基因工程克隆技术

1、基因工程克隆技术题组题组1基因工程基因工程1(2010全国全国，5)下列叙述符合基因工程概念的是下列叙述符合基因工程概念的是 () AB淋巴细胞与肿瘤细胞融合，杂交瘤细胞中含有淋巴细胞与肿瘤细胞融合，杂交瘤细胞中含有B淋巴细胞中的抗淋巴细胞中的抗 体基因体基因 B将人的干扰素基因重组到质粒后导入大肠杆菌，获得能产生人干将人的干扰素基因重组到质粒后导入大肠杆菌，获得能产生人干 扰素的菌株扰素的菌株 C用紫外线照射青霉菌，使其用紫外线照射青霉菌，使其DNA发生改变，通过筛选获得青霉素发生改变，通过筛选获得青霉素 高产菌株高产菌株 D自然界中天然存在的噬菌体自行感染细菌后其自然界中天然存在的噬菌体自

2、行感染细菌后其DNA整合到细菌整合到细菌 DNA上上第1页/共41页解析解析：基因工程是在生物体外，通过对基因工程是在生物体外，通过对DNA分子进行人工分子进行人工“剪切剪切”和和“拼拼接接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使目的基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产性繁殖，使目的基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。所以物。所以B为基因工程，而为基因工程，而A为动物细胞工程，为动物细胞工程，C为诱变育种，为诱变育种，D无人为无人为因素不属于基因工程。因素不属于基因工程。答案：答案：

3、B第2页/共41页2(20102010浙江理综，浙江理综，2 2)在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过 程中，下列操作错误的是程中，下列操作错误的是 () A用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸 B用用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体 C将重组将重组DNA分子导入烟草原生质体分子导入烟草原生质体 D用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞第3页/共41页解析解析：限制性核酸内切酶用于提取目的基因和切割载体，烟草花叶病毒限制性核

4、酸内切酶用于提取目的基因和切割载体，烟草花叶病毒的遗传物质是的遗传物质是RNA，不能用限制性核酸内切酶切割，不能用限制性核酸内切酶切割，A项错误；项错误；DNA连连接酶可以连接具有相同黏性末端的目的基因和载体，接酶可以连接具有相同黏性末端的目的基因和载体，B项正确；受体细胞项正确；受体细胞可以是受精卵和体细胞，也可以是去除细胞壁的原生质体，可以是受精卵和体细胞，也可以是去除细胞壁的原生质体，C项正确；项正确；目的基因为抗除草剂基因，所以未成功导入目的基因的细胞不具有抗除目的基因为抗除草剂基因，所以未成功导入目的基因的细胞不具有抗除草剂的能力，筛选时应该用含除草剂的培养基筛选转基因细胞，草剂的能

5、力，筛选时应该用含除草剂的培养基筛选转基因细胞，D项正项正确。确。答案：答案：A第4页/共41页题组题组2细胞工程细胞工程1(2010广东理综，广东理综，24)新技术的建立和应用对生物学发展至关重要。新技术的建立和应用对生物学发展至关重要。 下列技术下列技术(或仪器或仪器)与应用匹配正确的是与应用匹配正确的是(双选双选) () APCR技术技术扩增蛋白质扩增蛋白质 B杂交瘤技术杂交瘤技术制备单克隆抗体制备单克隆抗体 C光学显微镜光学显微镜观察叶绿体的基粒观察叶绿体的基粒 D花粉离体培养花粉离体培养培育单倍体植物培育单倍体植物第5页/共41页解析解析：本题主要考查技术本题主要考查技术(或仪器或仪

6、器)与应用的匹配情况。与应用的匹配情况。A项，项，PCR技术技术的应用是扩增基因，而不是蛋白质；的应用是扩增基因，而不是蛋白质；B项，杂交瘤技术的应用是制备单项，杂交瘤技术的应用是制备单克隆抗体，杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生特异性抗体；克隆抗体，杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生特异性抗体；C项，叶项，叶绿体属于显微结构，可用光学显微镜观察，叶绿体中的基粒属于亚显微绿体属于显微结构，可用光学显微镜观察，叶绿体中的基粒属于亚显微结构，则需电子显微镜才能观察；结构，则需电子显微镜才能观察；D项，培育单倍体植物主要包括花粉项，培育单倍体植物主要包括花粉离体培养和用秋水仙素处理两大步骤。离体培养和用

