培养基和试剂质量控制方法

1、会计学1培养基和试剂质量控制方法培养基和试剂质量控制方法 1.1 定义定义1.2.1 1.2.1 按组成成分分类按组成成分分类1.2.2 1.2.2 按状态分类按状态分类1.2.3 1.2.3 按用途分类按用途分类1.2.4 1.2.4 按制备方法分类按制备方法分类1.2 分类分类1.2.1 1.2.1 按组成成分分类按组成成分分类纯化学培养基：纯化学培养基：仅含有已知分子结构和纯度的化仅含有已知分子结构和纯度的化学成分的培养基。学成分的培养基。未定义和部分定义的化学培养基：未定义和部分定义的化学培养基：全部或部分由全部或部分由天然物质，加工过的物质或其他不纯的化学物质天然物质，加工过的物质或

2、其他不纯的化学物质构成的培养基。构成的培养基。分类分类定义定义举例举例增菌培养基增菌培养基为微生物繁殖提供特定的生长环境，通常为液体为微生物繁殖提供特定的生长环境，通常为液体细分细分选择性增菌选择性增菌允许特定微生物繁殖，部分或全部抑制其他微生物生长允许特定微生物繁殖，部分或全部抑制其他微生物生长TTB、SC非选择性增菌非选择性增菌能使多种微生物生长的培养基能使多种微生物生长的培养基BHI、NB分离培养基分离培养基支持微生物生长的固体或半固态培养基支持微生物生长的固体或半固态培养基细分细分选择性分离选择性分离支持特定微生物生长而抑制其它微生物生长的分离培养基支持特定微生物生长而抑制其它微生物生

3、长的分离培养基XLD、BS非选择性分离非选择性分离对微生物没有选择性抑制的分离培养基对微生物没有选择性抑制的分离培养基NA计数培养基计数培养基能对微生物定量的选择性或非选择的培养基（注：可包含复苏、增菌能对微生物定量的选择性或非选择的培养基（注：可包含复苏、增菌等特性）等特性）MYP、PCA鉴别培养基鉴别培养基（特异性培养基）（特异性培养基）能进行一项或多项生理或生化特性鉴定的培养基能进行一项或多项生理或生化特性鉴定的培养基麦康凯琼脂麦康凯琼脂鉴定培养基鉴定培养基能产生一个特定的鉴定反应而不需要进一步确证实验的培养基能产生一个特定的鉴定反应而不需要进一步确证实验的培养基蛋白胨水蛋白胨水确证培养

4、基确证培养基经复苏、分离和增菌后，对微生物部分或完全鉴定或鉴别的培养基经复苏、分离和增菌后，对微生物部分或完全鉴定或鉴别的培养基BGLB肉汤肉汤运输培养基运输培养基取样后处理前保持微生物活性且不允许明显增殖的培养基取样后处理前保持微生物活性且不允许明显增殖的培养基缓冲甘油缓冲甘油-氯化氯化钠溶液钠溶液保藏培养基保藏培养基一定时期内保护和维持微生物活性，防止长期保存造成不利影响，或一定时期内保护和维持微生物活性，防止长期保存造成不利影响，或使微生物在长期保存后容易复苏的培养基使微生物在长期保存后容易复苏的培养基营养琼脂斜面营养琼脂斜面复苏培养基复苏培养基能使受损或应激的微生物修复，使其恢复生长能

5、力，但不一定促进微能使受损或应激的微生物修复，使其恢复生长能力，但不一定促进微生物繁殖的培养基生物繁殖的培养基悬浮培养基悬浮培养基将测试样本的微生物分散到液相中，不产生增值或抑制作用的培养基将测试样本的微生物分散到液相中，不产生增值或抑制作用的培养基磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液PBS1.2.3 按用途分类质量保证质量保证培养基生产企培养基生产企业业提供文件提供文件质量保证质量保证培养基培养基使用者使用者2.1 脱水合成培养基脱水合成培养基制备流程制备流程2.2脱水合成培养基脱水合成培养基制备注意事项制备注意事项SC正常加热 SC过度加热指在均一固定的浓度中含有具活性的定量化菌种，经证明的标准物是指

6、其浓度已经证明。ATCC菌株（进口）CMCC菌株（国产）注：ATCC菌株提供证书，可以自行到其网站下载。标准菌株标准菌株( (冻干菌种）冻干菌种） 转种活化转种活化标准储备菌株标准储备菌株（-80-80冰箱保存的培养物）冰箱保存的培养物） 转种活化转种活化储备菌株储备菌株（44冰箱保存的培养物）冰箱保存的培养物） 转种活化转种活化工作菌株工作菌株（用于培养基微生物质控的新鲜培养物）（用于培养基微生物质控的新鲜培养物）详细请参考附录C获得标准菌株验证和文件归档依据生产商指引进行复苏在5%的血琼脂、TSA或其它适合的固体培养基上进行分离验证菌株的纯度和特性符合用适合的培养基制备菌悬液分装进行冻存或

