系列实验Ⅰ谷氨酸发酵学习教案

1、会计学1系列实验系列实验(shyn)谷氨酸发酵谷氨酸发酵第一页，共56页。第2页/共56页第二页，共56页。CO2谷谷氨氨酸酸的的生生物物(shngw)合合成成途途径径第3页/共56页第三页，共56页。第4页/共56页第四页，共56页。培养基培养基 培养基可直接用营养琼脂，称取一定量的营养琼脂，培养基可直接用营养琼脂，称取一定量的营养琼脂， 加热溶解，分加热溶解，分装到试管中，不能超过试管体积的装到试管中，不能超过试管体积的1/3。灭菌灭菌 将装有琼脂培养基的试管高压灭菌锅里面将装有琼脂培养基的试管高压灭菌锅里面 121，高压灭菌，高压灭菌20分钟。分钟。接种接种 试管倾斜放置等斜面凝固试管倾

2、斜放置等斜面凝固 超净台超净台 开启三十分钟后，通风开启三十分钟后，通风5分钟后方可进行操作。分钟后方可进行操作。 从冷冻从冷冻(lngdng)的菌体中用接种针挑取一定的菌种的菌体中用接种针挑取一定的菌种 ，Z 字型接种字型接种到试管斜面上。到试管斜面上。第5页/共56页第五页，共56页。注意事项注意事项 菌种的污染，势必导致发酵的失败，轻者产酸下降，严重的不积累产菌种的污染，势必导致发酵的失败，轻者产酸下降，严重的不积累产物，因此，在菌种制备的整个物，因此，在菌种制备的整个(zhngg)(zhngg)过程中，都要树立起牢固的无菌过程中，都要树立起牢固的无菌概念，工作力求细致、到位概念，工作力

3、求细致、到位培养培养将试管将试管(shgun)放入放入28度度 恒温培养箱中培养，每天注意观察恒温培养箱中培养，每天注意观察记录。记录。扩大培养扩大培养 斜面生长大约三天左右。菌种开始长出，然后接种到斜面生长大约三天左右。菌种开始长出，然后接种到250ml锥锥形瓶液体培养基中形瓶液体培养基中 ，28 150转转 摇床培养。摇床培养。第6页/共56页第六页，共56页。谷氨酸发酵是有氧发酵，发酵罐由空气管道、蒸汽谷氨酸发酵是有氧发酵，发酵罐由空气管道、蒸汽(zhn q)管道、水管道和排污管道等组成。管道、水管道和排污管道等组成。第7页/共56页第七页，共56页。第8页/共56页第八页，共56页。控

4、制压力控制压力0.110.12MPa，保压，保压30分钟；分钟；空消结束空消结束(jish)后，打开空气，保压后，打开空气，保压0.030.05MPa之间。之间。一般地，空气一般地，空气(kngq)管路可以与发酵罐一起灭菌。管路可以与发酵罐一起灭菌。第9页/共56页第九页，共56页。空消后待罐温度降低空消后待罐温度降低(jingd)，手摸玻璃视，手摸玻璃视窗不烫手，才可倒入培养基。否则冷热刺窗不烫手，才可倒入培养基。否则冷热刺激，玻璃会破裂。激，玻璃会破裂。第10页/共56页第十页，共56页。（4）温度降至）温度降至40度左右时，加初尿，度左右时，加初尿，添加量为添加量为0.61%第11页/共

5、56页第十一页，共56页。缓慢降罐压至缓慢降罐压至0.01MPa火焰封口火焰封口(fng ku)法接种法接种第12页/共56页第十二页，共56页。第13页/共56页第十三页，共56页。谷氨酸的等电回收谷氨酸的等电回收(hushu)发酵罐的清洗发酵罐的清洗第14页/共56页第十四页，共56页。第15页/共56页第十五页，共56页。第16页/共56页第十六页，共56页。第17页/共56页第十七页，共56页。第18页/共56页第十八页，共56页。第19页/共56页第十九页，共56页。第20页/共56页第二十页，共56页。第21页/共56页第二十一页，共56页。第22页/共56页第二十二页，共56页。

6、第23页/共56页第二十三页，共56页。第24页/共56页第二十四页，共56页。第25页/共56页第二十五页，共56页。第26页/共56页第二十六页，共56页。第27页/共56页第二十七页，共56页。5.5.麦汁预冷却和冷却麦汁预冷却和冷却下开始析出的物质）的过下开始析出的物质）的过程。程。第28页/共56页第二十八页，共56页。第29页/共56页第二十九页，共56页。第30页/共56页第三十页，共56页。第31页/共56页第三十一页，共56页。5.将培养基液分装入将培养基液分装入 若干个试管中，若干个试管中，注意不能超过试管体积的三分之一，注意不能超过试管体积的三分之一，然后用绵花塞住。放入

