第二讲蛋白质化学

1、会计学1第二讲蛋白质化学第二讲蛋白质化学第1页/共172页2第2页/共172页3第3页/共172页42、蛋白质的元素组成第4页/共172页5二、蛋白质的分类二、蛋白质的分类分类原则：按分子形状、分子组成、溶解度、生物功分类原则：按分子形状、分子组成、溶解度、生物功能能（一）按分子形状：球状蛋白、纤维状蛋白、膜蛋白（一）按分子形状：球状蛋白、纤维状蛋白、膜蛋白（近球状）；（近球状）；（二）按分子组成：简单蛋白和结合蛋白；（二）按分子组成：简单蛋白和结合蛋白；（三）按溶解度：清蛋白、精蛋白、组蛋白、球蛋白（三）按溶解度：清蛋白、精蛋白、组蛋白、球蛋白、谷蛋白、醇溶蛋白、硬蛋白等、谷蛋白、醇溶蛋白、

2、硬蛋白等（四）按功能分：酶、运输蛋白、营养和贮存蛋白、（四）按功能分：酶、运输蛋白、营养和贮存蛋白、激素、受体蛋白、运动蛋白、结构蛋白、防御蛋白。激素、受体蛋白、运动蛋白、结构蛋白、防御蛋白。 第5页/共172页61 酶酶 2结构成分（结缔组织的胶原蛋白、血管和皮肤的弹性蛋白、膜蛋白）结构成分（结缔组织的胶原蛋白、血管和皮肤的弹性蛋白、膜蛋白）第6页/共172页7血红蛋白在血中输送氧血红蛋白在血中输送氧肌红蛋白在肌肉中输送氧肌红蛋白在肌肉中输送氧膜蛋白起运输作用膜蛋白起运输作用o3贮藏（卵清蛋白、种子蛋白贮藏（卵清蛋白、种子蛋白）p4物质运输（血红蛋白、物质运输（血红蛋白、Na+-K+-ATP

3、ase、葡萄糖、葡萄糖运输载体、脂蛋白、电子传递体）运输载体、脂蛋白、电子传递体）第7页/共172页8胰岛素模型胰岛素模型抗体抗体第8页/共172页9第9页/共172页102.蛋白质的水解产物蛋白质的水解产物 蛋白质的水解过程为蛋白质的水解过程为: 蛋白质蛋白质 多肽多肽 二肽二肽 -氨基酸氨基酸分子量：分子量： 500-103 200 100 -氨基酸氨基酸(amino acid)是蛋白质的基本组成单位是蛋白质的基本组成单位第10页/共172页11第11页/共172页12第12页/共172页13第13页/共172页14第14页/共172页15第15页/共172页16德国化学家埃德国化学家埃米

4、尔米尔费舍尔费舍尔任意地将甘油任意地将甘油醛一种形态规醛一种形态规定为，定为，L L甘甘油醛，而将它油醛，而将它的镜像化合物的镜像化合物规定为规定为D D甘甘油醛。油醛。 第16页/共172页17D（+）-型，型，D（ ）-型型X射线测定绝对构型射线测定绝对构型第17页/共172页18甘氨酸 丙氨酸 缬氨酸 亮氨酸 异亮氨酸 丝氨酸脯氨酸苏氨酸第18页/共172页19半胱氨酸半胱氨酸甲硫氨酸甲硫氨酸赖氨酸赖氨酸精氨酸精氨酸第19页/共172页20第20页/共172页21 组氨酸组氨酸 色氨酸色氨酸第21页/共172页22脯氨酸第22页/共172页23非极性氨基酸：甘、丙、缬、亮、异亮、非极性氨