7、秋水仙素处理两大步骤。答案答案：BD第6页/共41页2(2010浙江理综，浙江理综，4)下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是 () A培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞 B克隆培养法培养过程中多数细胞的基因型会发生改变克隆培养法培养过程中多数细胞的基因型会发生改变 C二倍体细胞的传代培养次数通常是无限的二倍体细胞的传代培养次数通常是无限的 D恶性细胞系的细胞可进行传代培养恶性细胞系的细胞可进行传代培养 第7页/共41页3(2010江苏生物，江苏生物，24)明党参是我国珍稀药用植物，对其进行保护性开

8、明党参是我国珍稀药用植物，对其进行保护性开 发利用的方法有发利用的方法有(多选多选) () A设计细胞培养反应器，实现药用成分的工厂化生产设计细胞培养反应器，实现药用成分的工厂化生产 B大量培养愈伤组织，直接提取药用成分大量培养愈伤组织，直接提取药用成分 C大规模栽培组织培养苗，获取药用成分大规模栽培组织培养苗，获取药用成分 D利用组织培养获得胚状体，制成人工种子利用组织培养获得胚状体，制成人工种子 第8页/共41页考点考点1基因工程相关知识考查基因工程相关知识考查1基因工程的基本工具的比较基因工程的基本工具的比较第9页/共41页作用作用特点特点(条件条件)(1)识别特定的核苷酸识别特定的核苷

9、酸序列序列(2)在特定位点上切割在特定位点上切割(1)EcoliDNA连接酶连接酶只能连接黏性末端只能连接黏性末端(2)T4DNA连接酶能连连接酶能连接黏性末端和平末端接黏性末端和平末端(1)能在宿主细胞能在宿主细胞内稳定存在并大内稳定存在并大量复制量复制(2)有多个限制酶有多个限制酶切割位点切割位点(3)具有特殊的标具有特殊的标记基因记基因常用常用类型类型EcoR限制酶限制酶Sma限制酶限制酶EcoliDNA连接酶连接酶T4DNA连接酶连接酶质粒、质粒、噬菌体噬菌体的衍生物、动植的衍生物、动植物病毒物病毒限制酶限制酶DNA连接酶连接酶载体载体作用作用切割目的基因和载体切割目的基因和载体拼接拼

10、接DNA片段，形成片段，形成重组重组DNA携带目的基因进携带目的基因进入受体细胞入受体细胞作用作用部位部位两核苷酸的脱氧核糖与磷酸间形成的磷酸二两核苷酸的脱氧核糖与磷酸间形成的磷酸二酯键酯键第10页/共41页2.将目的基因导入受体细胞中的方法的比较将目的基因导入受体细胞中的方法的比较生物种类生物种类植物细胞植物细胞动物细胞动物细胞微生物细胞微生物细胞常用方法常用方法农杆菌转化法农杆菌转化法显微注射法显微注射法Ca2处理法处理法受体细胞受体细胞体细胞体细胞受精卵受精卵原核细胞原核细胞转化过程转化过程目的基因插入目的基因插入Ti质质粒的粒的T-DNA上上农农杆菌杆菌导入植物细导入植物细胞胞整合到受

11、体细整合到受体细胞的染色体胞的染色体DNA表达表达目的基因表达载体目的基因表达载体提纯提纯提纯提纯取卵取卵(受受精卵精卵)显微注射显微注射受精卵发育受精卵发育获得获得具有新性状的动物具有新性状的动物Ca2处理细胞处理细胞感受态细胞感受态细胞重重组表达载体与感组表达载体与感受态细胞混合受态细胞混合感受态细胞吸收感受态细胞吸收DNA分子分子第11页/共41页3.目的基因的检测内容和方法的比较目的基因的检测内容和方法的比较类型类型步骤步骤检测内容检测内容方法方法结果显示结果显示分子水平分子水平检测检测第一步第一步目的基因是否插入目的基因是否插入受体细胞染色体的受体细胞染色体的DNA上上DNA分子杂交

