微生物04第3章 消毒与灭菌

1、临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:1第三章第三章 消毒与灭菌消毒与灭菌南京农业大学动物医学院南京农业大学动物医学院制作：临沂大学生命科学学院制作：临沂大学生命科学学院 微生物与免疫学教研室微生物与免疫学教研室临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:2 在医学、兽医学以及工农业生产实践中，常在医学、兽医学以及工农业生产实践中，常 采用多种物理、化学或生物学的方法来抑制或采用多种物理、化学或生物学的方法来抑制或

2、杀灭物体上和环境中的病原微生物或所有微生杀灭物体上和环境中的病原微生物或所有微生物，以切断传播途径，从而控制或消灭传染病，物，以切断传播途径，从而控制或消灭传染病，抑制食品、畜产品和生物制品等物品中的微生抑制食品、畜产品和生物制品等物品中的微生物生长繁殖，防止其腐败。有关抑制或杀灭微物生长繁殖，防止其腐败。有关抑制或杀灭微生物的基本方法有以下几种。生物的基本方法有以下几种。临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:31. 1.灭菌灭菌（sterilization） 指杀灭物体中指杀灭物体中所有所有病原微生

3、物和病原微生物和非病原微生物及其芽胞、霉菌孢子的方法。非病原微生物及其芽胞、霉菌孢子的方法。2. 2.消毒消毒（disinfection） 指杀灭物体中的指杀灭物体中的病原微生物病原微生物的方的方法。消毒只要求达到消除传染性的目的，而对非病原法。消毒只要求达到消除传染性的目的，而对非病原微生物及其芽胞、孢子并不严格要求全部杀死。微生物及其芽胞、孢子并不严格要求全部杀死。3. 3.防腐防腐（antisepsis） 指指阻止或抑制阻止或抑制微生物微生物生长繁殖生长繁殖的方的方法。微生物不一定死亡。法。微生物不一定死亡。4. 4.无菌无菌（asepsis）指指没有活的微生物没有活的微生物的状态。采取

4、防止或的状态。采取防止或杜绝任何微生物进入动物机体或其它物体的方法，称杜绝任何微生物进入动物机体或其它物体的方法，称为无菌法。以无菌法进行的操作称为无菌操作。为无菌法。以无菌法进行的操作称为无菌操作。 临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:4第一节第一节 物理消毒灭菌法物理消毒灭菌法 临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:5&物理因素对微生物的影响物理因素对微生物的影响物理因素物理因素温温 度度辐辐

5、射射干干 燥燥超声波超声波微微 波波滤过除菌滤过除菌高温高温低温低温临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:6一、热力灭菌法一、热力灭菌法p高温对微生物虽具有明显的致死作用高温对微生物虽具有明显的致死作用，但不，但不同种类的微生物对热的敏感性有明显的的差同种类的微生物对热的敏感性有明显的的差异，细菌繁殖体最为敏感，其次是真菌和病异，细菌繁殖体最为敏感，其次是真菌和病毒，细菌的芽孢对热有很强的抵抗力。毒，细菌的芽孢对热有很强的抵抗力。临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然 13666399

6、213 E-mailE-mail:7p 热力灭菌的原理热力灭菌的原理破坏菌体蛋白质、核酸和酶破坏菌体蛋白质、核酸和酶系统而致死微生物。系统而致死微生物。热力使蛋白质中的氢键破坏使之变性或凝固，热力使蛋白质中的氢键破坏使之变性或凝固，使双股使双股DNADNA分开为单股，受热活化的核酸酶使分开为单股，受热活化的核酸酶使单股的单股的DNA DNA 断裂，导致细菌死亡断裂，导致细菌死亡 p 影响高温灭菌的因素影响高温灭菌的因素： 细菌对高温的耐受性与细菌种类、发育时期、菌细菌对高温的耐受性与细菌种类、发育时期、菌体浓度及细菌所处介质有关。体浓度及细菌所处介质有关。临沂大学生命

7、科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:8l 热力灭菌法分类：干热灭菌热力灭菌法分类：干热灭菌 和湿热灭菌两种方法。和湿热灭菌两种方法。 二者比较：在同一温度下，后者效力比前者为大。二者比较：在同一温度下，后者效力比前者为大。l 原因：原因： （1 1）湿热中细菌菌体蛋白较易凝固；）湿热中细菌菌体蛋白较易凝固； （2 2）湿热的穿透力比干热大；）湿热的穿透力比干热大； （3 3）湿热的蒸汽有潜热存在。）湿热的蒸汽有潜热存在。 临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mai

8、lE-mail:9 热力灭菌法热力灭菌法 高温杀灭细菌高温杀灭细菌l焚烧焚烧-最彻底的灭菌方法最彻底的灭菌方法l烧灼（火焰灭菌法）烧灼（火焰灭菌法）-直接用火焰灭菌方法直接用火焰灭菌方法l干烤干烤（热空气灭菌法、干热灭菌法）（热空气灭菌法、干热灭菌法）- - 加热加热160-180 2160-180 2小时小时干热灭菌法干热灭菌法l红外线红外线临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:10(2)(2)火焰灭菌法火焰灭菌法 : :火焰直接烧灼，用于接种环火焰直接烧灼，用于接种环(