5、基酸：甘、丙、缬、亮、异亮、 苯丙、甲硫、脯、色苯丙、甲硫、脯、色第23页/共172页24第24页/共172页25第25页/共172页26第26页/共172页27第27页/共172页281.两性解离和等电点两性解离和等电点第28页/共172页29第29页/共172页30R-R+R K1=RH+ R+K2=R R-H+ K1 K2 =R+=RH+ R K2K1R-=H+ RH+ K1=R K2H+ H+ 2第30页/共172页31第31页/共172页32甘氨酸电离曲线甘氨酸电离曲线第32页/共172页33第33页/共172页34第34页/共172页35n茚三酮反应茚三酮反应第35页/共172页3

6、6第36页/共172页37第37页/共172页38第38页/共172页39第39页/共172页40第40页/共172页41第41页/共172页42肽键平面的形成肽键平面的形成第42页/共172页43肽键平面示意图肽键平面示意图第43页/共172页44第44页/共172页45第45页/共172页46第46页/共172页47脑啡肽具有强烈的镇痛作用（强于吗啡），不上瘾。脑啡肽具有强烈的镇痛作用（强于吗啡），不上瘾。Met-脑啡肽脑啡肽 Tyr-Gly-Gly-Phe-MetLeu-脑啡肽脑啡肽 Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu（2）神经肽）神经肽（2）神经肽）神经肽（3）催产素和升压素催产素

7、和升压素均为均为9肽，第肽，第3位和第位和第8位氨基酸不同。催产素使子宫和乳腺平滑肌位氨基酸不同。催产素使子宫和乳腺平滑肌收缩，具有催产和促使乳腺排乳作用。升压素促进血管平滑肌收缩收缩，具有催产和促使乳腺排乳作用。升压素促进血管平滑肌收缩，升高血压，升高血压，控制大出血或侵入性手术前预防大出血控制大出血或侵入性手术前预防大出血。第47页/共172页48n一级结构体现生物信息：一级结构体现生物信息：21018 .多样多样n一级结构是空间结构及生物活性的基础一级结构是空间结构及生物活性的基础.特异特异n一级结构的连接键：肽键（主要）、二硫键一级结构的连接键：肽键（主要）、二硫键第48页/共172页

8、49第49页/共172页50第50页/共172页51第51页/共172页52 将蛋白质将蛋白质水解为氨基水解为氨基酸，测组成酸，测组成 确定确定N和和 C端氨基酸端氨基酸确定小肽段确定小肽段氨基酸序列氨基酸序列确定小肽段确定小肽段氨基酸序列氨基酸序列 利用两组不利用两组不同肽段序列确同肽段序列确定完整氨基酸定完整氨基酸序列序列氨基酸序列确定过程氨基酸序列确定过程第52页/共172页53胰蛋白酶作用胰蛋白酶作用胰凝乳蛋白酶作用胰凝乳蛋白酶作用拼出完整氨基酸序列拼出完整氨基酸序列第53页/共172页54胶原蛋白胶原蛋白血红蛋白血红蛋白第54页/共172页55（一）维系蛋白质空间结构的化学键（一）维

9、系蛋白质空间结构的化学键第55页/共172页56（一）维系蛋白质空间结构的化学键（一）维系蛋白质空间结构的化学键H与电负性强的原子与电负性强的原子X共价结合时，共用的电子对强烈地偏向共价结合时，共用的电子对强烈地偏向X的一边，使的一边，使H带有部分正电荷，能再与另一个电负性强的原子带有部分正电荷，能再与另一个电负性强的原子Y结合。结合。 第56页/共172页57蛋白质分子中氢键的形成蛋白质分子中氢键的形成H第57页/共172页58酪苯丙丝缬，亮第58页/共172页59第59页/共172页60第60页/共172页61第61页/共172页62第62页/共172页63第63页/共172页64蛋白质分

