第八章 吸光光度法

1、第八章吸光光度法第八章：吸光光度法第八章：吸光光度法 8.1 8.1 概述概述8.2 8.2 光吸收定律光吸收定律 8.3 8.3 比色法和分光光度法比色法和分光光度法8.4 8.4 光度分析法的设计光度分析法的设计8.5 8.5 光度测量误差和测量条件的选光度测量误差和测量条件的选择择8.6 8.6 定量分析方法定量分析方法化学分析法总结化学分析法总结 酸碱滴定法酸碱滴定法 配位滴定法配位滴定法 氧化氧化- -还原滴定法还原滴定法 沉淀滴定法沉淀滴定法 化学分析法的特点化学分析法的特点? ?化学分析化学分析：常量组分：常量组分(1%), (1%), E Er r 0.1%0.1%0.2%0.

2、2% 依据化学反应依据化学反应, , 使用玻璃仪器使用玻璃仪器 仪器分析仪器分析：微量组分：微量组分(1%), (105：超高灵敏；：超高灵敏； =(610）104 ：高灵敏；：高灵敏； 2104 ：不灵敏。：不灵敏。5）在数值上等于浓度为在数值上等于浓度为1mol/L、液层厚度为、液层厚度为1cm时该时该溶液在某一波长下的吸光度。溶液在某一波长下的吸光度。6.6.朗伯朗伯- -比尔定律的适用条件比尔定律的适用条件1.1. 单色光单色光 应选用应选用 maxmax处或肩峰处测定处或肩峰处测定2. 2. 吸光质点形式不变吸光质点形式不变 离解、络合、缔合会破坏线性关系离解、络合、缔合会破坏线性关

3、系 应控制条件应控制条件( (酸度、浓度、介质等酸度、浓度、介质等) )3. 3. 稀溶液稀溶液 浓度增大，分子之间作用增强浓度增大，分子之间作用增强例：用双硫腙比色法测定镉，已知含 Cd2+浓度为 140g/L，比色皿厚度为 2cm，在 = 520 nm 处测得透光率为 60.3%，求吸光度、金属离子的摩尔吸光系数、金属离子的桑德尔灵敏度。( MCd = 112.4 ) 解：)cm/g(103 . 1108 . 841.112MS)cmmolL(108 . 81025. 12220. 0L/mol1025. 141.11210140Cd41.112MbCA;bCA220. 0603. 0lg

4、TlgT1lgA2341146662C例：为测定有机胺的摩尔质量，常将其转变为例：为测定有机胺的摩尔质量，常将其转变为1:11:1的苦的苦味酸胺的加合物（有机胺味酸胺的加合物（有机胺- -苦味酸）。现称取某加合物苦味酸）。现称取某加合物0.0500g0.0500g，溶于乙醇中制成，溶于乙醇中制成1L1L溶液，以溶液，以1.01.0吸收池在最大吸收池在最大吸收波长吸收波长380nm380nm处测得处测得A A值为值为0.7500.750，求有机胺的摩尔质，求有机胺的摩尔质量（量（M M苦味酸苦味酸 = 229= 229，= 1.0= 1.010104 4 L Lmolmol-1-1cmcm-1-

5、1）。）。解：7 .4372297 .666;7 .666/105 . 705. 01/105 . 70 . 1100 . 1750. 0554有机胺苦味酸胺MLmolgMCmnmMMmnnCVnCLmolbAC解解: 由由A=-lgT=bc可得可得 T=10-bc 当当b1=1cm时，时，T1=10-c=T 当当b2=2cm时，时，T2=10-2c=T2例、某有色溶液，当用例、某有色溶液，当用1cm1cm比色皿时，其透光度比色皿时，其透光度为为T T，若改用，若改用2cm2cm比色皿，则透光度应为多少？比色皿，则透光度应为多少？8.2.3 8.2.3 偏离偏离LambertLambert -

6、BeerBeer定律的因素定律的因素cbA 定量分析时，通常液层定量分析时，通常液层厚度是相同的，按照比尔厚度是相同的，按照比尔定律，浓度与吸光度之间定律，浓度与吸光度之间的关系应该是一条通过直的关系应该是一条通过直角坐标原点的直线。但在角坐标原点的直线。但在实际工作中，往往会偏离实际工作中，往往会偏离线性而发生弯曲。线性而发生弯曲。1.1.光学因素光学因素 1) 1) 非单色光的影响非单色光的影响 BeerBeer定律应用的重要前提定律应用的重要前提入射光为单色光入射光为单色光 照射物质的光经单色器分光后照射物质的光经单色器分光后并非真正单色光并非真正单色光 其波长宽度由入射狭缝的宽度其波长

