酶工程问答题附答案

1、酶工程问答题1 .为什么滞后合成型的酶要在细胞生长一段时间甚至进入平衡期以后才开始合成？滞后合成酶在细胞生长一段时间或者进入平衡期以后才开始其生物合成并大量积累，又称为非生长偶联型，许多水解酶的生物合成都属于这一类型。主要原因是由于受到培养基中存在的阻遏物的阻遏作用。只有随着细胞的生长，阻遏物几乎被细胞用完而使阻遏解除后，酶才开始大量合成。若培养基中不存在阻遏物，该酶的合成可以转为延续合成型。该类型酶所对应的mRNA1定性很好，可以在细胞生长进入平衡期后的相当长的一段时间内，继续进行酶的生物合成。2 .酶的发酵生产过程中，要使酶的产率提高，可以采取哪些措施？首先要使用优良的产酶细胞；使用优良的

2、发酵生产设备；采用先进的分离纯化技术和设备；控制好工艺条件；采取某些有效的措施：增加诱导物、控制阻遏物浓度、增加表面活性剂、增加产酶促进剂。3 .酶发酵动力学研究的内容包括哪些？细胞生长动力学主要研究细胞生长速度以及外界环境因素对细胞生长速度影响的规律。产酶动力学主要研究细胞产酶速率以及各种环境因素对产酶速率的影响规律。基质消耗动力学主要研究发酵过程中基质消耗速率以及各种环境因素对基质消耗速率的影响规律。4 .简述酶沉淀的主要方法及其原理。沉淀分离是通过改变某些条件或添加某种物质，使酶或杂质的溶解度降低，而从溶液中沉淀析出，与其它溶质分离的技术过程。物:淀分熟与法分点原理盘析沉淀法利M不同蛋白

3、原在不同的括浓度条件卜溶解度不同的特性，通过在崛液中添加一定浓度的中性蔻，使陶成杂质从溶液中析出沉淀.等电点沉淀法利用两性电解砥在等电点时溶解度最保，以及不同的两性电解质有不同的等电点这一特性，通过调节溶液的闭值，使福述杂质沉淀析出、行机溶剂沉淀法利用酶与其它杂唉在有机溶剂中的溶解度不同，通过添加定最的某种行机溶剂,使能或杂质沉淀析出、更合沉淀法在醉液中加入某些物质，使它学前形成夏合物而沉淀下来选择性变性沉淀法选择一定的条件使幅液中存在的某些杂质变性沉淀，而不影响所需的酶1从而使懵与杂质分高在盐浓度达到某一界限后，酶的溶解度随盐浓度升高而降低，这称为盐析现象。有机溶剂使溶液的介电常数降低，溶质

4、分子间的静电引力增大，互相吸引而易于凝集。有机溶剂与水互相作用还可破坏溶质分子表面的水膜，使其溶解度降低而沉淀析出。5 .简述凝胶层析的原理。凝胶层析：以各种多孔凝胶为固定相，利用流动相中所含各种组分的相对分子质量不同而达到物质分离的一种层析技术。原理：凝胶层析柱中装有多孔凝胶，当含有各种组分的混合溶液流经凝胶层析柱时，大分子物质由于分子直径大，不能进入凝胶的微孔，只能分布于凝胶颗粒的间隙中，以较快的速度流过凝胶柱。较小的分子能进入凝胶的微孔内，不断地进出于一个个颗粒的微孔内外，这就使小分子物质向下移动的速度比大分子的速度慢，从而使混合溶液中各组分按照相对分子质量由大到小的顺序先后流出层析柱，