12、分子杂交技术技术(DNA和和DNA之间之间)是否成功显是否成功显示出杂交带示出杂交带第二步第二步目的基因是否转录目的基因是否转录出出mRNA核酸分子杂交技核酸分子杂交技术术(DNA和和mRNA之间之间)同上同上第三步第三步目的基因是否翻译目的基因是否翻译出蛋白质出蛋白质蛋白质分子杂交蛋白质分子杂交(抗原抗原抗体之间抗体之间)同上同上个体水平个体水平鉴定鉴定包括抗虫或抗病的接种实验，以确定是否有抗性以及抗性程度；包括抗虫或抗病的接种实验，以确定是否有抗性以及抗性程度；基因工程产品与天然产品进行活性比较，以确定功能是否相同基因工程产品与天然产品进行活性比较，以确定功能是否相同等等第12页/共41页

13、4.基因工程的应用基因工程的应用表现方面表现方面具体内容具体内容植物基因工程植物基因工程抗虫转基因植物抗虫转基因植物抗病转基因植物抗病转基因植物抗逆转基因植物抗逆转基因植物利用转基因改良植物品质利用转基因改良植物品质动物基因工程动物基因工程提高动物生长速度提高动物生长速度用转基因动物生产药物用转基因动物生产药物(如乳腺生物反应器如乳腺生物反应器)用转基因动物作器官移植的供体用转基因动物作器官移植的供体用于改善畜产品的品质用于改善畜产品的品质基因工程药物基因工程药物控制药品合成的相应基因控制药品合成的相应基因基因治疗基因治疗体外基因治疗体外基因治疗体内基因治疗体内基因治疗第13页/共41页5.两

14、种基因治疗途径及其特点两种基因治疗途径及其特点途径途径方法方法特点特点不同点不同点体外基因体外基因治疗治疗从患者体内获得某种、细胞扩从患者体内获得某种、细胞扩增增输入体内输入体内(实例中第一个实例中第一个)操作复杂，但操作复杂，但效果较为可靠效果较为可靠体内基因体内基因治疗治疗直接向患者体内组织中转移基直接向患者体内组织中转移基因因(实例中第二个实例中第二个)方法简便，但方法简便，但效果难以控制效果难以控制相同点相同点都属于基因治疗，都是将正常的外源基因导入靶细胞，以代都属于基因治疗，都是将正常的外源基因导入靶细胞，以代替、修复、纠正缺陷基因。目前两种方法都处于临床实验阶替、修复、纠正缺陷基因

15、。目前两种方法都处于临床实验阶段段第14页/共41页6.基因工程与蛋白质工程的比较基因工程与蛋白质工程的比较项目项目蛋白质工程蛋白质工程基因工程基因工程区区别别过程过程设计预期的设计预期的蛋白质功能蛋白质功能设设计预期的计预期的蛋白质结构蛋白质结构推测推测氨基酸序列氨基酸序列找到对应的找到对应的脱脱氧核苷酸序列氧核苷酸序列合成合成DNA表达出蛋白质表达出蛋白质获取目的基因获取目的基因构建表达载构建表达载体体导入受体细胞导入受体细胞目的基目的基因的检测与鉴定因的检测与鉴定实质实质定向改造或生产人类所需的定向改造或生产人类所需的蛋白质蛋白质定向改造生物的遗传特性，定向改造生物的遗传特性，以获得人类

