天然药化第8-12班用

1、第八章第八章 甾体及其苷类甾体及其苷类 Steroids and Related Saponins山东大学药学院天然药物化学教研室山东大学药学院天然药物化学教研室范培红范培红2015-11l 甾体甾体又名类固醇化合物又名类固醇化合物(steroids)，其结构中都具有，其结构中都具有环戊烷骈多氢菲环戊烷骈多氢菲的母核。的母核。 R12345678910111213141516171819分 类C-17侧链A/BB/CC/DC21 甾类羰甲基衍生物反反顺强心苷类不饱和内酯环顺、反反反甾体皂苷类含氧螺杂环顺、反反反植物甾醇脂肪烃顺、反反反昆虫变态激素脂肪烃 顺反反胆酸类戊酸顺反反2. 化学结构和分

2、类化学结构和分类1. 概述概述3. 理化性质理化性质4. 波谱特征波谱特征6. 生物活性生物活性5. 提取分离提取分离强心苷强心苷第三节第三节 强心苷类强心苷类本节学习要求本节学习要求 掌握强心苷理化性质掌握强心苷理化性质 掌握强心苷的提取分离方法掌握强心苷的提取分离方法 熟悉强心苷的光谱特征熟悉强心苷的光谱特征 了解强心苷的生物活性了解强心苷的生物活性三、强心苷的理化性质三、强心苷的理化性质( (一一) )性状和溶解度性状和溶解度( (二二) )颜色反应颜色反应ROOHHOABCD314101317111219Osugar1. 作用于甾体母核的反应作用于甾体母核的反应2. 作用于作用于 ,

3、-不饱和内酯环的反应不饱和内酯环的反应3. 作用于作用于 -去氧糖的反应去氧糖的反应( (三三) )脱水反应脱水反应 5-OH和和14-OH均系叔羟基，极易脱水均系叔羟基，极易脱水 如果如果3-OH氧化成酮基，则氧化成酮基，则5-OH更容易脱水，温热下更容易脱水，温热下即可反应，形成烯酮。即可反应，形成烯酮。 16-羟基被氧化成酮基，也可促使羟基被氧化成酮基，也可促使14-OH脱水得到烯脱水得到烯酮。酮。HOOHOHOABCD314101317111219O强心苷的苷键为缩醛结构，可被酸或酶水解，而不被强心苷的苷键为缩醛结构，可被酸或酶水解，而不被碱水解。碱试剂主要使分子中的碱水解。碱试剂主要

4、使分子中的酰基水解酰基水解、内酯环裂内酯环裂开开、20(22)双键转位双键转位及及苷元异构化苷元异构化等。等。( (四四) ) 碱水解反应碱水解反应1. 碱性水溶液中的水解反应碱性水溶液中的水解反应内酯结构，用内酯结构，用KOH或或NaOH水溶液处理，内酯环开环，水溶液处理，内酯环开环，但酸化后又环合。但酸化后又环合。可逆反应，该性质可用于提取与分离强心苷元可逆反应，该性质可用于提取与分离强心苷元2. 碱性醇溶液中的水解反应碱性醇溶液中的水解反应OHKOHCH3OH202122开链型异构化物14OOOHOHCOOCH3OOHCOOCH3OCOOCH323l 乙型强心苷乙型强心苷OHOOOHOO

5、OOOOOHOOHKOHEtOH142021221414内酯型异构化物开链型异构化物l 甲甲型强心苷型强心苷-双键转位，内酯环异构化双键转位，内酯环异构化2. 碱性醇溶液中的水解反应碱性醇溶液中的水解反应( (五五) )苷水解反应苷水解反应1. 酸水解酸水解(1) 温和酸水解：温和酸水解：用稀酸（用稀酸（0.020.05 mol/L) 的盐酸或的盐酸或硫酸在含水醇中经短时间硫酸在含水醇中经短时间(半小时至数小时半小时至数小时)加热回加热回流，可水解流，可水解去氧糖去氧糖的苷键，的苷键，2-羟基糖的苷在此条件羟基糖的苷在此条件下不被水解。对苷元影响较小，不会引起脱水反应。下不被水解。对苷元影响较