9、(针针) )和试管和试管口或瓶口的灭菌。口或瓶口的灭菌。(1)(1)焚烧法：用火焚烧，是一种彻底的灭菌方法，仅适焚烧法：用火焚烧，是一种彻底的灭菌方法，仅适用于废弃的污染物品和有传染性的动物尸体等。用于废弃的污染物品和有传染性的动物尸体等。临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:11(3)(3)干烤干烤（热空气灭菌法、干热灭菌法）（热空气灭菌法、干热灭菌法）n灭菌对象：灭菌对象：为玻璃器皿、金属器械及不宜遇水的为玻璃器皿、金属器械及不宜遇水的油、脂、凡士林等。油、脂、凡士林等。n方法方法160160（1

10、60160170170），），1 12h2h（180180纸、纸、棉塞就可烧焦）棉塞就可烧焦）临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:12p 缺点缺点穿透力差，故需高温、长时间（繁殖体穿透力差，故需高温、长时间（繁殖体100100，1.5h1.5h杀灭；芽孢杀灭；芽孢140140，2h2h可杀灭）可杀灭）160160170170，1 12h2h可杀死繁殖体和芽孢。可杀死繁殖体和芽孢。 降到室温（降到室温（6060）后再取物品）后再取物品p 注意事项注意事项 温度不能超过温度不能超过170170 物品不宜

11、包、放过紧过厚、帖壁物品不宜包、放过紧过厚、帖壁临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:13临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:14湿热灭菌法湿热灭菌法p高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法最有效的灭菌方法最有效的灭菌方法 121 2030121 2030分钟分钟p煮沸消毒法煮沸消毒法水煮水煮100 5100 5分钟分钟( (繁殖体繁殖体)2)2小时小时( (芽胞芽胞) )p流通蒸汽消毒法流通蒸汽消毒法p巴氏消毒法巴

12、氏消毒法p间歇蒸汽灭菌法间歇蒸汽灭菌法水蒸汽水蒸汽100 1530100 1530分钟分钟( (繁殖体繁殖体) )反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌较低的温度（较低的温度（61 3061 30分钟）杀灭致病菌分钟）杀灭致病菌临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:15p方法：温度在方法：温度在100100左右，煮沸左右，煮沸101020 min20 min可杀死可杀死所有细菌的繁殖所有细菌的繁殖 体，芽胞常需煮沸体，芽胞常需煮沸1 12 h2 h才被杀才被杀死死 。 若在水中加入若

13、在水中加入2-5%2-5%酚，则酚，则10-15min10-15min可杀灭可杀灭芽胞；若在水中加入芽胞；若在水中加入1-2%Na1-2%Na2 2COCO3 3，可提高沸点既，可提高沸点既可促进芽胞的摧毁，亦可防止金属器械生锈。可促进芽胞的摧毁，亦可防止金属器械生锈。p应用：灭菌对象应用：灭菌对象: :饮水、玻璃器皿、外科器械饮水、玻璃器皿、外科器械(1)(1)煮沸灭菌煮沸灭菌 : :临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:16临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然 136663992

14、13 E-mailE-mail:17 (2)(2)巴氏消毒法巴氏消毒法 ：以较低温度杀灭液态食品中的病原菌或：以较低温度杀灭液态食品中的病原菌或特定微生物，而又不致严重损害其营养成分和风味的消特定微生物，而又不致严重损害其营养成分和风味的消毒方法毒方法 。 低温维持巴氏消毒法低温维持巴氏消毒法 636365 30min65 30min 高温瞬时巴氏消毒法高温瞬时巴氏消毒法 717172 15s72 15s ；迅速冷却；迅速冷却1010以下（冷击法）以下（冷击法） 超高温巴氏消毒法超高温巴氏消毒法 132132管道管道 1 12s2s ；迅速冷却迅速冷却常温保存半年。常

15、温保存半年。 临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:18 (3)(3)流通蒸汽消毒法流通蒸汽消毒法 ：又叫常压蒸汽消毒法，用普通蒸笼又叫常压蒸汽消毒法，用普通蒸笼或阿诺氏（或阿诺氏（ArnoldArnold）流通蒸汽灭菌器，在）流通蒸汽灭菌器，在1 1个大气压下，个大气压下，用用100100左右的水蒸汽，左右的水蒸汽，30min30min，可杀灭繁殖体。，可杀灭繁殖体。不杀芽孢不杀芽孢和霉菌的孢子。和霉菌的孢子。 用于食品、食具及不耐用高温的物品消毒。如用于食品、食具及不耐用高温的物品消毒。如敷料、敷

16、料、糖培养基、半乳糖培养基糖培养基、半乳糖培养基 临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:19(4) (4) 间歇灭菌法间歇灭菌法 （反复多次流通蒸汽）（反复多次流通蒸汽）p 利用连续利用连续3 3次的流通蒸汽消毒法，达到彻底灭菌的目的。次的流通蒸汽消毒法，达到彻底灭菌的目的。即将待灭菌物品放入蒸笼（灭菌器）内，加热（约即将待灭菌物品放入蒸笼（灭菌器）内，加热（约100100）15-30min15-30min，取出置室温，取出置室温( (或或37)24h37)24h，次日重复，次日重复灭菌。连续灭菌。连