5、而达到分离的目的。6 .简述不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理。不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳是将2-3种不同的凝胶重叠使用，用2种不同ph的缓冲液，使浓度较低的组分在电泳过程中浓缩成层，以提高分辨率的方法。浓缩效应a.凝胶层的不连续性：两层凝胶孔径不同，浓缩胶孔径大，分离胶孔径小，蛋白质在大孔径浓缩胶中移动，受阻力小，移动速度快。b.缓冲液离子成分的不连续性：甘氨酸解离度很小，有效迁移率很低，在电场中移动速度慢，为慢离子。HC1是强电解质，C1-有效迁移率大，移动速度快，为快离子。蛋白质介于两者之间。c.pH值的不连续性：为了控制慢离子的解离度，从而控制其有效迁移率，必须使浓缩胶与分离胶之间pH值有所

6、区别。电荷效应：进入分离胶后，G1y成为快离子，高电位梯度消失，各组分在均一的电位梯度下电泳分离。分子筛效应：再加上分离胶孔径较小，各组分因分子大小和形状不同而分离。7 .酶分子修饰的意义。提高酶的催化效率增强酶的稳定性降低或消除酶的抗原性改变酶的底物专一性研究和了解酶分子中主链、侧链、组成单位、金属离子和各种物理因素对酶分子空间构象的影响，进一步探究其结构与催化特性之间的关系。8 .酶修饰后的性质变化。热稳定性：一般来说，热稳定性有较大的提高。抗原性：比较公认的是PEGm人血清白蛋白在消除酶的抗原性上效果比较明显。各类失活因子的抵抗力：修饰酶对蛋白酶、抑制剂均有一定的抵抗能力，从而提高其稳定

7、性。半衰期：一般在体内的半衰期得到有效延长。由于酶分子经修饰后，增强对热、蛋白酶、抑制剂等的稳定性，从而延长了在体内的半衰期。最适pH:大部分酶经化学修饰后，酶的最适pH发生了变化。修饰酶最适pH更接近于生理环境。Km的变化：大多数酶经修饰后，Vm没有明显变化，但有些酶经修饰后,Km值变大。9 .什么是固定化酶，固定化酶的特性与游离酶相比有哪些改变？固定化酶：固定在载体上或被束缚在一定的空间范围内进行催化反应的酶，由于受到载体等的影响，酶的特性可能会有些变化。固定化酶的稳定性一般比游离酶的稳定性好。固定化酶的最适作用温度一般与游离酶差不多，但有些固定化后出现明显变化。酶经过固定化后，其作用的最

8、适pH直往往会发生一些变化。固定化酶的底物特异性与游离酶比较可能有些不同，其变化与底物分子量的大小有一定关系。固定化酶的活力在大多数情况下比天然酶下降，其专一性也会受到影响发生改变。10 .固定化酶特性改变的因素有哪些？酶本身的变化：主要是由于活性中心的氨基酸残基、高级结构和电荷状态等发生了变化。受固定化载体的物理或化学性质的影响：a.空间障碍效应：固定化之后，由于酶的空间自由度受到限制，使酶分子的活性基团不易于底物或效应物接触，影响酶分子的分子活性中心对底物的定位作用，对固定化酶的活力造成影响。b.分配效应：微环境是在固定化酶附近的局部环境，而将主体溶液称为宏观环境。由于载体和底物的性质差异

9、引起了两者之间的性质不同，造成产物和各种效应物在两个环境之间的不同分配。c.扩散限制效应：底物从宏观环境向酶颗粒表面传递过程中产生外扩散阻力，使底物在固相酶周围形成浓度梯度。底物分子达到固相酶表面后传递到酶活性部位时，由于载体小而弯曲的细孔，产生内扩散阻力。11 .酶在非水介质中的催化反应具有哪些新特征和优势？可进行水不溶或水溶性差化合物的催化转化，大大拓展了酶催化作用的底物和生成产物的范围。改变了催化反应的平衡点，使在水溶液中不能或很难发生的反应向期望的方向得以顺利进行如在水溶液中催化水解反应的酶在非水介质中可有效催化合成反应的进行。使酶对包括区域专一性和对映体专一性在内的底物专一性大为提高