6、小，不会引起脱水反应。(2) 强烈酸水解强烈酸水解: 用较浓酸用较浓酸(3%5%)，长时间加热回流，长时间加热回流或同时加压，可水解或同时加压，可水解2-羟基糖。但此法常引起苷元羟基糖。但此法常引起苷元失去失去1分子或数分子水，形成脱水苷元。分子或数分子水，形成脱水苷元。(3) 盐酸丙酮法盐酸丙酮法(Mannich水解水解)：将强心苷置于丙酮溶液将强心苷置于丙酮溶液中，室温条件下与中，室温条件下与HCl长时间反应长时间反应(约两周，反应液中约两周，反应液中含含HCl 0.41%)，可得到糖的衍生物和原来的苷元。，可得到糖的衍生物和原来的苷元。2. 酶水解酶水解 含强心苷的植物中，有水解葡萄糖的

7、酶，无水解含强心苷的植物中，有水解葡萄糖的酶，无水解 - -去去氧糖的酶，所以能水解除去分子中的葡萄糖而保留氧糖的酶，所以能水解除去分子中的葡萄糖而保留 - -去氧糖。去氧糖。 蜗牛酶几乎能水解所有的苷键，将强心苷分子的糖逐蜗牛酶几乎能水解所有的苷键，将强心苷分子的糖逐步水解，直至获得苷元，常用来研究强心苷的结构。步水解，直至获得苷元，常用来研究强心苷的结构。紫花洋地黄苷紫花洋地黄苷A紫花苷酶紫花苷酶洋地黄毒苷洋地黄毒苷 + D-葡萄糖葡萄糖三、强心苷的理化性质三、强心苷的理化性质( (一一) )性状和溶解度性状和溶解度( (二二) )颜色反应颜色反应ROOHHOABCD31410131711

8、1219Osugar( (三三) )脱水反应脱水反应( (四四) )碱水解反应碱水解反应( (五五) )苷键水解反应苷键水解反应1. 提取提取原生苷：抑制酶的活性原生苷：抑制酶的活性(冷冻干燥、快速提取或快速冷冻干燥、快速提取或快速干燥干燥)，用，用MeOH或或70%EtOH提取；提取；次生苷：利用酶的活性，用次生苷：利用酶的活性，用EtOH或或EtOAc提取。提取。2. 纯化纯化 1. 溶剂法：用石油醚、乙醚脱脂，醇提；或先用醇提，溶剂法：用石油醚、乙醚脱脂，醇提；或先用醇提，再萃取脱脂，以再萃取脱脂，以CHCl3/MeOH萃取强心苷。萃取强心苷。 2. 用铅盐法除去水溶性杂质；用铅盐法除去

9、水溶性杂质； 3. 吸附法：活性炭或吸附法：活性炭或Al2O3吸附色素、糖类和皂苷；吸附色素、糖类和皂苷；3. 分离分离 常用方法：萃取法、逆流分配法、重结晶、色谱法常用方法：萃取法、逆流分配法、重结晶、色谱法四、强心苷的提取分离四、强心苷的提取分离洋洋地地黄黄毒毒苷苷的的提提取取分分离离紫花洋地黄叶粉发酵70乙醇提取提取液浓缩至含醇202831 放置，过滤胶 质(叶绿素等)清 液氯仿萃取水 层氯仿层NaOH溶液洗涤水洗回收氯仿膏状物加丙酮05 放置24 h结 晶氯仿溶解活性炭脱色浓缩，加入丙酮精品五、强心苷的波谱特征五、强心苷的波谱特征1. UV 甲型：甲型： max 220 nm (lg

10、4.34) 乙型：乙型： max 295-300 nm (lg 3.93)2. IR不饱和内酯环的羰基峰不饱和内酯环的羰基峰: 18001700 cm-1两个两个峰。峰。 甲型甲型: 1756 cm-1 和和1783 cm-1 乙型乙型: 1718 cm-1和和1740 cm-1高波数非正常峰，强度随溶剂改变高波数非正常峰，强度随溶剂改变乙酰洋地黄毒苷元乙酰洋地黄毒苷元3. MS 羟基脱水，醛基脱羟基脱水，醛基脱CO、脱甲基、脱、脱甲基、脱17-内酯侧链和内酯侧链和RDA裂解的碎片。裂解的碎片。 甲型：甲型：m/z 111, 124, 163和和164等含有内酯或内酯环加等含有内酯或内酯环加D

