申文娟生药1121五项目五ppt课件

1、项目五项目五 酶促转化产物酶促转化产物L-L-丝氨酸的分析鉴定丝氨酸的分析鉴定任务任务1 1 酶促转化产物酶促转化产物L-L-丝氨酸的分析鉴定丝氨酸的分析鉴定 方案的制定方案的制定 任务任务2 2 纸层析法分析鉴定纸层析法分析鉴定L-L-丝氨酸丝氨酸班级：生药班级：生药11211121姓名：申文娟姓名：申文娟学号：学号：20194232152019423215组别：第五组组别：第五组组员：申文娟组员：申文娟 俞靖俞靖 贡静贡静 顾海彬顾海彬 杨恪鉴杨恪鉴一、简介一、简介蛋白质的组成单位蛋白质的组成单位- -氨基酸氨基酸氨基酸结构通式氨基酸结构通式 氨基酸氨基酸Amino acidAmino a

2、cid赋予蛋白质特定的分子赋予蛋白质特定的分子结构结构 形状，使他的分子具有生化形状，使他的分子具有生化活性。蛋白质是生物体内重要的活性分子，活性。蛋白质是生物体内重要的活性分子，包括催化新陈代谢的酵素和酶。包括催化新陈代谢的酵素和酶。 按按R R基的极性不同来分类基的极性不同来分类中文名称：中文名称： 丝氨酸丝氨酸 英文名称：英文名称： serine;Ser serine;Ser 定义：学名：定义：学名：2-2-氨基氨基-3-3羟基丙酸。一种脂肪羟基丙酸。一种脂肪族极性族极性氨基酸。氨基酸。L-L-丝氨酸是组成蛋白质的丝氨酸是组成蛋白质的常见常见2020种氨基酸中的一种，是哺乳动物的非种氨基

3、酸中的一种，是哺乳动物的非必需氨基酸，也是生酮氨基酸。在自然界中必需氨基酸，也是生酮氨基酸。在自然界中也有也有D-D-丝氨酸，如丝原蛋白中。在一些抗生丝氨酸，如丝原蛋白中。在一些抗生素中也有素中也有D-D-丝氨酸。符号：丝氨酸。符号：S S。丝氨酸是一种非必需氨基酸，它在脂肪和脂丝氨酸是一种非必需氨基酸，它在脂肪和脂肪酸的新陈代谢及肌肉的生长中发挥着作用肪酸的新陈代谢及肌肉的生长中发挥着作用，因为它有助于免疫血球素和抗体的产生，因为它有助于免疫血球素和抗体的产生，维持健康的免疫系统也需要丝氨酸。丝氨酸维持健康的免疫系统也需要丝氨酸。丝氨酸在细胞膜的制造加工、肌肉组织和包围神经在细胞膜的制造加工

4、、肌肉组织和包围神经细胞的鞘的合成中都发挥着作用。细胞的鞘的合成中都发挥着作用。氨基酸、多肽与蛋白质氨基酸、多肽与蛋白质一、目的：一、目的： 学习并掌握纸层析法分离鉴定氨基学习并掌握纸层析法分离鉴定氨基酸的原理和方法。酸的原理和方法。二、原理二、原理 纸层析法是用滤纸作为惰性支持物纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，其中滤纸纤维上吸附的的分配层析法，其中滤纸纤维上吸附的水是固定相，展层用的有机溶剂是流动水是固定相，展层用的有机溶剂是流动相。在层析时，相。在层析时，将样品点在距滤纸一端约将样品点在距滤纸一端约2 23cm3cm的某一处，的某一处，该点称为原点；然后在密闭容器中层析溶剂该点

5、称为原点；然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基酸在两相中不断分配。由于分配系数酸在两相中不断分配。由于分配系数KdKd不同，结果它们分布在滤纸的不同位置上。不同，结果它们分布在滤纸的不同位置上。物质被分离后在纸层析图谱上的位置，可用物质被分离后在纸层析图谱上的位置，可用比移值比移值RfRf来表示。来表示。所谓所谓RfRf，是指在纸层析中，从原点至氨基酸，是指在纸层析中，从原点至氨基酸停留点又称为层析点中心的距离停留点又称为层析点中心的距离X X与与原点至溶剂前沿的距离原点至溶剂前沿的距离Y Y的比值。如图的比值。如图Rf 原点到溶

6、剂前沿的距离离距的心中点析层到点原 在一定条件下如温度、展层剂的组成、在一定条件下如温度、展层剂的组成、层析纸质量等不变），某种物质的层析纸质量等不变），某种物质的Rf 值是常值是常数，因此可作为定性依据。数，因此可作为定性依据。 由于氨基酸无色，可利用茚三酮反应使由于氨基酸无色，可利用茚三酮反应使氨基酸层析斑点显色，从而作定性分析。本氨基酸层析斑点显色，从而作定性分析。本实验利用纸层析法分离氨基酸。实验利用纸层析法分离氨基酸。 三、试剂和器材：三、试剂和器材：1. 1. 试剂：试剂：1. 1. 展层剂和平衡液展层剂和平衡液 正丁醇正丁醇: :冰醋酸冰醋酸: :水水=4:1:5=4:1:5，充

