molL 的NaCl溶液5mL (2)加入DNA (3)4 mL二苯胺试剂 9.DNA的鉴定 B:(1)向试管中加入 2mol L 的NaCl溶液5mL (2)4 mL 二苯胺试剂 加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固加速血细胞破裂加速血细胞破裂