11、环的碎片环的碎片 乙型：乙型：m/z 109, 123, 135和和136等碎片等碎片OOCH2+OOHHHCH2+OOH +OOHCH2+m/z 109m/z 123m/z 135m/z 136 若分子量若分子量500，应用，应用FAB-MS可将糖可将糖-苷元打断苷元打断: 灵敏度高；样品用量少。灵敏度高；样品用量少。 分子离子峰较强；分子离子峰较强； 提供糖链连接顺序和糖的种类信息；提供糖链连接顺序和糖的种类信息；4. 1H-NMR CH3： 19-Me 10-CHO： 9.510.0; 10-CH2OH：酰化后：酰化后 4.04.5, J=12 Hz; H-3： 3.90 (m)，成苷后

12、向低场位移；，成苷后向低场位移； H2-16 (若无含氧基团取代若无含氧基团取代)： 2.02.5, m; H-17： 2.80, m或或dd, J=9.5 Hz; RHH1819 0.992 0.792RHH1819 0.992 0.900CHOH19 9.510.0, sCH2OAcH19 4.004.50, ABq, J=12 HzH 2.80, m or dd1716 2.02.5, m 3.90, mHOHl内酯环内酯环l五元内酯环五元内酯环l六元内酯环六元内酯环l糖单元上的质子糖单元上的质子 -D-glc 端基端基 aa J=68 Hz -L-rha 端基端基 ae J=2 Hz

13、6-去氧糖去氧糖 Me 1.0 1.5 d峰峰 2-去氧糖去氧糖 端基端基 aa和和ae dd峰峰 甲氧基糖甲氧基糖 OMe 3.50RHOOHH乙型OO172021222324甲型RHOOHHOO 5.66.0, br s 4.55.0, br s, t, or ABq, J=18 Hz 7.2, s 7.8, d 6.3, d2122Digoxigenin H-3H-12H-22H2-21watersolventH-175. 13C-NMRl一般用比较的方法一般用比较的方法 伯碳伯碳 仲碳仲碳 叔碳叔碳 季碳季碳 醇碳醇碳 烯碳烯碳 羰基碳羰基碳 12-24 20-41 35-57 27-

14、43 65-91 119-172 177-210l可判断可判断A/B环的稠合方式环的稠合方式 C-19 A,B环上的碳环上的碳 5 -甾体甾体 24 5 -甾体甾体 12 较较5 -甾体低场甾体低场2-8HH5105101919C 12.0C 24.0Digoxigenin C-22C-23C-20C-21C-12C-14C-3五、强心苷的波谱特征五、强心苷的波谱特征1. UV 2. IR3. MS4.1HNMR5. 13CNMR注意特征性信号，不同类型强心苷的区别注意特征性信号，不同类型强心苷的区别六、强心苷的生理活性六、强心苷的生理活性. . 强心苷为心脏兴奋剂，主要作用是延长传导时间，强

15、心苷为心脏兴奋剂，主要作用是延长传导时间，兴奋心肌。其强心作用主要取决于苷元部分，但糖兴奋心肌。其强心作用主要取决于苷元部分，但糖部分可增加强心苷对心肌的亲和力，故对强心苷的部分可增加强心苷对心肌的亲和力，故对强心苷的生理活性也有影响。生理活性也有影响。1. 苷元结构与强心作用的关系苷元结构与强心作用的关系v 强心苷元甾体母核必须具有一定的构象，强心苷元甾体母核必须具有一定的构象，A/B顺或顺或反，反，C/D顺，顺，14-OH只有是只有是 -构型的才有效；构型的才有效；vC-17位连接的不饱和内酯环及其位连接的不饱和内酯环及其 -构型是不可缺少构型是不可缺少的，若异构化为的，若异构化为 -型、

