微生物的培养

1、装订线内不准答题姓名_ 班级_ 学号_编号004 2012-2013学年度第二学期高二年级生物导学案专题二 第一节 微生物的实验室培养【课程目标】了解培养基的基础知识，进行微生物培养和无菌技术的操作。【课题重点】无菌技术的操作【课题难点】无菌技术的操作【自主学习】 一、培养基1概念：人们按照微生物对 的不同需求，配制出供其 的营养基质叫培养基。可分为 培养基和 培养基。 2营养构成：各种培养基一般都含有 、 、 和 ，此外还要满足微生物生长对 、 以及 的要求。 3培养乳酸杆菌时需在培养基中添加 、培养霉菌时需将培养基PH调至 、培养细菌时需将PH调至 、培养厌氧微生物则需提供 条件。思考1从

2、细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？来源: 【补充1】碳源：如CO2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。【补充2】培养基包括哪些营养成分：碳源、氮源、水、无机盐、生长因子等，蔗糖是提供碳源的，也就是提供能源的，琼脂是凝固剂。二、无菌技术：阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题：(一)获得纯净培养物的关键是 ，具体操作如下：来源1对实验操作的 、操作者的 和 进行 。2将用于微生物培养的 、 和 等器具进行 。3为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在 附近进行。4实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与 相接触。(二)消毒和灭菌1消毒是指 。常

3、用的方法有 、 、 消毒法。2灭菌是指 。常用的方法有： 、 、 灭菌。分别适用于那些用具？思考2无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是什么？ 思考3利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么？ 思考4物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是 ；随后关闭排气阀继续加热，气压升至 ，温度为 ，并维持 min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至 时打开锅盖，其目的是防止 三、实验操作-大肠杆菌的纯化培养：本实验所用的培养基是 ，本实验可分成 和 两个阶段进行。（一）、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作

4、步骤是： 、 、 、 、 。思考5在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的称量操作中，动作要迅速，原因是什么？溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么？ 思考6牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供什么等营养物质？ 2 倒平板：待培养基冷却至 左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是：在火焰旁右手拿 ，左手 ；使锥形瓶的瓶口 ；左手将培养皿 ，右手 ，立刻盖上皿盖。待平板冷却凝固后，将平板 。思考7锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？ 思考8倒平板的目的是什么？ 思考9若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？ 思考10配制斜面培养基作用是什么？，试管为什么要加塞棉塞？ （二）、纯化大肠杆菌微

5、生物接种：最常用的是 法和 法。另外还有穿刺接种和斜面接种等。1平板划线法是 的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。其操作步骤是：将 在酒精灯火焰上灼烧直至 。在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。将菌种试管口通过火焰达到 的目的。将冷却的接种环伸入到 。将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。将皿盖打开一条缝隙，把接种环 ，盖上皿盖，不要划破培养基。灼烧接种环，冷却后从 划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将 相连。将平板 培养。思考111、取菌种前灼烧接种环的目的是什么？ 为什么除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环？ 取菌种和划线前都要求接种

6、环冷却后进行，其目的是？ 最后灼烧接种环的目的是？ 在第1次划线后都从上次划线末端开始的目的是？ 2稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将 进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。系列稀释操作：取盛有 mL水的无菌试管6支 ，编号101、102、103、104、105、106。用灼烧冷却的移液管吸取 mL菌液注入编号为101试管中，并吹打3次使之混匀。从101倍液中吸取 mL菌液注入到编号为102试管内吹打均匀，获得102倍液。依此类推。思考12系列稀释操作的注意事项是什么？ 思考13涂布平板操作的步骤是什么？ 结果分析与评价1培养未接种培养基的作用是什么？若有菌落形成，说明什么？ 2在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落