-九水中细菌总数与大肠菌群数的测定ppt课件

1、实验八实验八- -九九 水中细菌总数与大肠菌群数水中细菌总数与大肠菌群数的测定及计数的测定及计数实验原理实验原理我国饮用水卫生规范：每ml水样细菌总数37培育24h不得大于100个。水中细菌总数阐明被有机物污染的程度，细菌数越多，有机物质含量越大；采用平板菌落计数法测定水中细菌总数。采用牛肉膏蛋白胨琼脂培育基，能使大多数细菌生长。 总大肠菌群指数高，表示水被粪便污染。 采用多管发酵法：初发酵、平板分别和复发酵。我国饮用水卫生规范：每升水中总大肠菌群37培育48h小于3个。发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培育基,并倒置一杜氏发酵小管.乳糖能起选择作用,由于很多细菌不能发酵乳糖,而大肠菌群能发酵乳糖而产

2、酸产气。为便于察看细菌产酸情况，培育基内加有溴甲酚紫作为PH指示剂,细菌产酸后,培育基即由原来的紫色变为黄色。溴甲酚紫还有抑制其他细菌如芽孢菌生长的作用。 产气情况可经过倒置小管中的气泡来察看。实验资料实验资料实验方法实验方法1. 1. 稀释水样：稀释水样： 取取3 3支无菌管，分别参与无菌水支无菌管，分别参与无菌水9ml9ml。取。取1ml1ml水样参与第水样参与第一支管中，振荡，混匀，此为一支管中，振荡，混匀，此为10-110-1。依次做。依次做1 1：1010系列稀释系列稀释至至10-210-2、10-310-3。 自不同稀释度的试管中各取自不同稀释度的试管中各取0.1ml0.1ml水，

3、分别参与牛肉膏蛋白水，分别参与牛肉膏蛋白胨琼脂平板中，用无菌涂布棒在培育基外表将水涂布均匀胨琼脂平板中，用无菌涂布棒在培育基外表将水涂布均匀，室温下静置，室温下静置10min10min。每一稀释度作。每一稀释度作2 2个平板个平板将平板倒置，将平板倒置，3737，培育，培育24h24h后，进展菌落计数。后，进展菌落计数。 污水中细菌总数的检测实验方法实验方法4. 4. 菌落计数：菌落计数： CFU/mlCFU/ml某稀释度的菌落数：两平板菌落数取平均值某稀释度的菌落数：两平板菌落数取平均值 选择菌落数在选择菌落数在30-30030-300之间的稀释度之间的稀释度 例次例次不同稀释度的平均菌落数

4、不同稀释度的平均菌落数两个稀释度两个稀释度菌落之比菌落之比菌落总数菌落总数（CFU/ml）10-110-210-3仅有一个稀释度在此范围： 菌落数稀释倍数1365164201.6104有两个稀释度在30-300之间 菌落数之比2，选较小值3890271602.22.7104所有稀释度均300 取稀释倍数最大者无法计数16505135.1105所有稀释度均30 取稀释倍数最小者271152.7102没有任何稀释度在30-300之间 选最接近该范围者无法计数305123.1104细菌总数实验结果稀释度10-110-210-3平板121212菌落数平均菌落数计算方法细菌总数实验方法实验方法1. 1.

5、 稀释水样：稀释水样： 取取 1ml 1ml水样参与水样参与9ml9ml无菌水，振荡，混匀，此为无菌水，振荡，混匀，此为10-110-1。同法。同法稀释至稀释至10-210-2。2. 2. 初发酵：分别取初发酵：分别取1ml10-21ml10-2、10-110-1的稀释水样和的稀释水样和1ml1ml原水样，各注原水样，各注入装有入装有10ml10ml普通浓度乳糖蛋白胨普通浓度乳糖蛋白胨 发酵管中。另取发酵管中。另取10ml10ml原水样原水样，注入装有，注入装有5ml 35ml 3倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管中。混匀，倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管中。混匀，37 37 培培育育24h24h，24h24h未产

6、气继续培育至未产气继续培育至48h48h。 普通浓度发酵管中参与普通浓度发酵管中参与20%20%乳糖乳糖0.55ml0.55ml，3 3倍浓缩发酵管中参倍浓缩发酵管中参与乳糖与乳糖0.75ml0.75ml 多管发酵法测定水中总大肠菌群实验方法实验方法3.3.平板分别：平板分别：1 1制备伊红美蓝平板：制备伊红美蓝平板： 45 45 ，无菌，倾注，无菌，倾注15ml15ml2 2选产酸产气的发酵管，接种至伊红美蓝平板分区划线选产酸产气的发酵管，接种至伊红美蓝平板分区划线法法3 3培育：培育： 37 37，24h24h 多管发酵法测定水中总大肠菌群实验方法实验方法分区划线法分区划线法第一区划线第一

7、区划线灭菌接种环灭菌接种环第二区划线第二区划线灭菌接种环灭菌接种环第三区划线第三区划线灭菌接种环灭菌接种环实验方法 操作要点操作要点 1.划下一个区前必需灭菌接种环划下一个区前必需灭菌接种环 2.划线时接种环同平板呈划线时接种环同平板呈30-40角角 3.每次划线应该压到上一个区域的每次划线应该压到上一个区域的2-3条条线线 4.用接种环的用接种环的“面而不是面而不是“弧在平板上弧在平板上滑动滑动平板分别4菌落特征： 深紫黑色、有金属光泽 紫黑色、无或略有金属光泽 淡紫红色、中心颜色深 5革兰染色、镜检：选特征菌落实验方法实验方法4. 4. 复发酵：复发酵： 1 1选取鉴定为无芽孢选取鉴定为无芽孢G-G-杆菌杆菌的菌落的菌落1-31-3个个 2 2接种至接种至7ml7ml乳糖蛋白胨培育乳糖蛋白胨培育液液( (参与参与0.35ml0.35ml乳糖液乳糖液 3 3培育：培育：3737，24h24h 4 4察看目的：产