17、续3 3次。次。p 用于一些不宜用于一些不宜100100以上温度灭菌物质，以达到以上温度灭菌物质，以达到杀灭芽杀灭芽胞胞的目的。常用于含糖、半乳糖、牛乳、血清等培养的目的。常用于含糖、半乳糖、牛乳、血清等培养基的灭菌。基的灭菌。临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:20（5）高压蒸汽灭菌法）高压蒸汽灭菌法p高压蒸汽灭菌器：高压蒸汽灭菌器：1515磅（磅（0.105MPa0.105MPa），）， / /平平方英寸，方英寸，121.3121.3温度下维持温度下维持151520min 20min 。p 应用

18、此法灭菌，一定要充分排除灭菌器内应用此法灭菌，一定要充分排除灭菌器内原有的冷空气。用于普通培养基、生理盐原有的冷空气。用于普通培养基、生理盐水、耐热药品、手术敷料等。水、耐热药品、手术敷料等。临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:21手提式手提式立式立式临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:22临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mail/p>

19、 E-mail:23 二、辐二、辐 射灭菌法射灭菌法辐射辐射是是能量能量通过空间传递的一种物理现象。能量可通过空间传递的一种物理现象。能量可借波动或粒子高速运行而传播。用于灭菌的辐射可分借波动或粒子高速运行而传播。用于灭菌的辐射可分为两种。为两种。p 电离辐射电离辐射、x x射线及高能中子、质子射线及高能中子、质子等。等。p 非电离辐射可见光、日光、紫外线等。非电离辐射可见光、日光、紫外线等。p 辐射的杀菌作用随波长的降低而增强。辐射的杀菌作用随波长的降低而增强。 紫外、紫外、x x 、杀菌增强杀菌增强 可见光、红外线作用弱可见光、红外线作用弱紫紫宇宙线宇宙线x可见可见红外红外无线电波无线电波

20、临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:24(一）非电离辐射一）非电离辐射1.1.可见光线可见光线p 可见光线是指在红外线和紫外线之间肉眼可见的光线，可见光线是指在红外线和紫外线之间肉眼可见的光线，其波长其波长400400800nm800nm。可见光线对微生物一般无多大影。可见光线对微生物一般无多大影响，但长时间作用也能妨碍微生物的新陈代谢与繁殖，响，但长时间作用也能妨碍微生物的新陈代谢与繁殖，故培养细菌和保存菌种，均应置于阴暗之处。故培养细菌和保存菌种，均应置于阴暗之处。p 光感作用光感作用（phot

21、osensitization）某些染料（结晶紫、某些染料（结晶紫、美蓝、伊红、汞溴红、沙黄等）加入培养基中，能增美蓝、伊红、汞溴红、沙黄等）加入培养基中，能增强可见光的杀菌作用。强可见光的杀菌作用。p 光感作用原生动物、细菌、病毒、噬菌体等均有灭活光感作用原生动物、细菌、病毒、噬菌体等均有灭活作用。作用。G G菌对光感作用比菌对光感作用比G G菌敏感，菌敏感，美蓝、伊红、汞美蓝、伊红、汞溴红因作用于溴红因作用于G G菌，而沙黄作用于菌，而沙黄作用于G G菌。菌。临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:2

22、52. 2. 阳光阳光p直射日光有强烈的杀菌作用，直射日光有强烈的杀菌作用，p日光是天然杀菌因素日光是天然杀菌因素 细菌日光直射细菌日光直射30min30min数小时死亡。数小时死亡。 碳疽芽孢直射碳疽芽孢直射20h20h死亡死亡p影响日光杀菌的因素（烟尘、玻璃、有机物、影响日光杀菌的因素（烟尘、玻璃、有机物、空气中的水分、温度），日光的杀菌效力因空气中的水分、温度），日光的杀菌效力因地、因时及微生物所处环境不同而异地、因时及微生物所处环境不同而异 。临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:263. 3

23、.紫外线紫外线p 杀菌原理杀菌原理波长为波长为100100400nm400nm，以，以254nm254nm杀菌力最杀菌力最强，短波紫外线灯为强，短波紫外线灯为253.7nm253.7nm。 杀菌作用杀菌作用细菌细菌DNADNA对紫外线的吸收高峰在对紫外线的吸收高峰在265265266nm266nm之间，之间，O O2 2 O O3 3 O O 氧化能力强的氧原子氧化能力强的氧原子-杀菌杀菌 诱发变异诱发变异使使DNADNA分子结构改变而诱发变异（影响分子结构改变而诱发变异（影响核酸同链上的胸腺嘧啶共价键结合形成胸腺嘧啶二聚核酸同链上的胸腺嘧啶共价键结合形成胸腺嘧啶二聚体，从而干扰了体，从而干扰

24、了DNADNA的复制和转录）的复制和转录）p 方法方法紫外线灯照射杀菌紫外线灯照射杀菌p 应用应用手术室、病房、无菌室、实验室消毒（手术室、病房、无菌室、实验室消毒（G G- -、G G+ +）临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:27p 光复活现象：光复活现象：微生物经致死量的紫外线照射后，若在微生物经致死量的紫外线照射后，若在3h3h内在遇到可见光照射，内在遇到可见光照射，部分微生物部分微生物可以恢复其活力，可以恢复其活力，这种现象称之。这种现象称之。p 影响因素影响因素时间、强度、距离（一般要求