10、，使对酶催化作用的选择性的有目的的调控的实现成为可能。提高了一些酶的热稳定性。由于酶不溶于大多数的有机溶剂，使催化后酶易于回收和重复利用。可有效减少或防止由水引起的副反应的产生。可避免在水溶液中进行长期反应时微生物引起的污染。可方便地利用对水分敏感的底物进行相关的反应。当使用挥发性溶剂作为介质时，可使反应后的分离过程能耗降低。12 .酶在有机溶剂介质中与在水溶液中的催化特性有何改变？底物专一性有机介质中酶活性中心结合部位与底物的结合状态发生改变，致使酶的底物特异性发生改变，极性较强的有机溶剂中，疏水性较强的底物易反应，极性较弱的有机溶剂中，疏水性较弱的底物易反应。对映体选择性：酶在对称的外消旋

11、化合物中识别异构体的能力。酶在水溶液中立体选择性强，疏水性强的有机溶剂中的酶的立体选择性弱。区域选择性：酶能够选择性地催化底物分子中某个区域的基团优先发生反应。在不同的有机溶剂介质中，区域选择系数相差较大。键选择性：优先与某化学键反应。随着介质种类改变而变化。热稳定性许多酶在有机介质中的热稳定性比在水中好。PH有机溶剂中酶的最适pH通常与在水溶液的pH接近，但有些相差较大。13 .简述有机介质中酶催化反应的影响因素及控制。影响因素主要有：酶、底物、有机溶剂种类、水含量、温度、pH值和离子强度等。酶的种类和浓度不同酶具不同结构和特性，要注意酶的稳定性、底物专一性，对映体选择性等特性。酶反应速度与

12、酶浓度成正比。底物的种类和浓度根据底物的极性与底物在有机溶剂中的专一性不同选择合适的底物，并将浓度控制在适宜的浓度范围以确保较高的酶反应速率。有机溶剂的极性和含量有机溶剂的极性不同与含量会对酶分子结构和底物、产物的分配有不同的影响。过强，夺取较多酶表面水分子，使疏水性底物溶解度降低；极性过弱，底物难以进入必需水层。水含量与水活度有最适水含量，且随溶剂极性增大而增大。水活度变化不大，一般在0.5-0.6。温度温度升高，反应速率加快，但过高的温度会降低立体选择性甚至使酶失活，要控制在最适温度范围内。phph记忆：在有机介质溶剂中，酶所处的ph环境与吸附到载体上之前的缓存液ph相同（保留了原有的解离

13、状态）。可通过调节缓冲液pH和离子强度的方法调节有机介质中酶的活性。14 .试述酶反应器的主要类型和特点。反应器类型适用的操作方式适用的st畤点搅拌耀式分批式1流加分批式连接式游离睥固定化标反应比较完全，反厘条件容易调节控制，填充床式连续式固定化孱密度大，可以提高酷催化反应的速发，在工业生产中普遍使用,流化床分批式流加分批式连展式固定化醵流化床反应警具有混合均匀.传随和传热数果好，温度和闭值的调节控制比较容易,不妫堵塞，对粘度较大反应液也可进行催化反应.反便器类型适用的操作方式适用的薛特点1鼓泡式分批式漉加分批式雄续式游离博同定化鼓泡式反应器的结构荷单，操作容易，剪切力小r混合效果好，传册、特

14、热效率高.适合于有气体参与的反应.膜反应盘连续式游离陈固定化解长期使用易堵塞.清洗比较困难B喷射式连鳗式醇寓酹通入高压喷射蒸汽，实现1与底物的混合，进行高温短时催化反应，适用于某些耐高混海的反施.15 .简述酶反应器的操作条件及其控制的主要内容。温度根据酶的动力学特性，确定最适温度，通过夹套、列管等换热装置的热交换作用，将反应温度控制在适宜温度范围内。喷射式反应器中，通过控制水蒸汽的压力来控温。ph确定最适pH,一边搅拌一边慢慢添加稀酸或稀碱（必要时用缓冲溶液）使ph在适宜的范围内。分批式反应器中，先将底物调好ph再加入酶。连续式反应器中连续加入调好PH勺底物。底物浓度确定一个适宜的底物浓度范