10、子中离子键的形成蛋白质分子中离子键的形成第64页/共172页65第65页/共172页66第66页/共172页67第67页/共172页68第68页/共172页69第69页/共172页70第70页/共172页71左手和右手螺旋左手和右手螺旋第71页/共172页72第72页/共172页73第73页/共172页74第74页/共172页75（1）氨基酸）氨基酸R基所带电荷性质基所带电荷性质； 多聚赖氨酸在多聚赖氨酸在pH7pH7时以无规卷曲形式存在，在时以无规卷曲形式存在，在pH12pH12时，时，聚赖氨酸即自发形成聚赖氨酸即自发形成-螺旋结构。螺旋结构。（2）R基的大小基的大小u连续两个或两个以上异亮

11、、缬、亮，大连续两个或两个以上异亮、缬、亮，大R R基，不易形成螺基，不易形成螺旋；（空间位阻）旋；（空间位阻）u连续的几个丝或苏，会破坏连续的几个丝或苏，会破坏-螺旋（羟基争夺氢键）；螺旋（羟基争夺氢键）；u多肽链存在脯氨酸（无酰胺氢），多肽链存在脯氨酸（无酰胺氢），-螺旋即被中断，形螺旋即被中断，形成一个成一个“节结节结”；第75页/共172页76R基对基对-螺旋的影响螺旋的影响(Glu,PI=3.22,Lys,PI=9.74)（）（+）第76页/共172页77第77页/共172页78第78页/共172页79第79页/共172页80 - -折叠的平行式与反平行式排列折叠的平行式与反平行式排

12、列第80页/共172页81第81页/共172页82第82页/共172页83 -转角转角（ -turn）的结构特征的结构特征第83页/共172页84第84页/共172页85核糖核酸酶分子中的二级结构核糖核酸酶分子中的二级结构-螺旋螺旋-折叠折叠-转角转角无规卷曲无规卷曲第85页/共172页86（三）超二级结构（三）超二级结构第86页/共172页87第87页/共172页88第88页/共172页89（四）结构域（四）结构域（domain）第89页/共172页90蚯蚓血红蛋白蚯蚓血红蛋白的结构域四个的结构域四个螺旋。螺旋。免疫球蛋白免疫球蛋白VL的结构域的结构域丙糖异构酶丙糖异构酶第90页/共172页

13、91 结构域通常是几个超二级结构的组结构域通常是几个超二级结构的组合，对于较小的蛋白质分子，结构合，对于较小的蛋白质分子，结构域与三级结构等同，即这些蛋白为域与三级结构等同，即这些蛋白为单结构域。单结构域。 结构域一般由结构域一般由100200个氨基酸残个氨基酸残基组成，但大小范围可达基组成，但大小范围可达 40400 个残基。个残基。 结构域之间常形成裂隙结构域之间常形成裂隙,比较松散，比较松散，往往是蛋白质优先被水解的部位。往往是蛋白质优先被水解的部位。酶的活性中心往往位于两个结构域酶的活性中心往往位于两个结构域的界面上。的界面上。 结构域之间由结构域之间由“铰链区铰链区”相连，使相连，使

14、分子构象有一定的柔性，通过结构分子构象有一定的柔性，通过结构域之间的相对运动，使蛋白质分子域之间的相对运动，使蛋白质分子实现一定的生物功能。实现一定的生物功能。 结构域可作为结构单位相对独立运结构域可作为结构单位相对独立运动，水解出来后仍能维持稳定的结动，水解出来后仍能维持稳定的结构，甚至保留某些生物活性构，甚至保留某些生物活性结构域结构域第91页/共172页92蛋白质三级结构指多肽链在二级结构,超二级结构及结构域的基础上,由于侧链基团间相互作用而进一步盘旋或折叠形成的空间构象。第92页/共172页93第93页/共172页94n亚基亚基(subunit)：寡聚蛋白中的单条独立的多肽链或以共：寡