16、所需的生物类型以获得人类所需的生物类型或生物产品或生物产品结果结果生产自然界生产自然界没有没有的蛋白质的蛋白质生产自然界中生产自然界中已有已有的蛋白质的蛋白质联系联系蛋白质工程是在基因工程的基础上，延伸出来的第二代基因蛋白质工程是在基因工程的基础上，延伸出来的第二代基因工程，因为对现有蛋白质的改造或制造新的蛋白质，必须通工程，因为对现有蛋白质的改造或制造新的蛋白质，必须通过基因修饰或基因合成实现过基因修饰或基因合成实现第15页/共41页基因工程与蛋白质工程的比较基因工程与蛋白质工程的比较基因工程基因工程蛋白质工程蛋白质工程操作环境操作环境生物体外生物体外生物体外生物体外操作核心操作核心基因基因

17、基因基因操作起点操作起点目的基因目的基因预期的蛋白质功能预期的蛋白质功能结果结果人类需要的基因产物人类需要的基因产物自然界不存在的蛋白质自然界不存在的蛋白质第16页/共41页7、对、对DNA连接酶、连接酶、DNA聚合酶等的理解聚合酶等的理解名称名称作用作用参与的生理过程参与的生理过程及应用及应用DNA连接酶连接酶连接两个连接两个DNA片段片段限制性核酸限制性核酸内切酶内切酶切割某种特定的脱氧切割某种特定的脱氧核苷酸序列核苷酸序列基因工程基因工程DNA聚合酶聚合酶在脱氧核苷酸链上添加单个在脱氧核苷酸链上添加单个脱氧核苷酸脱氧核苷酸DNA复制复制RNA聚合酶聚合酶在核糖核苷酸链上添加单个在核糖核苷

18、酸链上添加单个核糖核苷酸核糖核苷酸转录转录解旋酶解旋酶使碱基间氢键断裂形成脱氧使碱基间氢键断裂形成脱氧核苷酸链核苷酸链DNA复制及转录复制及转录逆转录酶逆转录酶以以RNA为模板合成为模板合成DNA逆转录、基因工程逆转录、基因工程第17页/共41页【例例1】 (沈阳质检沈阳质检)转基因植物油是由转基因植物通过压榨或浸出法加转基因植物油是由转基因植物通过压榨或浸出法加 工制得的，因其出油率高而被广泛采用。我国是植物油消费大国，工制得的，因其出油率高而被广泛采用。我国是植物油消费大国， 每年都从国外进口大量的转基因植物油。每年都从国外进口大量的转基因植物油。 (1)在培育转基因油料植物的过程中，基因

19、操作需要的工具酶是在培育转基因油料植物的过程中，基因操作需要的工具酶是 _。在基因表达载体中，目的基因。在基因表达载体中，目的基因 的首端必须含有的首端必须含有_，它是，它是_识别和结合位点。识别和结合位点。 (2)请写出一种将目的基因导入油料植物细胞可以采用的方法：请写出一种将目的基因导入油料植物细胞可以采用的方法： _。若受体细胞为植物体细。若受体细胞为植物体细 胞，可采用胞，可采用_技术获得转基因植物体，该技术所依据技术获得转基因植物体，该技术所依据 的原理是的原理是_。限制性核酸内切酶和DNA连接酶启动子RNA聚合酶农杆菌转化(或基因枪、花粉管通道)法植物组织培养植物细胞的全能性第18

20、页/共41页(3)若要检测若要检测(2)中获得的植物细胞染色体上是否含有目的基因，可采用中获得的植物细胞染色体上是否含有目的基因，可采用_技术。而想要得知上述植物是否真的出油率高，应技术。而想要得知上述植物是否真的出油率高，应如何做？如何做？_。(4)若利用蛋白质工程继续提高油料植物的出油率，其设计流程应从预若利用蛋白质工程继续提高油料植物的出油率，其设计流程应从预期的期的_出发，设计预期的出发，设计预期的_结构，推测出应有结构，推测出应有的的_序列，然后找到相对应的序列，然后找到相对应的_序序列，再用转基因技术改变其现有性状。列，再用转基因技术改变其现有性状。DNA分子杂交将该植物制出的植物