25、距地面时间、强度、距离（一般要求距地面2m2m，时间时间1 12h2h，1W1Wm m2 2）p 紫外线作用的特点：紫外线作用的特点： 穿透力弱穿透力弱，只能用于房间空气、物体表面消毒；，只能用于房间空气、物体表面消毒； 对眼睛角膜和皮肤有损伤作用对眼睛角膜和皮肤有损伤作用，工作人员切勿在，工作人员切勿在紫外线灯照射下进行操作。紫外线灯照射下进行操作。 杀菌效果与照射时间，距离和强度有关；杀菌效果与照射时间，距离和强度有关；临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:28( (二）电离辐射二）电离辐射p 具

26、有较高的能量和穿透能力产生极强的致死效应。具有较高的能量和穿透能力产生极强的致死效应。 射线：电离辐射强射线：电离辐射强 ，穿透力差（，穿透力差（ 缺乏穿透力，不实缺乏穿透力，不实用）用） 射线：电离辐射强射线：电离辐射强 ， 穿透力强穿透力强 射线：电离辐射弱，射线：电离辐射弱， 穿透力强，仅有抑菌作用和微穿透力强，仅有抑菌作用和微弱的杀菌作用。弱的杀菌作用。 X X射线：杀菌力不如紫外线，穿透力强射线：杀菌力不如紫外线，穿透力强临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:29p用途：用途：忌热忌热塑料制

27、品塑料制品物品物品（注射器、试管、吸（注射器、试管、吸管等）管等）的灭菌消毒、食品保藏和育种等方面的灭菌消毒、食品保藏和育种等方面 p 杀菌机制：杀菌机制：射线使水电离为射线使水电离为H H和和OHOH，这些游，这些游离基是强烈的还原剂和氧化剂，可直接作用于离基是强烈的还原剂和氧化剂，可直接作用于细菌本身细菌本身 。临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:30（三）红外线（三）红外线l 利用红外线烤箱灭菌，红外线是波长为利用红外线烤箱灭菌，红外线是波长为0.77-1000m0.77-1000m的电磁波，

28、尤以的电磁波，尤以1-10m1-10m波波长的热效应最高。多用于医疗器械的灭菌长的热效应最高。多用于医疗器械的灭菌临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:31（四）微波（四）微波p 从几百兆赫至几十万兆赫频率的无线电波称为微波。从几百兆赫至几十万兆赫频率的无线电波称为微波。p 微波灭菌，主要是利用微波的加热作用完成。灭菌物微波灭菌，主要是利用微波的加热作用完成。灭菌物品放在微波照射的交变电场中时，物品内部的分子随品放在微波照射的交变电场中时，物品内部的分子随着电场的变化而相应的旋转振动起来，电场变化快，

29、着电场的变化而相应的旋转振动起来，电场变化快，分子振动也就跟着快；由于分子间的相互作用力即产分子振动也就跟着快；由于分子间的相互作用力即产生摩擦力，因此分子克服其摩擦力而产生热量，使整生摩擦力，因此分子克服其摩擦力而产生热量，使整个物品则热起来，起到了摩擦加热灭菌的作用。这种个物品则热起来，起到了摩擦加热灭菌的作用。这种灭菌法，所需时间短、加热均匀是其显著的优点。灭菌法，所需时间短、加热均匀是其显著的优点。p 主要用于陶瓷、耐热玻璃容器和塑料器皿，金属器皿主要用于陶瓷、耐热玻璃容器和塑料器皿，金属器皿忌用。忌用。临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E

30、-mailE-mail:32三、超声波杀菌法三、超声波杀菌法p频率在频率在2000020000200000Hz200000Hz声波称为超声波。声波称为超声波。p超声波虽可使菌体裂解死亡，但往往有残超声波虽可使菌体裂解死亡，但往往有残存者，又因超声波费用颇大，故未应用于存者，又因超声波费用颇大，故未应用于消毒灭菌。消毒灭菌。p目前主要用于裂解细胞，提取细胞组分，目前主要用于裂解细胞，提取细胞组分，研究其抗原、酶类、细胞壁的化学性质以研究其抗原、酶类、细胞壁的化学性质以及从组织内提取病毒等。及从组织内提取病毒等。 临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然 1

31、3666399213 E-mailE-mail:33p 超声波主要通过四方面的作用达到杀菌目的：超声波主要通过四方面的作用达到杀菌目的：p 震荡：震荡：使微生物细胞内含物强烈使微生物细胞内含物强烈震荡震荡而被破坏而被破坏p 氧化杀菌：氧化杀菌：因在水溶液中超声波能产生过氧化氢因在水溶液中超声波能产生过氧化氢p 产生热效应：产生热效应：破坏细胞的酶系统；破坏细胞的酶系统；p 空（腔）化作用：空（腔）化作用：即在液体中形成许多真空状态的即在液体中形成许多真空状态的小空腔，空腔崩破产生的巨大压力使细胞裂解。小空腔，空腔崩破产生的巨大压力使细胞裂解。临沂大学生命科学学院临沂大

32、学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:34四、过滤除菌法四、过滤除菌法p 滤过除菌滤过除菌 : :通过机械阻留作用将液体或空气中的细菌通过机械阻留作用将液体或空气中的细菌等微生物除去的方法。但滤过除菌常不能除去病毒、等微生物除去的方法。但滤过除菌常不能除去病毒、霉形体以及细菌霉形体以及细菌L L型等小颗粒。型等小颗粒。p 应用：应用： 细菌滤器细菌滤器不耐热物品的灭菌（如不耐热物品的灭菌（如不耐高温的营不耐高温的营养液、养液、血清、毒素、抗生素、血清、毒素、抗生素、V V、酶、维生素等）、酶、维生素等） 空气除菌空气除菌超净工

