微生物-志贺氏菌

1、 志贺氏菌检验志贺氏菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）闽北职业技术学院食品与生物工程系（一）形态与染色（一）形态与染色 革兰氏阴性短杆菌、无荚膜，无芽胞，无鞭毛，有革兰氏阴性短杆菌、无荚膜，无芽胞，无鞭毛，有菌毛。菌毛。 23um0.50.7um一、生物学特性一、生物学特性 志贺氏菌检验志贺氏菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）闽北职业技术学院食品与生物工程系（二）培养特性（二）培养特性1、需氧或兼氧性厌氧，最适温度、需氧或兼氧性厌氧，最适温度37，PH7.27.42、在普通琼脂和、在普通琼脂和SS平板上，能形成圆形、微凸、光平板上

2、，能形成圆形、微凸、光滑湿润、无色半透明、边缘整齐、在中等大小的菌落滑湿润、无色半透明、边缘整齐、在中等大小的菌落3、宋氏志贺氏菌菌落较大，较不透明，粗糙而扁平，、宋氏志贺氏菌菌落较大，较不透明，粗糙而扁平，在在SS平板上可迟发酵乳糖，菌落呈玫瑰红色。平板上可迟发酵乳糖，菌落呈玫瑰红色。4、在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。、在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。 志贺氏菌检验志贺氏菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）闽北职业技术学院食品与生物工程系（三）生化反应（三）生化反应1、发酵葡萄糖，产酸不产气，除宋氏志贺氏菌外，均、发酵葡萄糖，产酸不产气，除宋氏志贺氏菌外，均不

3、发酵乳糖。不发酵乳糖。2、不发酵侧金盏花醇、肌醇、水杨苷。、不发酵侧金盏花醇、肌醇、水杨苷。3、不产生、不产生H2S，不分解尿素，不分解尿素，V-P试验阴性，不能利用试验阴性，不能利用柠檬酸盐。柠檬酸盐。4、甲基红阳性。、甲基红阳性。 志贺氏菌检验志贺氏菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）闽北职业技术学院食品与生物工程系二、志贺氏菌的致病性与食物中毒二、志贺氏菌的致病性与食物中毒（一）传染源（一）传染源食物、病人、粪便、苍蝇等食物、病人、粪便、苍蝇等（二）志贺氏菌的致病性（二）志贺氏菌的致病性致病因素：致病因素：侵袭力、菌体内毒素、外毒素。侵袭力、菌体内毒素、外毒

4、素。临床症状：临床症状： A、急性细菌性痢疾：、急性细菌性痢疾： 急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢。急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢。 B、慢性细菌性痢疾：、慢性细菌性痢疾： 慢性迁延型、慢性隐伏型、慢性急性发作型。慢性迁延型、慢性隐伏型、慢性急性发作型。 志贺氏菌检验志贺氏菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）闽北职业技术学院食品与生物工程系GB/T4789.5-2003中志贺氏菌检验程序中志贺氏菌检验程序三、志贺氏菌的检验三、志贺氏菌的检验 志贺氏菌检验志贺氏菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）闽北职业技术学院食品与生物工程

5、系（一）实验内容（一）实验内容样品处理样品处理选择性增菌选择性增菌选择性平板分离选择性平板分离生化学生化学试验试验结果报告结果报告第一天第一天 样品处理和增菌培养样品处理和增菌培养上午上午 准备并灭菌的器材准备并灭菌的器材下午下午规格名称规格名称数量数量1、样品处理、样品处理 无菌操作称取检样无菌操作称取检样25g，加入装有，加入装有225mLGN增菌液的增菌液的500mL广口瓶内，广口瓶内，固体食品用均质器以固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎打碎1min。2、增菌培养、增菌培养放于放于36培养培养68h。培养时间视细菌生长情况而定，当培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现

6、轻微混浊时即应中止培培养液出现轻微混浊时即应中止培养。养。500ml广口瓶广口瓶1个个18180mm试管试管6支支13100mm试管试管13支支10ml移液管移液管1支支直径为直径为90mm平皿平皿6套套250ml量筒量筒1支支不锈钢汤匙不锈钢汤匙1把把 ，玻璃珠，玻璃珠，杜氏小管杜氏小管 志贺氏菌检验志贺氏菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）闽北职业技术学院食品与生物工程系第二天第二天 接种选择性平板进行分离培养接种选择性平板进行分离培养（一）接种选择性平板（一）接种选择性平板 取增菌液取增菌液1环，划线接种于环，划线接种于HE琼脂平板或琼脂平板或SS琼脂平琼脂

7、平板板1个；另取个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板和环划线接种于麦康凯琼脂平板和EMB（伊红美蓝）琼脂平板各（伊红美蓝）琼脂平板各1个。个。（二）培养（二）培养 放于放于36培养培养1824h。结果：志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发结果：志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发 酵乳糖的菌落。酵乳糖的菌落。 志贺氏菌检验志贺氏菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）闽北职业技术学院食品与生物工程系HE平板原理及反应平板原理及反应 发酵乳糖的肠杆菌发酵乳糖的肠杆菌 不发酵乳糖的某种肠道菌，而且产生不发酵乳糖的某种肠道菌，而且产生硫化氢，可能是沙门氏菌硫化氢，可能是