21、油与同等质量的非转基因植物制出的植物油称重将该植物制出的植物油与同等质量的非转基因植物制出的植物油称重比较比较蛋白质功能蛋白质氨基酸脱氧核苷酸第19页/共41页听听课课心心得得审题关键：审题关键：“工具酶工具酶”、“植物细胞植物细胞”、“原理原理”、“染色体染色体上上”、“预期预期”命题来源命题来源：基因工程和蛋白质工程。：基因工程和蛋白质工程。思路分析：思路分析：(1)转基因植物的培育过程中，基因工程的工具酶是转基因植物的培育过程中，基因工程的工具酶是限制制性核酸内切酶的限制制性核酸内切酶的DNA连接酶，目的基因只有含有启动子连接酶，目的基因只有含有启动子，才能被，才能被RNA聚合酶识别并与

22、之结合进行转录。聚合酶识别并与之结合进行转录。(2)接受目的基接受目的基因的受体细胞若因的受体细胞若 植物体细胞，可采用植物组织培养技术获得转植物体细胞，可采用植物组织培养技术获得转基因植物。基因植物。(3)通过对比转基因植物是否普通的非转基因植物的通过对比转基因植物是否普通的非转基因植物的出油率高。出油率高。(4)蛋白质工程设计流程是：预期蛋白质的功能蛋白质工程设计流程是：预期蛋白质的功能设设计预期的蛋白质结构计预期的蛋白质结构推测出应有的氨基酸序列推测出应有的氨基酸序列找到相应的找到相应的脱氧核苷酸序列。脱氧核苷酸序列。第20页/共41页考点考点2细胞工程相关知识整合细胞工程相关知识整合1

23、细胞工程的几个过程流程图比较细胞工程的几个过程流程图比较第21页/共41页 植物体细胞杂交植物体细胞杂交第22页/共41页 植物组织培养植物组织培养第23页/共41页 动物细胞培养动物细胞培养第24页/共41页 动物细胞的融合动物细胞的融合第25页/共41页 单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备第26页/共41页 核移植核移植第27页/共41页2.植物组织培养与动物细胞培养的比较植物组织培养与动物细胞培养的比较植物组织培养植物组织培养动物细胞培养动物细胞培养原理原理细胞的全能性细胞的全能性细胞增殖细胞增殖培养基的物理培养基的物理性质性质固体固体液体液体(合成培养基合成培养基)培养基的成分培养基的成

24、分水、无机盐、维生素、蔗水、无机盐、维生素、蔗糖、氨基酸、琼脂等糖、氨基酸、琼脂等葡萄糖、氨基酸、无机盐、葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、维生素、动物血清动物血清等等结果结果新的植株或组织新的植株或组织新的细胞系或细胞株新的细胞系或细胞株应用应用微型繁殖微型繁殖作物脱毒作物脱毒生产人工种子生产人工种子单倍体育种单倍体育种突变体的利用突变体的利用细胞产物的工厂化生产细胞产物的工厂化生产蛋白质生物制品的生产蛋白质生物制品的生产皮肤移植材料的培育皮肤移植材料的培育检测有毒物质检测有毒物质生理、病理、药理学研生理、病理、药理学研究究条件条件均需均需无毒环境无菌操作无毒环境无菌操作，适宜的营养、温度、，

25、适宜的营养、温度、pH、O2等等第28页/共41页3.植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较细胞工程细胞工程植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合实质内容实质内容改变遗传物质、产生新的性改变遗传物质、产生新的性状，获得细胞产品状，获得细胞产品(使后代使后代具有双亲的特性具有双亲的特性)理论基础理论基础植物细胞具有全能性植物细胞具有全能性细胞增殖细胞增殖诱导手段诱导手段物理法：离心、振动、电激物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇化学法：聚乙二醇物理法：离心、振动、电激物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇化学法：聚乙二醇生物法：生物法：灭活的病毒