15、聚蛋白中的单条独立的多肽链或以共价键连接在一起的几条多肽链价键连接在一起的几条多肽链 ，具有独立的一、二、三，具有独立的一、二、三级结构，单独存在时级结构，单独存在时一般无生物学活性一般无生物学活性。亚基之间以非共。亚基之间以非共价键联系，亚基可以相同或不同。价键联系，亚基可以相同或不同。n亚基之间以非共价键联系，包括疏水键（主要）、盐键、亚基之间以非共价键联系，包括疏水键（主要）、盐键、氢键、范德华力氢键、范德华力n亚基可以相同或不同亚基可以相同或不同第94页/共172页95第95页/共172页96第96页/共172页97第97页/共172页98蛋白质亚基蛋白质亚基第98页/共172页99亚

16、基之间不含共价键，亚基亚基之间不含共价键，亚基间次级键的结合比二、三级间次级键的结合比二、三级结构疏松结构疏松 第99页/共172页100一级结构一级结构二级结构二级结构超二级结构超二级结构结构域结构域三级结构三级结构亚基亚基四级结构四级结构第100页/共172页101一级结构一级结构二级结构二级结构超二级结构超二级结构结构域结构域三级结构三级结构亚基亚基四级结构四级结构第101页/共172页102 a a 盐键（离子键盐键（离子键 ） b b氢键氢键 c c疏水相互作用力疏水相互作用力 d d 范德华力范德华力 e e二硫键二硫键 f f 酯键酯键小结：稳定蛋白质结构的化学键小结：稳定蛋白质

17、结构的化学键 维系蛋白质分子的一级结构：维系蛋白质分子的一级结构：肽键、二硫键肽键、二硫键 维系蛋白质分子的二级结构：维系蛋白质分子的二级结构：氢键氢键 维系蛋白质分子的三级结构：维系蛋白质分子的三级结构：疏水键、氢键、范德华力、盐键疏水键、氢键、范德华力、盐键 维系蛋白质分子的四级结构：维系蛋白质分子的四级结构：范德华力、范德华力、盐键、疏水键、氢键盐键、疏水键、氢键第102页/共172页103氢键、范德华力、疏水相互作用力、盐键，均为次级键氢键、范德华力、疏水相互作用力、盐键，均为次级键氢键、范德华力虽然键能小，但数量大氢键、范德华力虽然键能小，但数量大疏水相互作用力对维持三级结构特别重要

18、疏水相互作用力对维持三级结构特别重要盐键数量小盐键数量小二硫键对稳定蛋白质构象很重要，二硫键越多，蛋白质构象越稳定二硫键对稳定蛋白质构象很重要，二硫键越多，蛋白质构象越稳定离子键离子键氢键氢键范德华力范德华力疏水相互作用力疏水相互作用力小结：稳定蛋白质结构的化学键小结：稳定蛋白质结构的化学键第103页/共172页104蛋白质一级结构是空间结构和生蛋白质一级结构是空间结构和生物功能的基础，一级结构决定空物功能的基础，一级结构决定空间结构；但一级结构并非决定空间结构；但一级结构并非决定空间结构的唯一因素。空间结构是间结构的唯一因素。空间结构是生物活性的直接体现。生物活性的直接体现。第104页/共1

19、72页1051、一级结构决定了二级结构、一级结构决定了二级结构n谷、蛋、丙、亮的残基是谷、蛋、丙、亮的残基是 -螺旋最强的生成者（出现频率螺旋最强的生成者（出现频率高），甘是高），甘是-螺旋最强的破坏者；螺旋最强的破坏者；n甘、丙、丝是甘、丙、丝是 -折叠最强生成者；折叠最强生成者；n甘、脯、天冬、丝是甘、脯、天冬、丝是-转角最强生成者；转角最强生成者；n异亮、缬、亮是异亮、缬、亮是-转角最强的破坏者。转角最强的破坏者。2、一级结构决定三级结构、一级结构决定三级结构n牛核糖核酸酶牛核糖核酸酶一、一级结构与功能的关系一、一级结构与功能的关系第105页/共172页106第106页/共172页107

