项目一紫外分光光度计的使用

1、2022-5-11仪器分析实验1任务2：紫外可见分光光度计的使用紫外-可见分光光度法模块之2022-5-11仪器分析实验22022-5-11仪器分析实验3 最新设计的 UV1801是通用型具有扫描功能的紫外可见分光光度计，可满足各种应用的要求，可用在生物研究、生物工业、药物分析、制药、教学研究、环保、食品卫生、临床检验、卫生防疫等领域。波长范围： 1901100nm显示方式： 六英寸高亮度蓝色液晶显示屏检测器： 进口硅光二极管光源： 进口氘灯，进口钨灯2022-5-11仪器分析实验4波长范围： 1901100nm显示方式： 液晶检测器： 进口硅光电池光源： 进口氘灯、进口卤钨灯具有波长扫描、时

2、间扫描、多波长测定等多种测量方法，可满足不同测量的要求。2022-5-11仪器分析实验5l1 1、定性分析、定性分析 通常根据吸收光谱的形状、吸收峰的数目以及最大吸收波长的位置和相应的摩尔吸收系数进行定性鉴定。 一般采用比较光谱法：即在相同的测定条件下，比较待测物与已知标准物的吸收光谱曲线，如果它们的吸收光谱曲线完全等同，则可认为是同一物质。2022-5-11仪器分析实验62022-5-11仪器分析实验7在进行定性鉴定时，需要注意：在进行定性鉴定时，需要注意：1 1）. .测试溶剂测试溶剂：应当对标准物和待测物有良好的溶解：应当对标准物和待测物有良好的溶解度，本身在测定的波长内无光的吸收，有良

3、好的稳度，本身在测定的波长内无光的吸收，有良好的稳定性。定性。2 2）. .测试的条件测试的条件：标准物和待测物测试条件要完全相：标准物和待测物测试条件要完全相同，如溶剂、同，如溶剂、PHPH、离子强度、温度及所用仪器等。、离子强度、温度及所用仪器等。3 3）. .更改测试条件更改测试条件：为了防止测试数据的假象，要对：为了防止测试数据的假象，要对现有某些条件进行适当的变换，改变其中的某些测现有某些条件进行适当的变换，改变其中的某些测定条件，然后看标准物和待测物的吸收光谱是否仍定条件，然后看标准物和待测物的吸收光谱是否仍然完全相同。然完全相同。2022-5-11仪器分析实验8l二、定量分析二、

4、定量分析-标准曲线法 配制一系列不同含量的待测组分的标准溶液，以不含待测组分的空白溶液为参比，测定标准溶液的吸光度。并绘制吸光度浓度曲线，得到标准曲线（工作曲线），然后再在相同条件下测定试样溶液的吸光度。由测得的吸光度在曲线上查得试样溶液中待测组分的浓度，最后计算得到试样中待测组分的含量。2022-5-11仪器分析实验9ACCxAx标准曲线标准曲线/ /工作曲线制作工作曲线制作根据光的吸收定律根据光的吸收定律: :吸光度与吸光物质吸光度与吸光物质的含量成正比，这的含量成正比，这是光度法进行定量是光度法进行定量的基础，的基础，标准曲线标准曲线就是根据这一原理就是根据这一原理制作的。制作的。202

5、2-5-11仪器分析实验10定性分析与定量分析的基础定性分析与定量分析的基础定性分析基础定性分析基础定量分析基础定量分析基础物质对光的选择吸收物质对光的选择吸收物质的电子结构不同，所能物质的电子结构不同，所能吸收光的波长也不同，这就吸收光的波长也不同，这就构成了物质对光的选择吸收构成了物质对光的选择吸收基础。基础。ABA )(maxA)(maxB在一定的实验条件下，在一定的实验条件下，物质对光的吸收与物质物质对光的吸收与物质的浓度成正比。的浓度成正比。A C增增大大2022-5-11仪器分析实验11l 未知物的定性分析未知物的定性分析 未知物未知物40-60ug/mL稀释稀释未知物未知物10u