26、灭活的病毒诱导过程诱导过程去细胞壁去细胞壁(纤维素酶、果胶酶纤维素酶、果胶酶)原生质体融合原生质体融合(获得杂种原生质体获得杂种原生质体)植物细胞培养植物细胞培养(获得植株获得植株)获得分离的单个动物细胞获得分离的单个动物细胞(胰蛋白酶处理胰蛋白酶处理)诱导融合诱导融合动物细胞培养动物细胞培养(细胞产品细胞产品)应用应用白菜白菜甘蓝等杂种植物甘蓝等杂种植物单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备(杂交瘤细杂交瘤细胞胞)第29页/共41页【例例1 1】 野生马铃薯品种的植株具有较强的抗病、抗虫、抗盐碱、抗野生马铃薯品种的植株具有较强的抗病、抗虫、抗盐碱、抗 寒能力，但块茎不能食用。俄、德、芬兰专家共同做

27、实验研究，寒能力，但块茎不能食用。俄、德、芬兰专家共同做实验研究， 用野生马铃薯与马铃薯的体细胞进行杂交，培育出了生活能力强用野生马铃薯与马铃薯的体细胞进行杂交，培育出了生活能力强 的杂交系马铃薯。据图分析回答问题：的杂交系马铃薯。据图分析回答问题：第30页/共41页(1)过程植物细胞原生质体的分离需经过酶解，其中过程植物细胞原生质体的分离需经过酶解，其中“酶解酶解”所用的酶所用的酶应该包括应该包括_。(2)过程可用聚乙二醇过程可用聚乙二醇(PEG)，其目的是，其目的是_。(3)请用文字和箭头表示出技术过程的实验流程：请用文字和箭头表示出技术过程的实验流程：_。由此过程可以看出植物细胞有形成完

28、整个体的可能性，这是由此过程可以看出植物细胞有形成完整个体的可能性，这是_的表现。的表现。(4)在培养基上培养一段时间后，原生质体会再生出细胞壁。可以取样，在培养基上培养一段时间后，原生质体会再生出细胞壁。可以取样，通过通过_实验来鉴别细胞壁是否已经再生。实验来鉴别细胞壁是否已经再生。(5)请说明运用植物体细胞杂交法的最大好处：请说明运用植物体细胞杂交法的最大好处：_。纤维素酶、果胶酶诱导原生质体融合融合细胞融合细胞 愈伤组织愈伤组织 幼苗幼苗植物细胞具有全能性植物细胞的质壁分离与复原可以克服不同生物远缘杂交不亲和的障碍第31页/共41页听课心得听课心得审题关键：审题关键：“酶酶”、“聚乙二醇

29、聚乙二醇”、“文字和箭头文字和箭头”、“细胞细胞壁壁”命题来源命题来源：植物体细胞杂交。：植物体细胞杂交。思路分析：思路分析：(1)(1)若去掉细胞壁而获得原生质体，需用纤维素酶若去掉细胞壁而获得原生质体，需用纤维素酶和果胶酶来处理。和果胶酶来处理。(2)(2)用聚乙二醇处理原生质体，可以诱导原用聚乙二醇处理原生质体，可以诱导原生质体融合。生质体融合。(3)(3)分别为脱分化和再分化过程，能够形成分别为脱分化和再分化过程，能够形成一个完整植株，体现出植物细胞的全能性。一个完整植株，体现出植物细胞的全能性。(4)(4)可以通过质壁可以通过质壁分离与复原实验来鉴别原生质体是否再生出细胞壁。分离与复

30、原实验来鉴别原生质体是否再生出细胞壁。(5)(5)植物植物体细胞杂交的最大好处在于可以克服远缘杂交不亲和的障碍。体细胞杂交的最大好处在于可以克服远缘杂交不亲和的障碍。第32页/共41页【例例2】 (潍坊质检潍坊质检)人人CD20单克隆抗体是治疗一些恶性肿瘤的特效药单克隆抗体是治疗一些恶性肿瘤的特效药 物，目前主要是通过培养哺乳动物细胞的方式生产。我国科学家已经物，目前主要是通过培养哺乳动物细胞的方式生产。我国科学家已经 培育出世界上第一头转入了培育出世界上第一头转入了CD20抗体基因的转基因牛，可以从它产抗体基因的转基因牛，可以从它产 的牛奶中直接提取的牛奶中直接提取CD20抗体。这项技术成熟