20、第107页/共172页108n谷谷A（极性）（极性） 缬缬A（非极性）（非极性）n(了解了解)由于缬氨酸上的非极性基团与相邻非极性基团间在疏水由于缬氨酸上的非极性基团与相邻非极性基团间在疏水力作用下相互靠拢，并引发所在链扭曲为束状，整个力作用下相互靠拢，并引发所在链扭曲为束状，整个蛋白质由蛋白质由球状变为镰刀形，球状变为镰刀形，与氧结合功能丧失，与氧结合功能丧失， 导致病人窒息甚至死导致病人窒息甚至死亡，亡，但病人可抗非洲疟疾。但病人可抗非洲疟疾。第108页/共172页109第109页/共172页1102、一级结构并非影响空间结构的唯一因素、一级结构并非影响空间结构的唯一因素n分子伴侣：一类协

21、助细胞内分子组装和协助蛋分子伴侣：一类协助细胞内分子组装和协助蛋白质折叠的蛋白质。白质折叠的蛋白质。 n与未折叠的肽段（疏水部分）进行可逆的结合，辅助二硫键的正确形成；n引导肽链的正确折叠并集合多条肽链成为较大的结构；n可以解聚错误聚合的肽段，防止错误发生。第110页/共172页1111、空间结构体现生物特异性、空间结构体现生物特异性2、空间结构体现生物活性、空间结构体现生物活性3、空间结构的灵活性，体现了生物活性的可调、空间结构的灵活性，体现了生物活性的可调节特性节特性二、空间结构与功能的关系二、空间结构与功能的关系空间结构中的特定区域体现生物活性空间结构中的特定区域体现生物活性第111页/

22、共172页1124、空间构象并非生物活性的唯一影响因素、空间构象并非生物活性的唯一影响因素【举例举例】低温下酶活性低，但并不影响构象；盐析时沉低温下酶活性低，但并不影响构象；盐析时沉淀的酶无活性，但构象不变。淀的酶无活性，但构象不变。 5、蛋白构象疾病：、蛋白构象疾病：错误构象相互聚集错误构象相互聚集(分子中分子中折叠增折叠增加加 )，形成抗蛋白水解酶的淀粉样纤维沉淀，产生毒性而，形成抗蛋白水解酶的淀粉样纤维沉淀，产生毒性而致病。致病。n老年痴呆老年痴呆n疯牛病疯牛病n亨汀顿舞蹈病亨汀顿舞蹈病第112页/共172页113第113页/共172页1141、蛋白质的变性与复性、蛋白质的变性与复性去除

23、部分变性剂去除部分变性剂温和复性温和复性温和复性温和复性天然蛋白天然蛋白（具有正确的一级结（具有正确的一级结构和高级结构，因此构和高级结构，因此具有生物活性）具有生物活性）变性蛋白变性蛋白（具有正确的一级结构但无（具有正确的一级结构但无高级结构，无生物活性）高级结构，无生物活性）变性环境变性环境非天然蛋白非天然蛋白（具有正确的一级结构和错误（具有正确的一级结构和错误的高级结构，无生物活性）的高级结构，无生物活性）【经典举例经典举例】Rnase第114页/共172页1152、前体蛋白与活性蛋白的转变、前体蛋白与活性蛋白的转变 （切除冗余及（切除冗余及其它变化）其它变化）前体蛋白前体蛋白（一级结构

24、冗余，高（一级结构冗余，高级结构错误，因此无级结构错误，因此无生物活性）生物活性）活性蛋白活性蛋白（具有正确的一级结（具有正确的一级结构和高级结构，因此构和高级结构，因此具有生物活性）具有生物活性）适合环境适合环境【经典举例经典举例】酶原激活：胃蛋白酶原切除酶原激活：胃蛋白酶原切除N端端42个氨基酸后形成活性中心及其他空间构象，转变个氨基酸后形成活性中心及其他空间构象，转变为具水解蛋白质活性的胃蛋白酶；胰蛋白酶原切为具水解蛋白质活性的胃蛋白酶；胰蛋白酶原切除除N端端6个氨基酸后形成活性中心及其他正确构象，个氨基酸后形成活性中心及其他正确构象，转变为具有水解活性的胰蛋白酶。转变为具有水解活性的胰