7、宽度由入射狭缝的宽度和棱镜或光栅的分辨率决定和棱镜或光栅的分辨率决定 为了保证透过光对检测器的响为了保证透过光对检测器的响应，必须保证一定的狭缝宽度应，必须保证一定的狭缝宽度 这就使分离出来的光具一定的这就使分离出来的光具一定的谱带宽度谱带宽度2 21 10 00 02 21 1和和I I为为I I对对应应的的透透过过光光光光强强分分别别和和I II I入入射射光光光光强强分分别别为为的的光光组组成成和和设设入入射射光光由由波波长长为为2 21 1bcIIcbIITA10lglg0002010201020102010201212112110101010IIIIIIIIIIIITbcbcbcbc

8、）（又0201020112110lglgIIIIbcTAbc）（讨论：讨论：入射光的谱带宽度严重影响吸光系数入射光的谱带宽度严重影响吸光系数和吸收光谱形状和吸收光谱形状 结论：结论： 选择较纯单色光（选择较纯单色光（，单色性，单色性） 选选maxmax作为测定波长（作为测定波长（ ，SS且成线性）且成线性）偏离线性关系越严重与）（定律不成线性关系，偏离与成线性关系cABeercAbcA2)2)反射光和杂散光的影响反射光和杂散光的影响杂散光是指从单色器杂散光是指从单色器分出的光不在入射光分出的光不在入射光谱带宽度范围内，与谱带宽度范围内，与所选波长相距较远所选波长相距较远杂散光来源：杂散光来源：

9、仪器本仪器本身缺陷；光学元件污身缺陷；光学元件污染造成染造成反射光和杂散光均是入射光谱带宽度内的光反射光和杂散光均是入射光谱带宽度内的光 直接对直接对T T产生影响产生影响散射和反射使散射和反射使TT，AA，吸收光谱变形，吸收光谱变形注：一般可用空白对比校正消除注：一般可用空白对比校正消除I0I3) 3) 非平行光的影响非平行光的影响使光程使光程，AA，吸收光谱变形，吸收光谱变形2.2.化学因素化学因素 BeerBeer定律适用的另一个前提：定律适用的另一个前提：稀溶液稀溶液 比耳定律假设了吸收粒子之间是无相互作用的，比耳定律假设了吸收粒子之间是无相互作用的，因此仅在稀溶液（因此仅在稀溶液（c

10、 10c 200nm200nm的光的光 N=N ; C=O N=N ; C=O ；C=S ; NOC=S ; NO2 2 ; N=O ; N=O 助色团助色团：含有孤对电子的基团，与生色团上的不：含有孤对电子的基团，与生色团上的不饱和键作用，影响化合物对光的吸收，使颜色加深饱和键作用，影响化合物对光的吸收，使颜色加深 NH2 ；RNH ；R2N ； OH ( (a a) )磺基水扬酸，磺基水扬酸，OOOO型螯合显色剂型螯合显色剂 =1.6103Lmol-1cm-( (b b) )丁二铜肟，丁二铜肟，NNNN型型 =1.3104( (c c)1)1，10-10-二氮菲，二氮菲，NNNN型型 =(

11、 (d d ) )二苯硫腙：二苯硫腙： =6.6104( (e e) )偶氮胂偶氮胂III(III(钠试剂钠试剂) )，变色酸偶氮类，变色酸偶氮类 ( (f f) )络天青络天青S(S(三苯甲烷类螯合剂三苯甲烷类螯合剂) ) =530nm =5.9104L/mol cm ( (g g) )结晶紫结晶紫: : 三苯甲烷类碱性染料三苯甲烷类碱性染料 8.4.3 8.4.3 显色条件的选择显色条件的选择 M + R = MRM + R = MR 被测物显色剂有色化合物被测物显色剂有色化合物1.1.显色剂用量显色剂用量：为保证反应完全，：为保证反应完全，R R过量，且不宜过多过量，且不宜过多用量范围用