6、g/mL210350nm 波 长 (nm) Abs确定未知物及最大吸收波长确定未知物及最大吸收波长2022-5-11仪器分析实验12 波 长 (nm) Abs 波 长 (nm) Abs苯甲酸苯甲酸水杨酸水杨酸2022-5-11仪器分析实验13l 未知物定量分析未知物定量分析 水杨酸标水杨酸标准储备液准储备液1mg/mL精密吸取精密吸取10ml10ml定容至定容至100ml100ml，移取移取测量吸测量吸光度光度4ml6ml8ml10ml定容定容至至50ml50ml8ug/mL12ug/mL16ug/mL20ug/mL水杨酸未水杨酸未知液知液精密吸取精密吸取10ml10ml定容至定容至50ml5

7、0mlAx水杨酸水杨酸浓度？2022-5-11仪器分析实验14苯甲酸标苯甲酸标准储备液准储备液1mg/mL精密吸取精密吸取5ml5ml定容至定容至100ml100ml，移取移取测量吸测量吸光度光度2ml4ml6ml8ml定容定容至至50ml50ml2ug/mL4ug/mL6ug/mL8ug/mL水杨酸水杨酸未知未知液液精密吸取精密吸取5ml5ml定容至定容至50ml50mlAx苯甲酸苯甲酸2022-5-11仪器分析实验15UV1101分光光度计的使用分光光度计的使用l1.初始化l2.主菜单2022-5-11仪器分析实验16l3 3、定量分析、定量分析l选择选择PhotometryPhotome

8、try（ 定量运算）定量运算） 时，时， 按数字键按数字键11， 则则画面进入下一级子菜单，画面进入下一级子菜单， 即即PhotometryPhotometry（ 定量运算）定量运算） 子菜单。子菜单。l如果希望返回上一级菜单，如果希望返回上一级菜单， 请按请按CLEAR RETURNCLEAR RETURN。如果。如果希望返回到主菜单画面，希望返回到主菜单画面， 请按请按MAIN MENUMAIN MENU。2022-5-11仪器分析实验17l3.1 透过率/吸光度（%T/Abs）测定模式12022-5-11仪器分析实验18条件设定条件设定2022-5-11仪器分析实验19l（ 2） 自动调

9、零（自动调零（ AUTOZERO） 条件设定完成后， 仪器的显示屏进入如图3-8所示的画面。此时将装有空白样品（ 例如蒸馏水） 的比色皿放入样品室中， 再按START/STOP键， 可进行零点的自动调整。2022-5-11仪器分析实验20l3） 测定测定l自动调零完成后，即可进行样品的测定。将装有空白样品的比色皿取出， 换成装有被测样品的比色皿，再按START/STOP键进行测量。得到各对应波长的数据值后， 仪器的显示屏进入如图3-9 所示的画面。如果希望更改测定条件，如果希望更改测定条件， 只要按只要按CLEAR RETURNCLEAR RETURN键，键， 即可返回条件设定画面。即可返回条

10、件设定画面。2022-5-11仪器分析实验21l3.2 扫描测定模式主菜单主菜单2022-5-11仪器分析实验22l在 MAIN MENU 主菜单画面（ 图3-2） 中， 按数字键2， 则画面进入波长扫描子菜单， 如图2022-5-11仪器分析实验23（1）条件测定2022-5-11仪器分析实验24l2 2） 基线校正（基线校正（ Baseline CalibrationBaseline Calibration）条件设定完成后， 仪器的显示屏进入如图3-39 所示的画面。此时将装有空白样品（ 例如蒸馏水） 的比色皿放入样品室中， 再按START/STOP键， 则可进行基线的自动校正。在扫描测定过程中，在扫描测定过程中， 如果按如果按START/STOP键，键， 则该键则该键起起STOP（ 停止）功能；停止）功能； 在其他情况下按在其他情况下按START/STOP键，键， 则该键起则该键起START（ 启动）启动） 功能。功能。2022-5-11仪器分析实验25l3） 样品测定样品测定l基线校正完成后， 仪器的显示屏会进入如图3-41 所示的画面。2022-5-11仪器分析实验26l将装有被测样品的比色皿放入样品室中， 按 START/STOP键， 则