33、作台；超净工作台；SPFSPF动物的饲养；动物的饲养；GMPGMP厂房的洁净度（四级）厂房的洁净度（四级）临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:35临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:36滤菌过程滤菌过程临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:37临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然 1366639

34、9213 E-mailE-mail:38五、干燥及低温抑菌法五、干燥及低温抑菌法1. 1.干燥干燥p 干燥可致微生物死亡干燥可致微生物死亡 干燥缺水生化反应受阻新陈代谢障碍干燥缺水生化反应受阻新陈代谢障碍死亡。甚至引起菌体蛋白质变性和由于盐类浓度的增死亡。甚至引起菌体蛋白质变性和由于盐类浓度的增高而逐渐导致死亡。高而逐渐导致死亡。p 各种微生物对干燥的耐受性差异很大各种微生物对干燥的耐受性差异很大 巴氏杆菌、淋球菌、鼻疽杆菌几天巴氏杆菌、淋球菌、鼻疽杆菌几天 破伤风、碳疽芽孢几年、几十年破伤风、碳疽芽孢几年、几十年 霉菌孢子抵抗力很强霉菌孢子抵抗力很强p 应用：应用：

35、主要用于菌种和食品的保藏。主要用于菌种和食品的保藏。临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:392.低温对微生物的影响低温对微生物的影响 细菌对寒冷的抵抗力较强。因此，低温不细菌对寒冷的抵抗力较强。因此，低温不能用于灭菌。能用于灭菌。(1)微生物对低温有较强的抵抗力：微生物对低温有较强的抵抗力： 微生物微生物 低温低温 代谢活动降低，生长繁殖停止，代谢活动降低，生长繁殖停止，可长期维持生命可长期维持生命 T升高到适宜升高到适宜 苏醒苏醒生长生长繁殖繁殖临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自

36、然E-mailE-mail:40低温常用于保存菌种。低温常用于保存菌种。 但是，反复冻融对微生物但是，反复冻融对微生物不宜。不宜。 各种细菌对低温的抵抗力亦不同。各种细菌对低温的抵抗力亦不同。（细菌、酵母菌、霉菌（细菌、酵母菌、霉菌0 044；病毒、某些细菌；病毒、某些细菌20207070，最好在液氮中（，最好在液氮中（196196）可长期保存；）可长期保存；但是巴氏杆菌、脑膜炎双球菌等低温敏感，低温比在但是巴氏杆菌、脑膜炎双球菌等低温敏感，低温比在室温中死亡更快。）室温中死亡更快。）冷冻保存食品冷冻保存食品细菌生长繁殖停止细菌生长繁殖停止应

37、应 用用临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:41（2 2）冷冻真空干燥法）冷冻真空干燥法 方法方法低温（低温（-40-40）迅速冻结，抽出空气，迅速冻结，抽出空气，真空状态下迅速脱水干燥真空状态下迅速脱水干燥可维持生命达数年可维持生命达数年加保护剂加保护剂脱脂奶粉或不含相应抗体的脱脂奶粉或不含相应抗体的血浆血浆或或血血清清（10105050）注意事项注意事项细菌、真菌不宜长期冰冻保存细菌、真菌不宜长期冰冻保存尤尤其是反复冻融对任何微生物都有很大的破坏力。其是反复冻融对任何微生物都有很大的破坏力。临沂

38、大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:42在低温状态下真空抽去水分在低温状态下真空抽去水分用途：保存菌种用途：保存菌种冷冻真空干燥法：冷冻真空干燥法：临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:43冷冻干燥机冷冻干燥机临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:44第二节第二节 化学消毒法化学消毒法防腐消毒剂：防腐消毒剂：许多化学药

39、物能够抑制或杀死微生物，已广泛许多化学药物能够抑制或杀死微生物，已广泛用于消毒、防腐，统称为防腐消毒剂。消毒剂它在杀灭病用于消毒、防腐，统称为防腐消毒剂。消毒剂它在杀灭病原微生物的同时，对动物体的组织细胞也有损害作用。原微生物的同时，对动物体的组织细胞也有损害作用。消毒剂消毒剂（disinfectant）：用于杀灭物体上病原体的化学药品用于杀灭物体上病原体的化学药品防腐剂防腐剂（antiseptic）：用于抑制微生物生长繁殖的化学药品：用于抑制微生物生长繁殖的化学药品或称抑菌剂。或称抑菌剂。消毒剂和防腐剂区别消毒剂和防腐剂区别：无严格的界限：无严格的界限临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院

40、 王自然王自然E-mailE-mail:45p 化学治疗剂：化学治疗剂：用于消除宿主体内病原微生物或其他用于消除宿主体内病原微生物或其他寄生虫的化学药物称为化学治疗剂。化学治疗剂对寄生虫的化学药物称为化学治疗剂。化学治疗剂对于宿主和病原微生物的作用具有选择性，它们使其于宿主和病原微生物的作用具有选择性，它们使其生命活动受到抑制或使其死亡，而对宿主细胞毒副生命活动受到抑制或使其死亡，而对宿主细胞毒副作用甚小。作用甚小。 p 消毒剂与治疗剂的区别：消毒剂与治疗剂的区别：对宿主组织细胞的作用。对宿主组织细胞的作用。 消毒剂特点：消毒剂特点：在杀灭病