16、开环、不饱和内酯环被氢化型、开环、不饱和内酯环被氢化或双键位移，均无活性或活性显著降低。或双键位移，均无活性或活性显著降低。vA/B环顺式的甲型强心苷元，环顺式的甲型强心苷元，C3-OH必须是必须是 -构型，构型，若为若为 -型，则无活性。型，则无活性。 v10-CH3氧化成羟甲基、醛基或羧酸后，可影响强心氧化成羟甲基、醛基或羧酸后，可影响强心作用的强度或毒性，但不是决定因素。作用的强度或毒性，但不是决定因素。v 无论在苷元或糖基上增加乙酰基都有增强活性的作无论在苷元或糖基上增加乙酰基都有增强活性的作用。用。2. 糖与强心作用的关系糖与强心作用的关系v强心苷中糖的性质和数目，可以影响到其油强心

17、苷中糖的性质和数目，可以影响到其油/水分配水分配系数，从而影响强心苷的活性和毒性。系数，从而影响强心苷的活性和毒性。v一般来说，一般来说，2,6-二去氧糖的苷对心肌和中枢神经系统二去氧糖的苷对心肌和中枢神经系统的亲和力比葡萄糖苷强，其强心活性、毒性和亲脂的亲和力比葡萄糖苷强，其强心活性、毒性和亲脂性成平行关系。性成平行关系。2. 化学结构和分类化学结构和分类1. 概述概述3. 理化性质理化性质4. 波谱特征波谱特征6. 生物活性生物活性5. 提取分离提取分离强心苷强心苷第三节第三节 强心苷类强心苷类思考思考 1. 如何利用光谱法区别两种类型的强心苷？如何利用光谱法区别两种类型的强心苷？ 2.

18、如何利用如何利用NMR数据，判断结构中是否含去氧糖的？数据，判断结构中是否含去氧糖的？ 3. 如何判断强心苷如何判断强心苷A/B环骈合方式是顺式还是反式？环骈合方式是顺式还是反式？ 4.强心苷强心活性强弱与化学结构有什么关系？强心苷强心活性强弱与化学结构有什么关系？第四节第四节 甾体皂苷甾体皂苷提取分离提取分离概概 述述化学结构化学结构理化性质理化性质波谱特征波谱特征学习要求学习要求 熟悉甾体化学结构和类型熟悉甾体化学结构和类型 掌握甾体皂苷的理化性质、鉴别反应掌握甾体皂苷的理化性质、鉴别反应 掌握甾体皂苷的掌握甾体皂苷的提取分离方法提取分离方法 熟悉甾体皂苷的光谱特征熟悉甾体皂苷的光谱特征

19、了解甾体皂苷的生物活性了解甾体皂苷的生物活性1. 定义定义 甾体皂苷（甾体皂苷（steroidal saponin）是一类由螺甾烷类）是一类由螺甾烷类化合物与糖结合形成的寡糖苷。化合物与糖结合形成的寡糖苷。甾体皂苷分子中甾体皂苷分子中不含羧基，呈中性，故又称不含羧基，呈中性，故又称中性皂苷中性皂苷。2. 分布分布 甾体皂苷数目非常庞大，主要分布薯蓣科、百合甾体皂苷数目非常庞大，主要分布薯蓣科、百合科、玄参科、菝葜科和龙舌兰科等单子叶植物中。科、玄参科、菝葜科和龙舌兰科等单子叶植物中。一、概一、概 述述HHHHOO12345678910111213141516171819202122232425

20、2627l抗生育：主要用作合成甾体避孕药和激素类药物抗生育：主要用作合成甾体避孕药和激素类药物的原料；的原料；l地奥心血康胶囊含由黄山药中提取的地奥心血康胶囊含由黄山药中提取的8种甾体皂种甾体皂苷，总量在苷，总量在90%以上，治疗冠心病。以上，治疗冠心病。l心脑舒通心脑舒通由蒺藜果实中提取的总甾体皂苷，由蒺藜果实中提取的总甾体皂苷，用于心脑血管疾病的防治。用于心脑血管疾病的防治。l降血糖，降低胆固醇和免疫调节降血糖，降低胆固醇和免疫调节l抗肿瘤、抗真菌、杀虫等抗肿瘤、抗真菌、杀虫等3. 生物活性生物活性二、化学结构二、化学结构1. 结构特点结构特点 分子有分子有27个碳构成个碳构成 分子内具螺