12、量范围宽宽用量范围用量范围窄窄严格控制严格控制R R量量2.2.溶液的酸度溶液的酸度 (1)(1)影响显色剂的平衡浓度和颜色影响显色剂的平衡浓度和颜色 (2)(2)影响金属离子的存在状态影响金属离子的存在状态 (3)(3)影响络合物的组成影响络合物的组成 pHpH1pH10 +H pH10 +H2 2D DZ Z 518518 PbPb2+2+ + pH8-9 +H + pH8-9 +H2 2D DZ Z 510510 HgHg2+2+ + pH6 +H + pH光度计的读数误差一般为光度计的读数误差一般为0.20.22 2(T T),),由于由于T T与与浓度浓度c c不是线性关系，故不同浓

13、度时的不是线性关系，故不同浓度时的T T引起引起的误差不同。的误差不同。仪器测量误差仪器测量误差%100lg434. 0%100ln%100%10001. 0TTTTTTAAccETdTr%100ln%100%100ln434. 0lg1lgTTdTAdAcdcETTTbcA浓度测量的相对误差与浓度测量的相对误差与T T( (或或A A) )的关系的关系1086420204060800.70.40.20.1AT%Err0.434lg(0.01)cTEcTTT (36.8)0.434实际工作中，应控制实际工作中，应控制T T在在20207070, , A A在在0.20.20.80.8之间之间8

14、.5.3 8.5.3 测量条件的选择测量条件的选择 1.1.入射光波长的选择：最大吸收的原则入射光波长的选择：最大吸收的原则maxmax2.2.控制吸光度读数范围：控制吸光度读数范围： 调调 c c或或b b，使，使A A介于介于0.20.20.8 0.8 之间。之间。3.3.参比溶液的参比溶液的选择选择: : 选合适的参比溶液选合适的参比溶液, , 调仪器调仪器A =0A =0，T=100% T=100% 。4.4.波长校正：用氘灯、钬玻璃。波长校正：用氘灯、钬玻璃。5.5.吸光度校正：规定浓度的标准溶液吸光度校正：规定浓度的标准溶液 。如：。如：CuSOCuSO4 46.6.吸收池校正：参

15、比池、样品池交换。吸收池校正：参比池、样品池交换。 A 1%A 1% 测量的入射光波长：最大吸收波长测量的入射光波长：最大吸收波长maxmax。 若干扰物在若干扰物在maxmax处也有吸收，在干扰最小处也有吸收，在干扰最小的条件下选择吸光度最大的波长。的条件下选择吸光度最大的波长。2、吸光度范围的选择、吸光度范围的选择两式相除：两式相除：BBd0.434dlgcTcTT B0.434ddlgdTTd cT Blg=TAdc 不同透光率时测定浓度的相对误差不同透光率时测定浓度的相对误差cB/cB(T=0.01) T/% 95 90 80 70 60 50 36.83020 10 5 2 20.6

16、 10.7 5.6 4.0 3.3 2.9 2.7 2.8 3.2 4.3 6.5 13.0 BB(/)/% cc 在在 T = 36.8%(A=0.434)时，浓度时，浓度测定的相对误差最小。测定的相对误差最小。 在实际在实际测定时，常将吸光度控制在测定时，常将吸光度控制在0.2 0.8(T=20% 70%)之间。之间。选择参比的选择参比的原则原则： 1. 1. 仅络合物有吸收，仅络合物有吸收，溶剂溶剂作参比。作参比。 如如 phenphenFeFe2+2+ 标准曲线标准曲线2.2.待测液也有吸收待测液也有吸收，被测液被测液作参比。作参比。 如如 测汽水中的测汽水中的 FeFe3. 3. 显

17、色剂或其他试剂也有吸收，显色剂或其他试剂也有吸收，空白溶液空白溶液作参比作参比 例例: :邻二氮菲光度法测邻二氮菲光度法测LiLi2 2COCO3 3中的中的 FeFe， 参比溶液为不含参比溶液为不含LiLi2 2COCO3 3样品的所有试剂。样品的所有试剂。4. 4. 干扰组分与显色剂有反应干扰组分与显色剂有反应, ,又无法掩蔽消除时：又无法掩蔽消除时： 1 1）掩蔽被测组分掩蔽被测组分，再加入显色剂，作参比，再加入显色剂，作参比. .2 2）加入等量干扰组分加入等量干扰组分到空白溶液中到空白溶液中, ,作参比作参比. . 原则原则:使试液的吸光度能真正反映待测物的浓度。使试液的吸光度能真正