41、原微生物的同时，对肌体的在杀灭病原微生物的同时，对肌体的组织细胞也有损害作用。因此，只用于局部（少数组织细胞也有损害作用。因此，只用于局部（少数不被吸收可由于消化道）、器械、环境。不被吸收可由于消化道）、器械、环境。 治疗剂特点：治疗剂特点：对宿主和病原微生物作用有选择性，对对宿主和病原微生物作用有选择性，对宿主细胞副作用很小。可全身用药宿主细胞副作用很小。可全身用药临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:46一、消毒剂的种类及应用一、消毒剂的种类及应用临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王

42、自然E-mailE-mail:47( (一一) )常用消毒剂种类常用消毒剂种类种类繁多消毒目的、对象、特点进行选择种类繁多消毒目的、对象、特点进行选择酸类消毒剂酸类消毒剂碱类消毒剂碱类消毒剂其它消毒剂其它消毒剂H+OH-SH醇脱水醇脱水Hg临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:481 1、酸类消毒剂、酸类消毒剂无机酸（三大强酸）：无机酸（三大强酸）：具有腐蚀性。但硼酸腐蚀具有腐蚀性。但硼酸腐蚀性较小（杀菌力亦弱），常用性较小（杀菌力亦弱），常用1-2

43、%1-2%硼酸用粘膜硼酸用粘膜消毒。消毒。有机酸：有机酸：如甲酸，醋酸，乳酸等均有杀菌作用，如甲酸，醋酸，乳酸等均有杀菌作用，常用乳酸水蒸气或溶液杀灭细菌或病毒。常用乳酸水蒸气或溶液杀灭细菌或病毒。临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:49 2 2、碱类消毒剂、碱类消毒剂 碱类消毒剂对所有细菌及芽胞和病毒都碱类消毒剂对所有细菌及芽胞和病毒都有杀灭作用。尤其常用于病毒的消毒：有杀灭作用。尤其常用于病毒的消毒： 10-20%10-20%石灰乳石灰乳 20-30%20-30%草木灰水草木灰水 1-3% Na

44、OH1-3% NaOH临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:503 3、其它常用消毒剂、其它常用消毒剂0.1%0.1%升汞用于非金属器械消毒升汞用于非金属器械消毒0.1%KMnO0.1%KMnO4 4和和3%H3%H2 2O O2 2用于粘膜和创伤消毒用于粘膜和创伤消毒707075%75%乙醇用于体表和体温表的消毒乙醇用于体表和体温表的消毒1 13%3%碘液用于皮肤、粘膜消毒碘液用于皮肤、粘膜消毒5 510%10%碘液可杀灭放线菌碘液可杀灭放线菌临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然

45E-mailE-mail:510.20.20.5%0.5%过氧乙酸用于塑料、玻璃、人造纤维消毒及皮肤过氧乙酸用于塑料、玻璃、人造纤维消毒及皮肤消毒。消毒。 3 35%5%酚、酚、3-5%3-5%来苏儿用于环境消毒或空气消毒。来苏儿用于环境消毒或空气消毒。甲醛杀菌力较强，常用于器械消毒。甲醛杀菌力较强，常用于器械消毒。40%40%甲醛溶液用于烈性甲醛溶液用于烈性传染病的消毒，传染病的消毒，4 410%10%甲醛溶液浸泡甲醛溶液浸泡30min30min可杀灭繁殖体及真菌。可杀灭繁殖体及真菌。20%20%甲醛甲醛溶液浸泡溶液浸泡6h6h以上，可杀灭芽

46、胞体。消毒房间：以上，可杀灭芽胞体。消毒房间：151525ml25ml福尔马林福尔马林/m/m加等量水薰蒸或加入加等量水薰蒸或加入KMnOKMnO4 4。要求湿度。要求湿度60608080； KMnOKMnO4 421g21g（1515）甲醛）甲醛42ml42ml（3030），），24h24h。临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:52（二）常用的消毒剂使用方法及常用浓度（二）常用的消毒剂使用方法及常用浓度类别类别作用原理作用原理消毒剂消毒剂名称名称方法与浓度方法与浓度酸酸与与碱碱以以H H+ +、O

47、HOH- -的解离的解离作用妨碍菌体代作用妨碍菌体代谢，杀菌力与浓度谢，杀菌力与浓度成正比成正比醋酸醋酸乳酸乳酸烧碱烧碱生石灰生石灰草木灰草木灰5 510ml/ m10ml/ m3 3加等量水蒸发，空间消毒。加等量水蒸发，空间消毒。蒸汽熏蒸或蒸汽熏蒸或2%2%溶液喷雾，用于空气消毒溶液喷雾，用于空气消毒2%2%5%5%的苛性钠溶液（的苛性钠溶液（60607070）消毒）消毒厩舍、饲槽、用具、车辆等。厩舍、饲槽、用具、车辆等。用用10%10%乳剂消毒厩舍、运动场等。乳剂消毒厩舍、运动场等。用用10%10%草木灰水煮沸草木灰水煮沸2h2h，过滤，再加，过滤，再加2 24 4倍水，消毒厩舍、运动场等