21、缩酮的结构分子内具螺缩酮的结构 A/B 顺或反；顺或反；B/C反反, C/D反反 C-10, C-13具具 -CH3 C-3有有-OH取代取代 C-5、C-6有时具双键；有时具双键；C-12有时具羰基有时具羰基 侧链中有三个手性碳：侧链中有三个手性碳：C-20、C-22和和C-25HHHOO123456789101112131415161718192021222324252627ROABCDEF 螺甾烷醇类螺甾烷醇类(spirostanols) 20-CH3为为 型，即型，即20-CH3位于位于E环平面的背面，但对环平面的背面，但对F环来说环来说是是 型，用型，用20 F表示。表示。 C-22

22、含氧侧链也为含氧侧链也为 型，用型，用22 F表示。表示。 25-甲基位于甲基位于F环平面上的直立键，为环平面上的直立键，为型，其绝对构型为型，其绝对构型为S型型(25S，25L，25 F，neo); S型即为螺旋甾烷，由其衍生的皂型即为螺旋甾烷，由其衍生的皂苷为螺甾烷醇皂苷类苷为螺甾烷醇皂苷类(spirostanol saponins)。2. 结构分类结构分类HOOH16222625202127CH2OCCH2CH2CCHH3COOHH3C26252216262127201717菝葜皂苷元5,20F,22F,25F-spirostan-3-olEFDHHHOOHOH 25-甲基位于甲基位于F

23、环平面的平伏键，为环平面的平伏键，为 型，其绝对构型，其绝对构型为型为R型型(25R，25D，25 F，iso); R型即为异螺旋型即为异螺旋甾烷，由其衍生的皂苷为异螺甾烷醇皂苷类甾烷，由其衍生的皂苷为异螺甾烷醇皂苷类(isospirostanol saponins)。HOOH16222625202127CH2OCCH2CH2CCCH3HOOHH3C26252216262127201717异菝葜皂苷元5,20F,22F,25F-spirostan-3-olEFD 异螺甾烷醇类异螺甾烷醇类(isospirostanols)HHHOOHOH 呋甾烷醇类呋甾烷醇类(furostanols) F环为开

24、链衍生物环为开链衍生物 F环裂解的双糖链皂苷对环裂解的双糖链皂苷对Ehrlich试剂试剂(盐酸对二甲盐酸对二甲氨基苯甲醛试剂，氨基苯甲醛试剂，E试剂试剂)显显红色红色；对茴香醛试剂；对茴香醛试剂(Anisaldehyde，A试剂试剂)显显黄色黄色； F环闭环的单糖链皂苷和螺旋甾烷衍生的皂苷元环闭环的单糖链皂苷和螺旋甾烷衍生的皂苷元只对只对A试剂显试剂显黄色黄色，对，对E试剂不显色。试剂不显色。HHHOOH123456789101112131415161718192021222324252627ROORHHHOOHOHHHOOHOHO薯蓣皂苷元剑麻皂苷元薯薯 蓣蓣剑剑 麻麻HHHOOHOHOgl

25、cglcrha2原菝葜皂苷glcglc4HOHOO菝葜皂苷-葡萄糖苷酶菝菝 葜葜菝葜皂苷菝葜皂苷 呋甾烷醇皂苷与螺甾烷醇皂苷呋甾烷醇皂苷与螺甾烷醇皂苷 在理化性质与生理活性上的对照在理化性质与生理活性上的对照皂苷类型 E试剂 A试剂溶血作用与胆甾醇反应抗菌活性呋甾烷醇红色 黄色 无 不反应 无螺甾烷醇 无黄色 有 形成复合物 有 变形螺甾烷醇类变形螺甾烷醇类(pseudo-spirostanols)F环为五元四氢呋喃环环为五元四氢呋喃环HHHO123456789101112131415161718192021222324252627ROOCH2OR纽替皂苷元HHHOHOOCH2OH刺刺 茄茄三