18、反映待测物的浓度。8.6 8.6 定量分析方法应用定量分析方法应用 8.6.1 8.6.1 单一组分测定单一组分测定 1. 1. 原理：原理： 朗伯朗伯比尔定律（比尔定律（A = K b cA = K b c）2.2.方法方法标准曲线法或工作曲线法标准曲线法或工作曲线法标准比较法标准比较法 先配制一系列标准溶液，在最大吸收波长处，先配制一系列标准溶液，在最大吸收波长处，测出它们的吸光度，作图，同条件测未知液的测出它们的吸光度，作图，同条件测未知液的吸光度，从图中查出未知液的浓度。吸光度，从图中查出未知液的浓度。标准工作曲线图标准工作曲线图cAAxcxc1c2c3c4c5A1A2A3A4A5标准

19、工作曲线法标准工作曲线法同条件下分别测定未知液与标准溶液的吸光度同条件下分别测定未知液与标准溶液的吸光度A Ax x和和A A标标，根据朗伯，根据朗伯- -比尔定律，应有下式：比尔定律，应有下式：标准比较法标准比较法xxAbc标标cbA标标ccAAxx/因为：因为：标标cAAcxx所以：所以：3) 3) 蛋白质测定蛋白质测定溴甲酚绿、考马司亮蓝等溴甲酚绿、考马司亮蓝等4) 4) 氨基酸测定氨基酸测定茚三酮茚三酮( (紫色化合物紫色化合物) )5) 5) 水质检测水质检测: NH: NH4 4+ +、NONO2 2- -、MnMn2+2+、FeFe2+2+、SOSO4 42-2-、6) 6) 药

20、物含量测定药物含量测定比吸光系数定量比吸光系数定量7) 7) 紫外吸收紫外吸收(UV): NO(UV): NO2 2- -、NONO3 3- -、SOSO4 42-2-、SOSO3 32-2-、COCO3 32-2-、SCNSCN- -、酪氨酸、色氨酸、丙氨酸、蛋白质等。、酪氨酸、色氨酸、丙氨酸、蛋白质等。3.3.应用应用2) 2) 磷的测定磷的测定: DNA: DNA中含中含P P9.2%, RNA9.2%, RNA中含中含P P9.5%, 9.5%, 1) 1) 金属离子金属离子: Fe-phen: Fe-phen, Ni-, Ni-丁二酮肟丁二酮肟, Co-, Co-钴试剂钴试剂8.6.

21、2 8.6.2 多组分的测定多组分的测定 x 1, y 1, x 2, y 2由由x,yx,y标液标液 在在 1 1, , 2 2处分别测得处分别测得a) 在 1 1处测组分处测组分x, x, 在 2 2处测组分处测组分y yb) 在 1 1处测组分处测组分x; x; 在在 2 2处测总吸收处测总吸收, ,扣除扣除x x吸收吸收, ,可求可求y yc) x,yx,y组分不能直接测定组分不能直接测定A1= x 1bcx+ y 1bcy(在 1 1处测得处测得A A1 1) A2 = x 2bcx+ y 2bcy(在 2 2处测得处测得A A2 2)8.6.38.6.3 双波长分光光度法双波长分光

22、光度法 不需空白溶液作参比；但需要两个单不需空白溶液作参比；但需要两个单色器获得两束单色光色器获得两束单色光( (1 1和和2 2) )；以参比；以参比波长波长1 1处的吸光度处的吸光度A A11作为参比，来消除作为参比，来消除干扰。干扰。在分析浑浊或背景吸收较大的复杂在分析浑浊或背景吸收较大的复杂试样时显示出很大的优越性。灵敏度、选试样时显示出很大的优越性。灵敏度、选择性、测量精密度等方面都比单波长法有择性、测量精密度等方面都比单波长法有所提高。所提高。 双波长分光光度法双波长分光光度法AA A A22 A A11 ( (22 11) )b cb c 两波长处测得的吸光度差值两波长处测得的吸