15、围，通常底物浓度在510Km,防止高浓度底物的抑制作用。酶浓度综合考虑反应速度和成本，确定一个适宜的酶浓度。对连续式固定化酶反应器应具备添加或更换酶的装置，而且要求这些装置的结构简单、操作容易搅拌速度试验的基础上确定适宜的搅拌速度，并根据情况的变化进行搅拌速度的调节。搅拌速度过慢，会影响混合的均匀性，反应速率慢。搅拌过快，产生的剪切力会使酶的结构受到影响，尤其是会使固定化酶的结构破坏甚至破碎。流动速度确定适宜的流动速度和流动状态，保证酶与底物混合均匀，并不影响酶的催化，并根据变化情况确定进行适当的调节。如流化床反应器中通过控制进液口的流体流速和流量以及进液管的方向和排布等方法，加以调节。16

16、.蛋白质工程的概念及研究内容。蛋白质工程是以蛋白质的结构与功能的关系研究为基础，利用基因工程技术、化学、生物信息学等手段对现存蛋白质加以改造，组建成新型蛋白质的现代生物技术。主要研究内容：确定蛋白质化学组成、空间结构与生物功能之间的关系。从氨基酸序列预测蛋白质的空间结构和生物功能，设计合成具有特定生物功能的全新蛋白质。根据需要合成具有特定氨基酸序列和空间结构的蛋白质。17 .蛋白质结构及功能关系。一级结构相似的蛋白质其功能往往相似，活性中心的个别氨基酸残基的改变会导致功能的显著改变。一级结构包含了其分子的所有信息，并决定其高级结构，高级结构和其功能密切相关，如蛋白质的变性及复性对蛋白质功能的影

17、响。18 .蛋白质折叠的保护机制。蛋白质的折叠：从体内新生的多肽链或体外变性的多肽链的一维线性氨基酸序列转化为具有特征三维结构的活性蛋白质的过程。折叠密码，氨基酸顺序与蛋白质三维结构之间存在着的对应关系。分子伴侣，是一类可以阻止错误折叠，通过结合和释放帮助新生肽链正确折叠的蛋白质。折叠酶a.蛋白质二硫键异构酶（PDI）,可以催化多肽链折叠成有利于二硫键形成的构象，并防止二硫键的错配和分子间聚合。b.肽基脯氨酰顺反异构酶（PPI）,是很多蛋白体外折叠过程中的限速酶，可以催化反式肽基脯氨酰键异构成顺式构象，使多肽链形成正确折叠。19 .蛋白质分子设计的种类有哪些，其特点是什么？第一类为“小改”：可

18、通过定位突变或化学修饰实现；在已知结构的天然蛋白质分子多肽链内的确定位置上，进行一个或少数几个氨基酸残基的改变，以研究和改善蛋白质的性质和功能。主要是置换、删除或插入氨基酸，依赖基因水平的分子生物技术操作。第二类为“中改”，对来源于不同蛋白的结构域进行拼接组装；以期望能转移相应的功能，获得具有新特点的蛋白质分子。又称分子剪裁。第三类为“大改”，即完全从头设计全新的蛋白质，使之具有特定的空间结构和预期的功能。蛋白质的一级结构多肽链的数量、氨基酸的种类、数目及排列，多肽链内或链间的二硫键数目及位置。蛋白质的二级结构肽链主链不同区段通过自身的相互作用，形成氢键，沿某一主轴盘旋折叠而形成的局部具有周期