26、、甾体皂苷的理化性质三、甾体皂苷的理化性质1. 性状：性状： 甾体皂苷元有较好晶形；甾体皂苷元有较好晶形； 皂苷多为无定形粉末，味苦而辛辣，对人体黏膜有皂苷多为无定形粉末，味苦而辛辣，对人体黏膜有强烈的刺激性；强烈的刺激性； 皂苷多具旋光性，且多为左旋；皂苷多具旋光性，且多为左旋；2. 溶解性：溶解性： 甾体皂苷元能溶于亲脂性溶剂；不溶于水。甾体皂苷元能溶于亲脂性溶剂；不溶于水。 皂苷一般可溶于水、稀醇易溶于热水、稀醇，难溶皂苷一般可溶于水、稀醇易溶于热水、稀醇，难溶于石油醚、苯、乙醚等亲脂性溶剂。于石油醚、苯、乙醚等亲脂性溶剂。3. 表面活性及溶血作用：表面活性及溶血作用：甾体皂苷多具有发泡

27、性，其甾体皂苷多具有发泡性，其水溶液振荡后产生持久性泡沫。甾体皂苷具有溶血水溶液振荡后产生持久性泡沫。甾体皂苷具有溶血作用。作用。4. 能与碱式铅盐、钡盐形成沉淀。能与碱式铅盐、钡盐形成沉淀。5. 颜色反应：颜色反应：甾体皂苷在无水条件下，遇某些酸类可甾体皂苷在无水条件下，遇某些酸类可产生与三萜皂苷相类似的颜色反应。产生与三萜皂苷相类似的颜色反应。甾体皂苷与醋酐硫酸的颜色反应，最后出现绿色；甾体皂苷与醋酐硫酸的颜色反应，最后出现绿色；三萜皂苷最后出现红色。三萜皂苷最后出现红色。三萜皂苷三氯醋酸加热到三萜皂苷三氯醋酸加热到100显色，而甾体皂苷加显色，而甾体皂苷加热到热到60 就显色。就显色。6

28、. 甾体皂苷可与甾醇形成分子复合物：甾体皂苷可与甾醇形成分子复合物：可用于纯化皂苷和检查是否有皂苷类成分存在可用于纯化皂苷和检查是否有皂苷类成分存在反应条件：甾醇需有反应条件：甾醇需有C3-OHl若若3-OH为为a-构型，或者是当构型，或者是当3-OH被酰化或生成苷被酰化或生成苷键，就不能与皂苷生成难溶性的分子复合物。键，就不能与皂苷生成难溶性的分子复合物。l三萜皂苷与甾醇形成的复合物不及甾体皂苷稳定三萜皂苷与甾醇形成的复合物不及甾体皂苷稳定四、甾体皂苷的提取与分离四、甾体皂苷的提取与分离1. 甾体皂苷元的提取甾体皂苷元的提取 在植物组织中将皂苷水解，然后用低极性溶剂提取在植物组织中将皂苷水解

29、，然后用低极性溶剂提取皂苷元。皂苷元。 先用极性溶剂如甲醇、乙醇、丁醇将皂苷提出，再先用极性溶剂如甲醇、乙醇、丁醇将皂苷提出，再加酸加热水解，滤出水解物，然后用低极性溶剂提加酸加热水解，滤出水解物，然后用低极性溶剂提取皂苷元。取皂苷元。药 材药 材加酸水解，水洗，干燥甾体苷元低极性溶剂提取醇提物或粗皂苷氯仿残渣水解产物水解穿穿山山龙龙（干干燥燥根根茎茎）加加水水浸浸透透后后，再再加加入入3 3. .5 5倍倍量量水水，加加入入浓浓H H2 2S SO O4 4使使达达3 3% %浓浓度度，通通蒸蒸气气加加压压进进行行水水解解8 8小小时时水水解解物物用用水水洗洗去去酸酸液液，干干燥燥后后粉粉碎