31、后，有望使这一特效药抗体。这项技术成熟后，有望使这一特效药 的生产成本降至现在的的生产成本降至现在的1/10。请回答：。请回答： (1)单克隆抗体的制备过程需先将单克隆抗体的制备过程需先将_和和 _融合，这一过程的诱导方法与植物体细胞杂交不同的融合，这一过程的诱导方法与植物体细胞杂交不同的 是是_。 (2)动物细胞培养需要在含动物细胞培养需要在含_混合气体的培养箱中进混合气体的培养箱中进 行，培养液中通常需加入行，培养液中通常需加入_等一些天然成分。等一些天然成分。 (3)转基因技术的核心是转基因技术的核心是_。该过程用到的工。该过程用到的工 具酶有具酶有 _和和_。经过免疫的B淋巴细胞骨髓瘤

32、细胞用灭活的病毒诱导95%空气加5%CO2血清、血浆基因表达载体的构建限制性核酸内切酶(限制酶)DNA连接酶第33页/共41页听课心得听课心得审题关键：审题关键：“单克隆抗体单克隆抗体”、“植物体细胞杂交植物体细胞杂交”、“混合气体混合气体”、“天然成分天然成分”、“核心核心”、“工具酶工具酶”命题来源命题来源：单克隆抗体、植物体细胞杂交、动物细胞培养、转基因。：单克隆抗体、植物体细胞杂交、动物细胞培养、转基因。思路分析：思路分析：单克隆抗体的制备首先是将经过免疫的单克隆抗体的制备首先是将经过免疫的B B淋巴细胞与骨髓瘤淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，其诱导方法与植物体细胞杂交不同的是用灭活的病毒诱

33、导细胞融合，其诱导方法与植物体细胞杂交不同的是用灭活的病毒诱导。动物体细胞培养需要满足以下条件：无菌无毒的环境、营养、温度。动物体细胞培养需要满足以下条件：无菌无毒的环境、营养、温度和和pHpH以及气体环境。气体环境必须是含以及气体环境。气体环境必须是含95%95%的空气加的空气加5%5%的的COCO2 2，O O2 2是细胞是细胞代谢所必需的，代谢所必需的，COCO2 2是维持培养液的是维持培养液的pHpH。在使用合成培养基培养动物细。在使用合成培养基培养动物细胞时，由于人们对一些细胞所需的营养物质还没有完全搞清楚，因此胞时，由于人们对一些细胞所需的营养物质还没有完全搞清楚，因此通常需加入血

34、清、血浆等一些天然成分。转基因技术的核心是基因表通常需加入血清、血浆等一些天然成分。转基因技术的核心是基因表达载体的构建，用到的工具酶是限制性核酸内切酶和达载体的构建，用到的工具酶是限制性核酸内切酶和DNADNA连接酶。连接酶。第34页/共41页题组题组1基因工程基因工程1(2010全国全国，5)下列叙述符合基因工程概念的是下列叙述符合基因工程概念的是 () AB淋巴细胞与肿瘤细胞融合，杂交瘤细胞中含有淋巴细胞与肿瘤细胞融合，杂交瘤细胞中含有B淋巴细胞中的抗淋巴细胞中的抗 体基因体基因 B将人的干扰素基因重组到质粒后导入大肠杆菌，获得能产生人干将人的干扰素基因重组到质粒后导入大肠杆菌，获得能产生人干 扰素的菌株扰素的菌株 C用紫外线照射青霉菌，使其用紫外线照射青霉菌，使其DNA发生改变，通过筛选获得青霉素发生改变，通过筛选获得青霉素 高产菌株高产菌株 D自然界中天然存在的噬菌体自行感染细菌后其自然界中天然存在的噬菌体自行感染细菌后其DNA整合到细菌整合到细菌 DNA上上第35页/共41页解析解析：限制性核酸内切酶用于提取目的基因和切割载体，烟草花叶病毒限制性核酸内切酶用于提取目的基因和切割载体，烟草花叶病毒的遗传物质是的遗传物质是RNA，不能用限制性核酸内切酶切割，不能用限制性核酸内切酶切割，A项错误；项错误；DNA连连