19、性结构的空间构象，是蛋白质结构的构象单元.a-螺旋肌红蛋白75%伊折叠（伴刀豆蛋白59%伊转角（球蛋白）无规则卷曲（细胞色素C）蛋白质的三级结构（实例：核糖核酸酶）肽键在二级结构的基础上，通过侧链基团的相互作用进一步卷曲折叠，借助次级键维系使二级结构相互配置而形成特定的构象。三级结构的形成使肽链中所有的原子都达到空间上的重新排布。四级结构（实例：血红蛋白？）由相同或不同的称作亚基的亚单位按照一定排布方式聚合而成的蛋白质结构。亚基本身都具有球状三级结构，一般只包含一条多肽链，也有的由二条或二条以上由二硫键连接的肽链组成。维持蛋白质空间构象的作用力1.疏水效应2,氢键3.范德华力4,共价交联5.离

20、子相互作用6.配位键分子设计层次：基因水平的改造（改造蛋白质的编码基因）蛋白质水平的改造（蛋白质的加工与修饰）如何改造蛋白质：化学修饰遗传改变遗传改变的改造程度：小改：氨基酸的替换中改：结构域大改：从头设计蛋白质工程的主要步骤：从生物体中分离纯化目的蛋白；借助核磁共振和X射线晶体衍射等手段，尽可能地了解蛋白质的二维重组和三维晶体结构； 设计各种处理条件，了解蛋白质的结构变化，包括折叠与去折叠等对其活性与功能的影响；一级结构及高级结构的解析，确定关键氨基酸残基； 设计编码该蛋白的基因改造方案（主要针对关键的基团）,如定点突变；表达、分离、纯化新蛋白，功能检测后投入实际使用。XM线是最早也是最主要

21、的测定蛋白质结构的方法。优点：分辨率高，达到原子分辨率，结构清晰，所需时间较短，既可以研究水溶性蛋白质也可以研究膜蛋白和大分子组装体与复合体。X射线晶体结构测定基本过程蛋白质获取（提纯）位相确定蛋白质结晶及晶体生长模型建立和修正晶体衍射数据收集和处理多结构域蛋白质可用X寸线晶体衍射及核磁共振（NMR用技术加以验证。计算机预测蛋白质三级结构一般有3种策略：同源建模法、线串法和从头算法蛋白质分子设计原则活性设计（催化中心）：考虑被研究的蛋白质功能，涉及选择化学基团和化学基取向。？对专一性的设计（结合中心）：理解并设计化学物的专一性结合。框架设计（Scaffold设计）：立体结构设计。给予各个催化活

22、性功能。疏水基团与亲水基团需合理分布最优的氨基酸侧链几何排列蛋白质分子设计的程序1、收集相关蛋白质的结构信息2、建立所研究蛋白质的结构模型3、结构模型的生物信息分析4、选择设计目标5、序列设计酶的理性设计定点突变：单点突变、多点突变、重叠延伸团的空间基团与底基团以适当的空间排布，才能具有6、预测结果7、获得蛋白质8、新蛋白质的检验9、完成新蛋白质设计PCR盒式突变。Theaminogroupsorwheat(3-amylase(WBA)weremodifiedby2,4,6-trinitrobenzenesulfonicacid(TNBS)h2,4-bis(O-methoxypolyethyl

23、eneglyco1)-6-chloro-s-tri2zine(mPEG),andglutaraldehyde(GA)toimproveitsthermalstabilityandactivity.ModificationofWBAby5mMTNBS.4.8jaMmPEGand11mMGAimprovedits加(thetennperatureatwhich50宅ofitsactivityislostafter3口minofincubation)from47i1Cto482.55士2,and542Grespectively.ThecatalyticactivityofWBAwasreducedb

24、y15%and59%withmodificationby5mMTNBSand11mMGA.respectively.Inallcases,theenhancementofthermostabilityoFmodifiedWBAwasencropicallydriven.TlieactivityofWBAmodifiedby48p.MinPEGwasenhancedby39%at25Therefore,thethermalstabilityofWBAwassignificantlyimprovedbymodificationwithmPEG,GAandslightlybyTNBSanditsca