7、冻干NO获得储存菌株YES通常悬浮于营养肉汤中适宜时间进行复苏验证菌落形态和革兰氏染色或用生化试验进行鉴定例如：TSB添加10%-15%甘油作为冷冻保护培养基在不高于-70低温冷冻保存可延长保存的时间。禁止采用较高的温度保存。标准储备菌株迅速解冻在适合的固体培养基上培养=工作菌株验证菌株的纯度和形态NO制备用于测试的工作菌株符合YES在适合的固体培养基上培养验证菌株的纯度和形态符合YES接种到合适的培养基或冻存菌悬液=工作菌株贮存物或贮存培养物在适合的培养基上分离=工作菌株验证纯度制备用于测试的工作菌株YESNONO符合此流程更合适此流程更合适基本基本( (感官和理化感官和理化) )要求：要求

8、：分装的量和分装的量和/ /或厚度或厚度外观、色泽和均一性外观、色泽和均一性琼脂凝胶的硬度琼脂凝胶的硬度水分含量水分含量2020 -25-25 的的pHpH值值缓冲能力缓冲能力微生物要求：微生物要求：微生物污染测试（只适用微生物污染测试（只适用于即用型培养基）于即用型培养基）生长特性生长特性 1 1、生长率、生长率 2 2、选择性、选择性 3 3、特异性、特异性 4 4、抗菌试验特性、抗菌试验特性注：详细参照注：详细参照GB 4789.28GB 4789.28附录附录F F培培养基质量控制标准养基质量控制标准性能评价和结果解释性能评价和结果解释：1、所有测试菌株的性能测试达到标准，则该批培养基

9、的性能测试结果符合规定；、所有测试菌株的性能测试达到标准，则该批培养基的性能测试结果符合规定；2、基本要求基本要求和和微生物要求微生物要求均符合规定，则该批培养基可被接受。均符合规定，则该批培养基可被接受。质质构构仪仪水分测定仪水分测定仪电极式电极式pH计计选择近期批次中质量良好的，或具有长期稳定性的批次培养基或即用型培养基通常可满足实验室的培养基性能检测要求培养基生产商自制培养基新培养基或新供应商产品其他特殊要求培养基性能测试第一法4.1定量方法悬浮培养基和运输培养基非选择性固体分离和计数培养基选择性固体分离和计数培养基选择性固体分离和计数培养基4.2半定量方法选择性液体增菌培养基非选择性液

10、体增菌培养基选择性液体计数培养基非选择性固体分离和计数培养基选择性固体分离和计数培养基4.3定性方法Mueller Hinton血琼脂鉴定培养基和实验试剂悬浮培养基和运输培养基非选择性固体分离和计数培养基非选择性液体增菌培养基选择性液体计数培养基选择性液体增菌培养基n非选择性培养基和选择性计数培养基上目标菌的生长率应不小于0.7；n选择性分离培养基上目标菌的生长一般不小于0.5，最低应为0.1。接种水平为20CFU200CFU4.1 定量方法定量方法 非选择性、选择性固体计数和分离培养基非选择性、选择性固体计数和分离培养基PR = NS/NO=(132+139)/2(172+175)/2=0.

11、78XLDTSA鼠伤寒沙门氏菌132,139172,175福氏志贺氏菌130,135182,187PR = NS/NO=(130+135)/2(182+187)/2=0.72鼠伤寒沙门氏菌：鼠伤寒沙门氏菌：福氏志贺氏菌：福氏志贺氏菌：4.1 定量方法定量方法 非选择性、选择性固体计数和分离培养基非选择性、选择性固体计数和分离培养基4.1 定量方法定量方法 悬浮培养基和运输培养基悬浮培养基和运输培养基n每条有菌生长的划线记为1分，如果仅一半的线有菌生长，记为0.5分，没有生长或生长量少于划线一半的，记为0分；n结果解释：目标菌在培养基上应呈典型的生长，目标菌生长指数G大于6，培养基可接受；非选择

12、培养基的G值通常较高。4.2 半定量方法半定量方法 非选择性、选择性固体计数和分离培养基非选择性、选择性固体计数和分离培养基完全被抑制。注：注：操作时用接种环而不用接种针，接种环完操作时用接种环而不用接种针，接种环完全浸入培养基中，取一满环接种物，接触容器全浸入培养基中，取一满环接种物，接触容器边缘边缘3 3次，去除多余液体。划线时，接种环与琼次，去除多余液体。划线时，接种环与琼脂表面的角度应为脂表面的角度应为2020-30-30，接种环压在琼脂，接种环压在琼脂表面的压力和划线速度前后一致，整个划线应表面的压力和划线速度前后一致，整个划线应快速连续，移取液体培养物时应将接种环伸入快速连续，移取

13、液体培养物时应将接种环伸入培养液下部分以防止环上产生气泡或泡沫。培养液下部分以防止环上产生气泡或泡沫。4.2 半定量方法半定量方法 选择性固体计数和分离培养基选择性固体计数和分离培养基 1 表示很轻微的混浊； 2 表示严重的混浊目标菌的浊度值应为2. 4.2 半定量方法半定量方法 非选择性液体增菌培养基非选择性液体增菌培养基4.2 半定量方法半定量方法 非选择性液体增菌培养基非选择性液体增菌培养基目标菌10CFU100CFU非目标菌1000CFU5000CFU接菌量1mL则表示待测液体培则表示待测液体培养基的生长率良好养基的生长率良好4.2 半定量方法半定量方法 选择性液体增菌培养基选择性液体