23、光度差值AA与待测组分浓与待测组分浓度度c c成正比。成正比。11和和22分别表示待测组分在分别表示待测组分在1 1和和2 2处的摩尔吸光系数。处的摩尔吸光系数。测量波长测量波长2 2和参比波长和参比波长1 1的选择与组合的选择与组合1.1.基本要求：基本要求：在选定的两个波长在选定的两个波长1 1和和2 2处待测组分的吸光度处待测组分的吸光度应具有足够大的差值。应具有足够大的差值。 选定的波长选定的波长1 1和和2 2处干扰组分应具有相同处干扰组分应具有相同吸光度，吸光度，即：即：AAy = y = A A y y22 A A y y11 = 0 = 0故：故：AAx+y = x+y = A

24、 A x=(x=(x2x2x1x1) )bcbcx x此时：测得的吸光度差此时：测得的吸光度差AA只与待测组分只与待测组分x x的浓度呈的浓度呈线性关系，而与干扰组分线性关系，而与干扰组分y y无关。若无关。若x x为干扰组分，为干扰组分，则也可用同样的方法测定则也可用同样的方法测定y y组分。组分。双波长分光光度法消除干扰双波长分光光度法消除干扰在 2， A 2 = Ax2+Ay2在在 1， A 1= Ax1+Ay1 A= A 2 - A 1 = Ax2+Ay2 (Ax1+Ay1) = Ax2 Ax1 = AxAy2 Ay1 Ax =( x2 x1)bcx消除了消除了y y的干扰的干扰X被测

25、被测Y干扰干扰211Ay1AX1Ay2AX2A/双波长分光光度法消除浑浊背景干扰双波长分光光度法消除浑浊背景干扰 1 2AA 1 -A 2 = A Ac例例 牛奶中微量牛奶中微量FeFe的测定的测定 2.2.应用：应用：a).a).混浊试液中组分测定：试液为参比混浊试液中组分测定：试液为参比（不同波长（不同波长=40-60nm=40-60nm）消除试液中散）消除试液中散射光的影响。射光的影响。b).b).单组分测定：配合物吸收峰为测量波单组分测定：配合物吸收峰为测量波长，显色剂的吸收（等吸点）为参比波长长，显色剂的吸收（等吸点）为参比波长c.c.两组分共存时测定：利用等吸点处两组分共存时测定：

26、利用等吸点处A A相相等的特点。等的特点。 例如例如 两组份的三种叠加情况两组份的三种叠加情况 列联立方程：列联立方程：A1X+Y=AX +AY =X1 b cX +Y1b cY A2X+Y = X2b cX + Y2b cY 1，2用纯物质测量，代入求解用纯物质测量，代入求解Cx和和C等吸收点等吸收点-作图法作图法 2 1 1 Y X A相等相等1：参比波长：参比波长2：测量波长：测量波长消除消除Y干扰干扰A=(X2bcX+Y 2b cY) - (X 1bcX +Y 1b cY) 等吸收点等吸收点Y2=Y1 故故A=(X2-X1)b cX A与与Cx成正比，成正比，与共存的与共存的Y无关。无

27、关。8.6.4.8.6.4.示差分光光度法示差分光光度法-高含量组分的测定高含量组分的测定 原理原理：以稍低于待测组分浓度的标准溶液作为参比溶：以稍低于待测组分浓度的标准溶液作为参比溶液，然后测试液的吸光度，再从液，然后测试液的吸光度，再从A A求求c c，从而提高准确度，从而提高准确度参比液参比液 c cS S c cX X样品液样品液 (c(co o c cX X ) )则则 A AS S = b c = b cS S A AX X= b c= b cX X A=A=A A相对相对= A= AX X-A-AS S =b(c =b(cX X-c-cS S)=b)=bc c相对相对 用用c c

28、S S参比液调参比液调“0”0”，而后测，而后测A A值，实际是试样值，实际是试样与参比之差与参比之差A A与两者的浓度差与两者的浓度差c c成正比成正比 故：故：c cX X = c = cS S + + c cX X A与与C的工作曲线：的工作曲线： AX cX如果参比如果参比T%=10T%=10，现调成至，现调成至100%(A=0)100%(A=0)，等于把仪器透光率扩等于把仪器透光率扩1010倍，测量误差变小了倍，测量误差变小了。 例.以试剂为空白参比调T=100%，测某有色液A=1.301，假设T=0.003，求光度测量误差Er=？ 若以T=10%为参比，示差光度法测该试液的T=？此