25、talyticactivitywasenhancedbymPEG.酶的非理性设计定向进化：易错PCRDN/排、基因家族重排研究人员对来自硬脂芽胞杆菌NCIM5146的胞外a-半乳糖甘酶的催化氨基酸残基进行了PH值依赖性和化学修饰特性的研究。研究结果表明，竣酸盐和赖氨酸残基都参与了催化，但是只有赖氨酸残基才是与底物结合的关键。碳二亚胺介导的酶化学修饰也支持位于活性位点同时在底物裂解过程中充当亲和碱的较酸残基。乙酸、柠檬酸酊和硼氢化钠对赖氨酸残基的酰化和还原乙基化反应表明，4个质子化赖氨酸残基在其e-氨基上带正电荷，为底物的结合提供了正电荷密度。此外，4个色氨酸残基在活性部位附近和中度输水环境中也

26、有发现。有关改性酶的动力学和热失活研究表明，这些色氨酸残基可能对催化中心和活性中心在高温下的热稳定性也起一定作用。Thecatalyticaminoacidresiduesoftheextracellulara-galactoida4e(cr-ij-galactcsidegalactahydrolase：EC2fromUtieiliuxtif/phihisNCli5146wtieinsesiigatedbypHdepend曰】ceandchejnicalstudies.Tlitsresulissuggestedthutcarhoxylaieamialysineresiduelak

27、epanincatalysisandonlylysineresidueswererssemialforuhstraiebinding,CarbtxliimidemedialcdchenuealmixlifkaiionnFiheenzytnealsosuppliedHiaiacartxwylaieresiduelocatedin(heactivesiteaciasanucleophilebaseinsubstralecleavage.Acyhiionandreductivemcthylatiojioflysineresiduesbyacetic*citraconicanhydrideandsod

28、iumborohydridcsuggestedthatfourpnManaficdlysineresiduescarryingpisiiivedia里亡onitstaminogrouppanidesihepsidveclurgtdensityforbindingaFthesuhsiraie.Additionally(buriryptopliHi】residuesalsofoundnearto(heactivesiteandinamoderatelyhydrophobicenvironment.Kineticandthermnlinaciivatiornstudydfmodifiedenzyme

29、indicatedihciltheseirjplophaiiresiduesmighthaveamleinthesalalyiicsileaswellasintheihcrnialslubilizalkm*atlivesiteconromidlionulhighericmpcruiure.用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS、2,4-双(O-甲氧基聚乙二醇)-6-氯-s-三嗪(mPEG和谷氨酸(GQ对小麦-淀粉酶(WBA的氨基进行修饰以提高其热稳定性和活性。用5mmTNBS4.8mPEG和11mmGA对WBAffl行修饰，使其T50(孵育30min后失去50%舌性的温度)分别从471C提高到4

30、82C、55+2C和542o用5mmTNBS和11mnGA修饰WBA其催化活性分别降低15麻口59%在所有情况下，经修饰的WBA勺热稳定性增强都是嫡驱动的。在25c下，4.8心mmPEG慎饰的WBA舌性提高了39%mPEGGA修饰的WBA勺热稳定性明显提高，TNBS修饰的WBA的热稳定性略有提高，mPEG对WBA勺催化活性有所提高。Catalysisandstabilityofanalkalineproteasefromahaloalkaliphilic(嗜盐碱)bacteriumundernon-aqueousconditionsasafunctionofpH,saltandtemperat

31、ure在无水条件下，以PH盐和温度的函数，研究嗜盐碱菌碱性蛋白酶的催化性与稳定性。Ahaloalkaliphilicbacterium,isolatedfromCoastalGujarat(India)wasidentifiedasOceanobacillussp.(海洋杆菌,GQ162111)basedon16SrRNAgenesequence.Theorganismgrewandsecretedextracellularproteaseinpresenceofvariousorganicsolvents.At30%(v/v)concentrationofhexane(6),heptane(