14、增菌培养基1mL非目标菌接种：在待测培养基中接种等量混合菌试管中的非目标菌。4.2 半定量方法半定量方法 选择性液体增菌培养基选择性液体增菌培养基4.2 半定量方法半定量方法 选择性液体增菌培养基选择性液体增菌培养基 1 表示很轻微的混浊； 2 表示严重的混浊。如需观察产气，记录小导管收集气体的体积比。u目标菌的浊度值应为2，产气应为1/3或以上；u非目标菌的浊度值应为0或1，无产气现象。4.2 半定量方法半定量方法 选择性液体计数培养基选择性液体计数培养基4.2 半定量方法半定量方法 选择性液体计数培养基选择性液体计数培养基非目标菌（特异性）：非目标菌（特异性）：有典型的菌落外观、大小和形态

15、。有典型的菌落外观、大小和形态。4.3 定性方法定性方法 非选择性、选择性固体计数和分离培养基非选择性、选择性固体计数和分离培养基注：有时可以观察到微生物生长后聚集成细胞团，沉积在试管或瓶子底部，发生这种情况时，小心振荡试管后再进行观察。4.3 定性方法定性方法 非选择性、选择性液体增菌和计数培养基非选择性、选择性液体增菌和计数培养基n结果观察与解释前后平板上目标菌的生长情况应均为良好。4.3 定性方法定性方法 悬浮培养基和运输培养基悬浮培养基和运输培养基片），平板翻转后培养。注：调整菌悬液浊度与接种所有平板的时间不要超过15min。n结果观察与解释在无反射黑色背景下，观察有无抑菌环。结果解释

16、参照附录F培养基质量控制标准。4.3 定性方法定性方法Mueller-Hinton血琼脂血琼脂 +：阳性，奇异变形杆菌，培养基变玫红色； ：阴性，大肠埃希氏菌，培养基变黄色或不变色 blank + 4.3 定性方法定性方法鉴定培养基鉴定培养基4、培养基性能测试方法状生长； ：阴性，蜡样芽孢杆菌，沿穿刺线生长。 + 4、培养基性能测试方法4.3 定性方法定性方法鉴定培养基鉴定培养基况下，按顺序加入指示剂， 在观察结果。4、培养基性能测试方法4.3 定性方法定性方法鉴定培养基鉴定培养基质控菌株名称斜面/底部肠炎沙门氏菌（右一）产碱（红）/产酸（黄）福氏志贺氏菌产碱（红）/产酸（黄）弗氏柠檬酸杆菌（

17、右二）产酸（黄）/产酸（黄）大肠埃希氏菌（左二）产酸（黄）/产酸（黄）产气产H2S+-+-例：三糖铁琼脂v 灭菌后制成高层斜面备用v 空白对照（左一）：橘红色4、培养基性能测试方法4.3 定性方法定性方法鉴定培养基鉴定培养基产品质量检验报告产品质量检验报告产品产品 MSDS5、测试结果的记录n培养基成分未充分混匀。n pH计未正确校准；n脱水培养基质量差.n脱水培养基质量差。n原料中的杂质。n制备容器或水中的有毒残留物。浓度错误；n添加剂污染。能影响荧光现象的观察含指示剂的培养基颜色异常含指示剂的培养基颜色异常不正常沉淀不正常沉淀含琼脂培养基凝胶强度下降含琼脂培养基凝胶强度下降 要 求1. 蒸

18、馏水或去离子水 2. pH在5.5-7.59、配制培养基用水的要求10、含琼脂培养基水浴及复溶的要求 水浴时间不宜超过水浴时间不宜超过4h 如果不能在如果不能在4h内及时使用，应迅速冷却，使其凝固，使用内及时使用，应迅速冷却，使其凝固，使用前再进行复溶前再进行复溶 但不可多次复溶，否则会影响培养基的但不可多次复溶，否则会影响培养基的pH值，并导致凝值，并导致凝胶强度下降胶强度下降n第二步：在电炉上继续加热至沸腾第二步：在电炉上继续加热至沸腾THANK YOU!指在均一固定的浓度中含有具活性的定量化菌种，经证明的标准物是指其浓度已经证明。获得标准菌株验证和文件归档依据生产商指引进行复苏在5%的血琼脂、TSA或其它适合的固体培养基上进行分离验证菌株的纯度和特性符合用适合的培养基制备菌悬液分装进行冻存或冻干NO获得储存菌株YES通常悬浮于营养肉汤中适宜时间进行复苏验证菌落形态和革兰氏染色或用生化试验进行鉴定例如：TSB添加10%-15%甘油作为冷冻保护培养基在不高于-70低温冷冻保存可延长保存的时间。禁止采用较高的温度保存。n非选择性培养基和选择性计数培养基上目标菌的生长率应不小于0.7；n选择性分离培养基上目标菌的生长一般不小于0.5，