8、沙门氏菌 不发酵乳糖，菌落呈蓝绿色或蓝色不发酵乳糖，菌落呈蓝绿色或蓝色可能就是志贺氏菌可能就是志贺氏菌 志贺氏菌检验志贺氏菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）闽北职业技术学院食品与生物工程系SS平板原理及反应平板原理及反应SS Agar (Salmonella Shigella Agar)大肠杆菌或者别的发酵大肠杆菌或者别的发酵乳糖的肠杆菌。乳糖的肠杆菌。 是沙门氏菌。有黑色中心。是沙门氏菌。有黑色中心。如果没有黑色中心，就很可如果没有黑色中心，就很可能是志贺氏菌了。能是志贺氏菌了。 志贺氏菌检验志贺氏菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部

9、分）闽北职业技术学院食品与生物工程系麦康凯琼脂平板麦康凯琼脂平板 菌落为粉红色，半透明的，菌落为粉红色，半透明的，可能为志贺氏菌。可能为志贺氏菌。 志贺氏菌检验志贺氏菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）闽北职业技术学院食品与生物工程系EMB平板照片及原理平板照片及原理 菌落为无色半透明状，菌落为无色半透明状，可能为志贺氏菌。可能为志贺氏菌。 大肠杆菌大肠杆菌 志贺氏菌检验志贺氏菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）闽北职业技术学院食品与生物工程系第三天第三天 初步生化试验初步生化试验（一）接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体培养基（一）接种三糖

10、铁琼脂和葡萄糖半固体培养基 从HE或SS、麦康凯或、麦康凯或EMB琼脂平板、挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。一般应多挑几个菌落，以防遗漏。经36培养1824h，分别观察结果。（二）培养（二）培养 放于36培养1824h。 结果结果：乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福氏志贺氏菌6型可产生少量气体)，无动力。 志贺氏菌检验志贺氏菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）闽北职业技术学院食品与生物工程系志贺氏菌在志贺氏菌在TSI生长的结果（现象）：生长的结果（现象）： （1）斜面产碱仍为红色或粉红色；）斜面产碱仍为红色或粉红色； （2）底层产酸不

11、产气，变黄色；）底层产酸不产气，变黄色； （3）不产）不产H2S，不出现黑色。，不出现黑色。志贺氏菌在葡萄糖半固体培养基生长：沿线生长，无志贺氏菌在葡萄糖半固体培养基生长：沿线生长，无动力。动力。 志贺氏菌检验志贺氏菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）闽北职业技术学院食品与生物工程系三糖铁（三糖铁（TSI）琼脂试验的原理）琼脂试验的原理2志贺氏菌志贺氏菌3沙门氏菌沙门氏菌4大肠杆菌大肠杆菌 葡萄糖半固体原理及结果葡萄糖半固体原理及结果1. 铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌2. 志贺氏菌志贺氏菌 3. 枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌 志贺氏菌检验志贺氏菌检验食品安全检验技术（微生

12、物部分）食品安全检验技术（微生物部分）闽北职业技术学院食品与生物工程系在志贺氏菌检验中可弃去的培养物：在志贺氏菌检验中可弃去的培养物：（1）在）在TSI表面上呈现蔓延生长的培养物表面上呈现蔓延生长的培养物（2）在）在1824h发酵乳糖、蔗糖的培养物发酵乳糖、蔗糖的培养物（3）不分解葡萄糖，只在半固体培养基表面生长的）不分解葡萄糖，只在半固体培养基表面生长的培养物。培养物。（4）产气的培养物）产气的培养物（5）有动力的培养物）有动力的培养物（6）产）产H2S的培养物的培养物 志贺氏菌检验志贺氏菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）闽北职业技术学院食品与生物工程系第四天

13、第四天 进一步的生化试验进一步的生化试验 凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福氏志贺福氏志贺氏菌氏菌6型可产生少量气体型可产生少量气体)，无动力的菌株，可做进一步的，无动力的菌株，可做进一步的生化试验和生化分型实验。生化试验和生化分型实验。（一）进一步生化试验（一）进一步生化试验即：葡萄糖铵，西蒙氏柠檬酸盐，赖氨酸和鸟氨酸即：葡萄糖铵，西蒙氏柠檬酸盐，赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶，脱羧酶，pH7.2尿素，尿素，KCN生长，以及水杨苷和七生长，以及水杨苷和七叶苷的分解，叶苷的分解， 36培养。培养。志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。志贺氏菌属的培养物均为阴性结果

14、。 志贺氏菌检验志贺氏菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）闽北职业技术学院食品与生物工程系（二）生化分群试验（二）生化分群试验接种生化培养基接种生化培养基 从三糖铁琼脂上挑取培养物上从三糖铁琼脂上挑取培养物上,拌种到：拌种到：5%乳糖、乳糖、靛基质培养基中，靛基质培养基中，36培养。培养。 志贺氏菌检验志贺氏菌检验食品安全检验技术（微生物部分）食品安全检验技术（微生物部分）闽北职业技术学院食品与生物工程系各项生化试验现象各项生化试验现象葡萄糖铵：阳性者斜面上有正常大小的菌落生长，阴性葡萄糖铵：阳性者斜面上有正常大小的菌落生长，阴性者不生长或生长极微小的菌落。者不生长或生长极微小的菌落。西蒙氏柠檬酸盐：阳性者斜面上菌落生长，培养基由绿西蒙氏柠檬酸盐：阳性者斜面上菌落生长，培养基由绿色转为蓝色，阴性者不生长。色转为蓝色，阴性者不生长。赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶：阳性者为紫色，阴性者为黄色。赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶：阳性者