48、。倍水，消毒厩舍、运动场等。卤卤族族元元素素以氯化作用、氧化以氯化作用、氧化作用破坏作用破坏-SH-SH基，基，使酶活性受到抑制使酶活性受到抑制产生杀菌效果产生杀菌效果漂白粉漂白粉碘酊碘酊用用5%5%20%20%的混悬液消毒畜禽舍、饲槽、的混悬液消毒畜禽舍、饲槽、车辆等；以车辆等；以0.30.30.4g/kg0.4g/kg的剂量消毒的剂量消毒饮水。饮水。2%2%5%5%的碘酊用于手术部位、注射部位的碘酊用于手术部位、注射部位酚类酚类使菌体蛋白变性或使菌体蛋白变性或凝固凝固石炭酸石炭酸3%3%5%5%用于器械、排泄物消毒。用于器械、排泄物消毒。临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自

49、然E-mailE-mail:53（二）常用的消毒剂使用方法及常用浓度（二）常用的消毒剂使用方法及常用浓度 续续醇醇类类使菌体蛋白变性沉使菌体蛋白变性沉淀淀乙醇乙醇用用70%70%75%75%的乙醇作皮肤消毒，也用于的乙醇作皮肤消毒，也用于体温计、器械等消毒。体温计、器械等消毒。醛醛类类能与菌体蛋白的氨能与菌体蛋白的氨基酸结合，起到还基酸结合，起到还原作用原作用福尔福尔马林马林1%1%5%5%甲醛溶液或福尔马林气体熏蒸法甲醛溶液或福尔马林气体熏蒸法消毒畜舍、禽舍、孵化器等用具和皮毛消毒畜舍、禽舍、孵化器等用具和皮毛等。等。重重金金属属盐盐类类能

50、与菌体蛋白质能与菌体蛋白质（酶）的（酶）的-SH-SH基结基结合，使其失去活性；合，使其失去活性；重金属离子易使菌重金属离子易使菌体蛋白变性体蛋白变性升汞升汞硫柳硫柳汞汞0.01%0.01%水溶液用于消毒手和皮肤；水溶液用于消毒手和皮肤；0.05%0.05%0.1%0.1%用于非金属器皿消毒。用于非金属器皿消毒。0.1%0.1%溶液可作皮肤消毒；溶液可作皮肤消毒；0.01%0.01%适于作生适于作生物制品的防腐剂。物制品的防腐剂。氧氧化化剂剂使菌体酶类发生氧使菌体酶类发生氧化而失去活性化而失去活性过氧过氧乙酸乙酸用用3%3%10%10%溶液熏蒸或喷雾，一般按每平溶液熏蒸或喷雾，一般按每平方米空

51、间方米空间0.250.250.5ml0.5ml用量，适于畜禽舍用量，适于畜禽舍空气消毒。空气消毒。烷烷化化剂剂能与菌体蛋白发生能与菌体蛋白发生烷化烷化环氧环氧乙烷乙烷在密闭条件下，每平方米用在密闭条件下，每平方米用700700900mg ,900mg ,消毒消毒24h24h，适于皮毛、裘皮、电动和光学，适于皮毛、裘皮、电动和光学仪器及医用胶手套等消毒。仪器及医用胶手套等消毒。临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:54（二）常用的消毒剂使用方法及常用浓度（二）常用的消毒剂使用方法及常用浓度 续续表表面面

52、活活性性剂剂阳离子表面阳离子表面活性剂能改活性剂能改变细菌胞浆变细菌胞浆膜的通透膜的通透性，甚至使性，甚至使其崩解，使其崩解，使菌体内的物菌体内的物质外渗而产质外渗而产生杀菌作生杀菌作用；或以薄用；或以薄层包围胞浆层包围胞浆膜，干扰其膜，干扰其吸收作用吸收作用新洁尔灭新洁尔灭( (溴苄烷溴苄烷铵铵) )0.5%0.5%的水溶液用于皮肤和手的消毒；的水溶液用于皮肤和手的消毒；0.1%0.1%用于玻璃器皿、手术器械、橡用用于玻璃器皿、手术器械、橡用品的消毒；品的消毒；0.15%0.15%2%2%用于禽舍空喷用于禽舍空喷雾消毒；雾消毒；0.1%0.1%可用于种蛋消毒可用于种蛋消毒(40(404343

53、3min)3min)。度米芬度米芬( (消毒宁消毒宁) )对污染的表面用对污染的表面用0.1%0.1%0.5%0.5%喷洒，作喷洒，作用用101060min60min；浸泡金属器械可在其中；浸泡金属器械可在其中加入加入0.5%0.5%亚硝酸钠防锈；亚硝酸钠防锈；0.05%0.05%溶液用溶液用于食品厂、奶牛场的设备、用具消毒。于食品厂、奶牛场的设备、用具消毒。洗必泰洗必泰（双氯苯（双氯苯双胍乙烷双胍乙烷）0.02%0.02%水溶液可消毒手；水溶液可消毒手；0.05%0.05%溶液溶液冲洗创面，也可消毒禽舍、手术室、用冲洗创面，也可消毒禽舍、手术室、用具等；具等；0.1%0.1%用于手术器械的消