32、7),isooctane(8),dodecane(12)anddecane(10),significantgrowthandproteaseproductionwasevident.嗜盐碱菌，分离自沿海古吉拉特邦(印度)，基于16sRNA序列被鉴定为海洋杆菌,GQ162111.该微生物在各种有机溶剂中生长并分泌细胞外蛋白酶。在正己烷(6)、庚烷(7)、异辛烷(8)、十二烷(12)、癸烷(10)的浓度为30%寸，有明显的生长和蛋白酶的产生。?Thealkalineproteasewaspurifiedinasinglesteponphenylsepharose6FF(苯基琼脂糖,疏水层析)wit

33、h28%yield.ThemolecularmassasjudgedbySDS-PAGEwas30kDa.Thetemperatureoptimumofproteasewas50andtheenzymeretained70%activityin10%(v/v)isooctane(异辛烷).?碱性蛋白酶通过的苯基琼脂糖疏水层析的单布纯化后收益率为28%SDS-PAG睑测的分子质量为30kDa。蛋白酶的最适温度是50C和在10%勺异辛烷中保留70%活力。EffectofsaltandpHwasinvestigatedincombinationtoassesstheeffectofisooctane

34、.Inorganicsolvents,theenzymewasconsiderablyactiveatpH811,withoptimumactivityatpH10.Saltat2Mwasoptimumforactivityandenzymemaintainedsignificantstabilityupto18hevenat3Msaltconcentration.研究了盐和pH寸异辛烷效果的影响。在有机溶剂中，在pH8-11时酶活性较高，在pH10时酶活性最佳。2M盐浓度的活性最佳，酶在3M盐浓度下也能保持18小时的稳定性。？?？Optimalactivityhasbeenrecordedi

35、n45MNaClforsomehalophiles.Highsaltreduceswateractivity,aconditionalsogeneratedbytheorganicsolvents.Halophilicproteins,therefore,offervaluablecandidatefornon-aqueousenzymology记录了嗜盐菌在4-5M的NaCl中的最佳活性。高盐降低了水的活性，这也是有机溶剂产生的条件。因此，嗜盐蛋白为酶的非水相催化提供了有价值的参考。Biocatalysisinnon-aqueousenvironmenthasmanyadvantages:i

36、ncreasedsolubilityofhydrophobicsubstrates,thermalstabilityalteredenantioselectivity,reducedmicrobialcontamination,curtailedwater-inducedsidereactions。生物的非水相催化有许多优点：疏水性底物的溶解度增加，热稳定性和对映选择性改变，减少微生物污染，减少水化反应。Inaqueousmedium,waterhelpstomaintainstructuralflexibilityandmobilityofproteinmolecule.Organicsol

37、ventsmaycausedeamidationofAsnandGlnresiduesandhydrolysisofpeptidebonds,leadingtounfoldingofenzymemoleculesandlossofenzymaticactivity.在水介质，水有助于保持蛋白质分子结构的灵活性和迁移率。有机溶剂可引起天冬酰胺和谷氨酰胺残基脱酰胺和肽键水解，导致酶分子的去折叠和酶活的丧失。Subtilisinandalpha-chymotrypsinvigorouslyactascatalystsinavarietyofdryorganicsolvents.EnzymatictransesterificationsinorganicsolventsfollowMichaelis-Mentenkinetics,andthevaluesofV/Kmroughlycorrelatewithsolventshydrophobicity.枯草杆菌蛋白酶和胰蛋白酶在各种干燥有机溶剂中都有着较强的活性。在有机溶剂中酶的酯交换遵循米氏动力学，V/Km的值与溶剂的疏水性大致相关。Theamountofwaterrequiredbychymotrypsinandsubtilisinforcatalysis