7、高压灭菌锅然后用绵花塞住。放入高压灭菌锅121、20分钟灭菌处理。分钟灭菌处理。第32页/共56页第三十二页，共56页。接种接种 将灭菌好的试管培养基倾斜放置，等斜面凝固。将灭菌好的试管培养基倾斜放置，等斜面凝固。 超净台超净台 开启三十分钟后，通风开启三十分钟后，通风5分钟后方分钟后方(hufng)可进行操作。可进行操作。 从冷冻的菌体中用接种针取一定的菌种从冷冻的菌体中用接种针取一定的菌种 Z 字型涂到试管斜面上。字型涂到试管斜面上。培养培养 将试管将试管 放入放入28度度 恒温培养箱中培养，每天注意观察记录。恒温培养箱中培养，每天注意观察记录。扩大培养扩大培养 斜面生长大约三天左右。菌种

8、开始长出，然后接种到盛有麦芽汁液体培养基斜面生长大约三天左右。菌种开始长出，然后接种到盛有麦芽汁液体培养基的锥形瓶中，的锥形瓶中， 28度左右培养。度左右培养。1. 啤酒酵母扩大啤酒酵母扩大(kud)培养培养第33页/共56页第三十三页，共56页。(lngqu)器进行冷却器进行冷却(lngqu)第34页/共56页第三十四页，共56页。5. 5. 发酵发酵(f jio)(f jio)将冷却将冷却(lngqu)的麦芽汁输入到发酵罐（提前打开预冷的麦芽汁输入到发酵罐（提前打开预冷到到10 ）中。）中。接种：火焰封口法接种：火焰封口法前发酵前发酵后发酵后发酵每天注意观察温度、压力等每天注意观察温度、压

9、力等注意要控制压力小于注意要控制压力小于0.1（0.05MPa），否则要排气，排气动作要缓。），否则要排气，排气动作要缓。第35页/共56页第三十五页，共56页。第36页/共56页第三十六页，共56页。第37页/共56页第三十七页，共56页。第38页/共56页第三十八页，共56页。第39页/共56页第三十九页，共56页。第40页/共56页第四十页，共56页。第41页/共56页第四十一页，共56页。第42页/共56页第四十二页，共56页。第43页/共56页第四十三页，共56页。第44页/共56页第四十四页，共56页。微生物，培养中要注意保持良好微生物，培养中要注意保持良好的通气。的通气。第45页

10、/共56页第四十五页，共56页。第46页/共56页第四十六页，共56页。第47页/共56页第四十七页，共56页。第48页/共56页第四十八页，共56页。接种接种1、超净台、超净台 开启三十分钟后，通风开启三十分钟后，通风5分钟后方可进行操作。分钟后方可进行操作。2、在超净台下，选取菌种，取黄豆大的一小块放到无菌水中、在超净台下，选取菌种，取黄豆大的一小块放到无菌水中(冷却冷却(lngqu)到到60)。3、在、在60的水浴锅中水浴的水浴锅中水浴30分钟分钟 （杀死其它菌种，与其它菌相比红曲能耐高温）。（杀死其它菌种，与其它菌相比红曲能耐高温）。4、待装有培养基的锥形瓶冷却、待装有培养基的锥形瓶冷

11、却(lngqu)到到70左右时，用移液抢吸取左右时，用移液抢吸取1到到3ml（贴上标签）（贴上标签） 溶有菌种的菌液溶有菌种的菌液 注入到注入到 锥形瓶中，然后倒入培养皿中，锥形瓶中，然后倒入培养皿中，20ml 左右。左右。5、等到培养基凝固然后将培养皿倒置培养。、等到培养基凝固然后将培养皿倒置培养。培养培养将培养皿倒置将培养皿倒置 放入放入30 恒温培养箱中培养。恒温培养箱中培养。 每天注意观察记录，及时取出染菌培养皿。每天注意观察记录，及时取出染菌培养皿。第49页/共56页第四十九页，共56页。蒸饭不能熟透。蒸饭不能熟透。第50页/共56页第五十页，共56页。时从中心取出的饭粒有白色斑点，时从中心取出的饭粒有白色斑点，伴有微微伴有微微(wiwi)清香气，此时即清香气，此时即可进行发酵。可进行发酵。第51页/共56页第五十一页，共56页。第52