54、毒、食品用于手术器械的消毒、食品厂器具、设备的消毒。厂器具、设备的消毒。消毒净消毒净0.05%0.05%0.1%0.1%水溶液用于皮肤和手的消水溶液用于皮肤和手的消毒，也可用于玻璃器皿、手术器械、橡毒，也可用于玻璃器皿、手术器械、橡胶用品等的消毒，一般浸泡胶用品等的消毒，一般浸泡10min10min即可即可临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:55（二）理想消毒剂的条件（二）理想消毒剂的条件 p种类很多，其杀菌作用亦不相同，一般可根种类很多，其杀菌作用亦不相同，一般可根据用途与消毒剂特点选择使用。据用

55、途与消毒剂特点选择使用。p最理想的消毒剂应是杀菌力强、价格低、无最理想的消毒剂应是杀菌力强、价格低、无腐蚀性、能长期保存、对动物无毒性或毒性腐蚀性、能长期保存、对动物无毒性或毒性较小、无残留或对环境无污染的化学药物。较小、无残留或对环境无污染的化学药物。 临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:56（三）消毒剂的杀菌机制（三）消毒剂的杀菌机制复杂而多样，根据对菌体的作用大致可分为复杂而多样，根据对菌体的作用大致可分为:使菌体蛋白变性、凝固及水解。使菌体蛋白变性、凝固及水解。p药物与菌体蛋白质结合变性（金

56、属离子药物与菌体蛋白质结合变性（金属离子、蛋、蛋白质白质）变性或沉淀变性或沉淀-（金属盐、金属盐、醇类）醇类）p与蛋白质的氨基酸结合蛋白质脱水凝固变形与蛋白质的氨基酸结合蛋白质脱水凝固变形（醛类）（醛类）p使菌体蛋白质水解中和蛋白质电荷使菌体蛋白质水解中和蛋白质电荷-破坏其破坏其胶体稳定性而沉淀胶体稳定性而沉淀（碱或酸类）（碱或酸类）p改变改变DNADNA分子结构染料类（结晶紫）分子结构染料类（结晶紫）临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:57损伤胞浆膜损伤胞浆膜n降低菌细胞的表面张力，使胞浆膜通透性

57、增加，菌体降低菌细胞的表面张力，使胞浆膜通透性增加，菌体破裂溶解。破裂溶解。n表面活性剂和酚（石炭酸、来苏儿、表面活性剂和酚（石炭酸、来苏儿、醇类等脂溶剂醇类等脂溶剂）干扰细菌的酶系统和代谢干扰细菌的酶系统和代谢（与菌体内的酶类结合，影响细胞代谢或酶丧失活性）。（与菌体内的酶类结合，影响细胞代谢或酶丧失活性）。 使酶蛋白中的使酶蛋白中的SHSH改变改变二硫键二硫键，使酶失去活性氧化，使酶失去活性氧化剂（剂（高锰酸钾、过氧化氢、碘酊、漂白粉）、金属盐类）、金属盐类（汞、银）（汞、银）临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mail:1366639921

58、3 E-mail:58改变核酸的功能改变核酸的功能 如：染料如：染料龙胆紫可嵌入菌细胞双股龙胆紫可嵌入菌细胞双股DNADNA邻近邻近碱基对中，改变碱基对中，改变DNADNA分子结构，使细菌生长分子结构，使细菌生长繁殖受到抑制或死亡。繁殖受到抑制或死亡。临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mailE-mail:59二、影响消毒剂作用的因素二、影响消毒剂作用的因素消毒剂消毒剂种类种类浓度浓度作用时间作用时间细菌细菌菌龄菌龄种类种类 环境环境有机物有机物温度温度酸碱度酸碱度临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然

59、E-mailE-mail:60（一）影响消毒剂作用的因素（一）影响消毒剂作用的因素1. 1.消毒剂的性质、浓度与作用时间消毒剂的性质、浓度与作用时间2. 2.环境中的有机物的存在环境中的有机物的存在（对细菌有保护作用、与消毒（对细菌有保护作用、与消毒剂发生反应）剂发生反应） 意义：意义：3. 3.微生物的种类和特性微生物的种类和特性广谱、交替广谱、交替 （G+G+、繁殖体、幼龄菌）、繁殖体、幼龄菌）清创、清扫清创、清扫最好的预防药物最好的预防药物临沂大学生命科学学院临沂大学生命科学学院 王自然王自然E-mail:13

60、666399213 E-mail:614. 4.温度与酸碱度的影响温度与酸碱度的影响温度：升高温度：升高18182020；石炭酸升高；石炭酸升高1010，杀菌效果提高，杀菌效果提高5 58 8倍倍PHPH值：一般为电离的分子较易通过值：一般为电离的分子较易通过C C膜，杀菌效果好。膜，杀菌效果好。碱性溶液中，阳离子去污剂杀菌力强；酸性溶液中，碱性溶液中，阳离子去污剂杀菌力强；酸性溶液中，阴离子去污剂杀菌力强。阴离子去污剂杀菌力强。 例如戊二醛本身呈中性，其水溶液呈弱酸性，当加入例如戊二醛本身呈中性，其水溶液呈弱酸性，当加入碳酸氢钠后才发挥杀菌作用。新洁尔灭的杀菌作用是碳酸氢钠后才发挥杀菌作用。新洁尔灭