30、碎，使使含含水水量量不不超超过过6 6% %干干燥燥粉粉加加6 6倍倍量量汽汽油油（或或甲甲苯苯），连连续续回回流流，提提取取2 20 0小小时时汽汽油油提提取取液液回回收收汽汽油油，浓浓缩缩至至约约1 1: :4 40 0, , 室室温温放放置置，使使结结晶晶完完全全析析出出后后，离离心心甩甩干干粗粗制制薯薯蓣蓣皂皂苷苷元元自自乙乙醇醇或或丙丙酮酮中中重重结结晶晶，活活性性炭炭脱脱色色薯薯蓣蓣皂皂苷苷元元( (m mp p2 20 04 4- -2 20 07 7) )2. 甾体皂苷的提取甾体皂苷的提取水 相亲脂性杂质总皂苷水部分药 材醇提物醇或稀醇提取石油醚萃取正丁醇萃取 正丁醇法正丁醇法

31、水洗脱部分药 材醇提物浓缩至无醇味醇或稀醇提取大孔吸附树脂柱30%乙醇50%乙醇70%乙醇90%乙醇纯乙醇柱再生总皂苷 大孔树脂法大孔树脂法皂苷类化合物的分离多采用硅胶柱色谱或皂苷类化合物的分离多采用硅胶柱色谱或HPLC分离。分离。五、甾体皂苷元的波谱特征五、甾体皂苷元的波谱特征1. UV (nm) 孤立双键孤立双键 205-225 900 孤立羰基孤立羰基 285 500 , -不饱和酮不饱和酮 240 11000 共轭双键共轭双键 235 C14-OH的判断：的判断： max 307-309 nm O降解、氧化脱水甾体皂苷元(含C14-OH)2.IR 甾体皂苷元含有螺缩酮结构的侧链，在IR

32、中有四个特征吸收谱带： A980 B920 C900 D860 cm-1100010009009009509501010202030304040850850800800cmcm-1-150506060707080809090ABCDA AB BC CDD乙酰基菝葜皂苷元乙酰基菝葜皂苷元乙酰基丝兰皂苷元乙酰基丝兰皂苷元（25R25R）（25S25S）T %2.IR 甾体皂苷元含有螺缩酮结构的侧链，在IR中有四个特征吸收谱带： A980 B920 C900 D860 cm-1应用：应用： 区别C25的两种立体异构体的构型 判断C11或C12位的C=O是否成共轭体系 C3-OH与A/B环构型的关系

33、区别区别C25的两种立体异构体的构型的两种立体异构体的构型C25Me-取代 吸收强度：C25-S B带 C带 C25-R C带 B带C25CH2OH(羟甲基)取代 （无法用上述四条谱带来区别） C25-S有995强吸收 C25-R有 1010强吸收 (若F环开裂即无螺缩酮结构，则无995或1010吸收)判断判断C-11或或C-12位的位的C=O是否成共轭体系是否成共轭体系 非共轭体系17051715cm-1有一个峰 C-12羰基共轭产生二个峰 16001605（双键） 16731679（羰基）(,不饱和酮结构)C3-OH与与A/B环构型的关系环构型的关系 当C3-OH构型已知时，可利用C3-O

34、H来推测A/B环的构型，见下表：苷元苷元-OH伸展频率：伸展频率：3625cm-1 弯曲频率：弯曲频率：10301080cm-13. MSOOOOOOOOOOOOOHHOOm/z 139m/z 126m/z 115+麦氏重排或abHab4. 1H-NMR 高场区显示四个甲基的信号：高场区显示四个甲基的信号： 18,19 -CH3 1.0, s; 19-CH3 18-CH3 21,27 -CH3 1.0, d; 21-CH3 27-CH3 H-16和和H2-26是联氧碳上质子，位于较低场，容易是联氧碳上质子，位于较低场，容易辨认。辨认。 OOOO较高场2626两个H-26位移接近两个H-26位移差别较大25R25SOOOOCDCl3-C6D6 0.080.13CDCl3-C6D6 -0.0225S25RHHHOOOHOAcAcO 5.63, d, J=12 HzH51019HAcO 5.35, dd, J=14, 6 HzHAcO2O24HHHOOHOHOAcAcOH51019HAcO 3.52, dd, J=9.5, 9.0 HzHAc