7、分摇匀，用分，充分摇匀，用分液漏斗取上层液作展层剂；下层液作平衡液液漏斗取上层液作展层剂；下层液作平衡液( (弃弃去去) )。2. 2. 样品液样品液 用水配成每用水配成每mlml含有丝氨酸、亮氨酸、脯氨酸含有丝氨酸、亮氨酸、脯氨酸各各4mg/ml4mg/ml的氨基酸溶液，以及上述四种氨基酸的的氨基酸溶液，以及上述四种氨基酸的混合液混合液( (各各4mg/ml)4mg/ml)。3. 3. 茚三酮茚三酮 按展层剂按展层剂0.25%0.25%的比例将茚三酮加入展层剂的比例将茚三酮加入展层剂中，使其溶解。中，使其溶解。 实验器材 1. 1.层析缸层析缸 2. 2. 点样毛细管点样毛细管 3. 3.

8、小烧杯小烧杯 4. 4. 培养皿培养皿 5. 5. 量筒量筒 6. 6. 喷雾器喷雾器 7. 7. 吹风机或烘箱）吹风机或烘箱） 8. 8. 层析滤纸层析滤纸 9. 9. 直尺及铅笔直尺及铅笔四、实验步骤四、实验步骤1.1.准备滤纸：取宽约准备滤纸：取宽约16cm16cm、高约、高约16cm16cm的层析的层析滤纸一张。在纸的下端距边缘滤纸一张。在纸的下端距边缘2cm2cm处用铅笔划处用铅笔划一直线一直线A A，在直线上做，在直线上做5 5个记号，记号之间间个记号，记号之间间隔隔2cm2cm，标出，标出5 5个点，这就是原点的位置。另个点，这就是原点的位置。另在距左边缘在距左边缘1cm1cm处

9、画一条平行于左边缘的直线处画一条平行于左边缘的直线B B，在，在B B线上以线上以A A、B B两线的交点为原点标明刻两线的交点为原点标明刻度以厘米为单位）。度以厘米为单位）。2.2.点样：用毛细管将各氨基酸样品点在点样：用毛细管将各氨基酸样品点在5 5个原点个原点上，用量上，用量101020l20l，每点在纸上扩散的直径，每点在纸上扩散的直径，最大不超过，最大不超过3 mm3 mm，边点样边用电吹风吹干，边点样边用电吹风吹干，越小越好。干后再点一次。，越小越好。干后再点一次。3.3.层析：将平衡好的滤纸，放入层析缸底部接层析：将平衡好的滤纸，放入层析缸底部接触展层剂液面，展层剂不可浸没样点，

10、展层触展层剂液面，展层剂不可浸没样点，展层剂到达滤纸顶部边缘约剂到达滤纸顶部边缘约0.5cm0.5cm处停止层析层处停止层析层析时间析时间2h2h左右）。然后取出层析滤纸，标好左右）。然后取出层析滤纸，标好前沿，放入烘箱中前沿，放入烘箱中4545烘干。烘干。4 4显色显色 用喷雾器均匀喷上用喷雾器均匀喷上0 0。1 1茚三酮正丁茚三酮正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤醇溶液，然后置烘箱中烘烤5 5分钟分钟(100)(100)或或用热风吹干即可，滤纸上即显出紫红色或黄用热风吹干即可，滤纸上即显出紫红色或黄色的氨基酸斑点。色的氨基酸斑点。5 5计算各种氨基酸的计算各种氨基酸的RfRf值。值。五、本卷须知

11、五、本卷须知u在操作过程中，手不要摸滤纸。在操作过程中，手不要摸滤纸。u点样直径不超过点样直径不超过3mm 3mm 。u点样的一端朝下点样的一端朝下, , 扩展剂的液面需低于点扩展剂的液面需低于点样线样线1cm1cm。u即时取出滤纸即时取出滤纸, , 以免出现氨基酸层析跑到以免出现氨基酸层析跑到滤纸的外面不能检测。滤纸的外面不能检测。吸样后的毛细管要垂直落在层析纸点样处，样点大小要基本一致；样点不要浸在展开剂中；喷显色剂时，使层析纸湿润即可，切勿流淌，并迅速吹干；在层析纸制作、点样、显色、吹干及 值测定等操作过程中，手只能拿在最上端，以防被手沾污。六、思考题六、思考题层析纸上的样品斑点浸在展开剂中是否层析纸上的样品斑点浸在展开剂中是否可以