29、时Er又为多少？解：已知T=10-A=10-1.301=0.050=5.0% 若示差法：则： 降低10倍2%lg0.050.050.0030.434TlgTT0.434ErCC%TT% 50% 10%5.0% TS 相对相对 0.2%lg0.10)00.50(lg0.50.0030.434 )lgT (lgT TT0.434 CC ErS 相对相对 相对相对 相对相对例. 锌标液CZn=0.00100mol/L和含Zn样品各测A=0.700和A=1.000，问两种溶液透射率相差多少？如果用0.00100mol/L Zn 标液作参比，试液的A=？示差法与普通光度法相比，读数标尺放大了多少倍？解：

30、1. A= - lgT，则T1=10-A=10-0.700=0.200=20.0% T2=10-1.000=0.1000=10.0% 故透光率相差10.0% 2.A相对=A=bC=1.000-0.700=0.300 3.A相对=0.300则T=10-0.300=0.50=50% 标尺放大倍数为： 标准溶液在两种方法里标尺扩展了5倍 5%10%505%20%8.6.5.8.6.5.光度滴定光度滴定 由于在选定的波长下，被滴定的溶液各组分由于在选定的波长下，被滴定的溶液各组分的吸光情况不同，曲线形状不同的吸光情况不同，曲线形状不同 (a)滴定剂对选用波长的光有滴定剂对选用波长的光有很大吸收，待测物

31、和产物不很大吸收，待测物和产物不吸收，如吸收，如MnO4-滴滴 Fe2+(b)待测物有吸收滴定剂待测物有吸收滴定剂和产物不吸收，如和产物不吸收，如EDTA滴水扬酸铁滴水扬酸铁 (c)产物有吸收，滴定剂产物有吸收，滴定剂与待测物无吸收，与待测物无吸收，如如NaOH滴对溴苯酚滴对溴苯酚(d)滴定剂和待测物滴定剂和待测物 有吸收，产物无吸收有吸收，产物无吸收 如如 KBrO3 -KBr滴滴 Sb3+-HCl液液 优点：优点： 典型的光度滴定曲线典型的光度滴定曲线依据滴定过程中溶液吸光度变化来确定终点依据滴定过程中溶液吸光度变化来确定终点的滴定分析方法。的滴定分析方法。Vsp滴定剂吸收滴定剂吸收Vsp

32、被滴物吸收被滴物吸收Vsp滴定剂与待滴定剂与待测物均吸收测物均吸收Vsp产物吸收产物吸收8.6.5.8.6.5.配合物组成的测定配合物组成的测定 1.1.摩尔比法摩尔比法 做法：固定做法：固定 c cM M，改变，改变 c cR R，就可得一系，就可得一系列列 c cR R/ c/ cM M值不同的溶液，测值不同的溶液，测A A作图作图1:13:1c(R)/c(M)A1.0 2.0 3,0 2.2.等摩尔连续变换法等摩尔连续变换法做法：做法： c cM M + c + cR R = c = c，改变，改变 c cM M与与 c cR R的相对的相对比值，使比值，使 c cM M: c: cR

33、R =10:0 =10:0，9:19:1，8:2.1:98:2.1:9，0:100:10 M:R=1:10.50.33cM/ccM/cM:R=1:8.6.6.8.6.6.酸碱离解常数的测定酸碱离解常数的测定 例如例如 一元弱酸一元弱酸 K Ka a 的测定的测定 H+A - Ka = HA 做法做法：先配：先配 c c总总= c= cHAHA +A+A相等而相等而pHpH不同的不同的HAHA溶液溶液，用，用pHpH计测各个溶液的计测各个溶液的pHpH值，然后在值，然后在maxmaxHAHA，MaxMaxA A - -用用b=1cmb=1cm，测定各溶液的，测定各溶液的A A值：值： HA=H+A-A=HAHA+A-A- =HA c HA + A- cA- H+ Ka =HA c +A c (1) H+Ka H+Ka 设：高酸度，设：高酸度，pH小，弱酸全部以酸的形式存在小，弱酸全部以酸的形式存在，即，即 c=HA，从而测，从而测AHA =HA c 低酸度，低酸度，pH大，弱酸全部以共轭碱形式存大，弱酸全部以共轭碱形式存在，即在，即 c=A-，从而测，从而测AA=A c (1)式整理：式整理： AHAH+ AA- Ka A= + .(2) H+Ka H+Ka 故：故： H+A- AHA-A Ka= = H+.(3) HA A-AA-(3)取负对数：取负对数： A