25、蛋白酶。第115页/共172页1163、分子病（、分子病（molecular disease）：由于基因结）：由于基因结构改变，蛋白质一级结构中的关键氨基酸发生改构改变，蛋白质一级结构中的关键氨基酸发生改变，从而导致蛋白质功能障碍，出现相应的临床变，从而导致蛋白质功能障碍，出现相应的临床症状，这类遗传性疾病称为分子病。症状，这类遗传性疾病称为分子病。【经典举例经典举例】镰形细胞贫血症：编码珠蛋白镰形细胞贫血症：编码珠蛋白链的链的结构基因第六个密码子由结构基因第六个密码子由CTTCAT，相应的多，相应的多肽序列中肽序列中N端的第六个氨基酸由端的第六个氨基酸由GluVla；其空；其空间结构发生相应

26、改变，在表面形成互补区，使蛋间结构发生相应改变，在表面形成互补区，使蛋白质分子之间彼此聚合，促使红细胞在低氧压下白质分子之间彼此聚合，促使红细胞在低氧压下变形成镰形，丧失运输氧的生物活性。变形成镰形，丧失运输氧的生物活性。第116页/共172页1174、蛋白构象疾病：疯牛病，由于朊病毒蛋白、蛋白构象疾病：疯牛病，由于朊病毒蛋白（PrP）构象改变导致蛋白质聚集，形成抗蛋白）构象改变导致蛋白质聚集，形成抗蛋白水解酶的淀粉样纤维沉淀。水解酶的淀粉样纤维沉淀。（二级结构及（二级结构及其它变化）其它变化）正常动物正常动物PrPPrPc c （二级结构多为二级结构多为螺旋、螺旋、对蛋白酶敏感、水溶性对蛋白

27、酶敏感、水溶性）致病蛋白致病蛋白PrPsc（一级结构相同，但二级（一级结构相同，但二级结构全为结构全为折叠，抗蛋白折叠，抗蛋白酶、水溶性差、蛋白聚集酶、水溶性差、蛋白聚集成淀粉样沉淀）成淀粉样沉淀）未知蛋白未知蛋白第117页/共172页118第118页/共172页119第119页/共172页120第120页/共172页121n 等电点时特点等电点时特点：（1 1）净电荷为零）净电荷为零（2 2）多数蛋白质在水中等电点偏酸）多数蛋白质在水中等电点偏酸 碱性碱性AA/AA/酸性酸性AA AA 等电点等电点 胃蛋白酶胃蛋白酶 0.2 1.00.2 1.0 血红蛋白血红蛋白 1.7 6.71.7 6.

28、7 细胞色素细胞色素C 2.9 10.7C 2.9 10.7 （3 3）导电性、溶解度、黏度及渗透压都最小。）导电性、溶解度、黏度及渗透压都最小。n 等电沉淀和蛋白电泳：等电沉淀和蛋白电泳：n 迁移率与净电荷量、分子大小、分子形状等有关迁移率与净电荷量、分子大小、分子形状等有关第121页/共172页122一、蛋白质的两性解离与等电点蛋白质的两性解离与等电点垂直电泳垂直电泳水平电泳水平电泳第122页/共172页123一、蛋白质的两性解离与等电点蛋白质的两性解离与等电点第123页/共172页124第124页/共172页125第125页/共172页1261、蛋白质具有胶体溶液的性质第126页/共17

29、2页127第127页/共172页128第128页/共172页129变性的因素及作用机制第129页/共172页130蛋白质变性的可逆性与复性蛋白质变性的可逆性与复性n 可逆变性：可逆变性：n 变性条件除去后仍可恢复天然状态的变性。变性条件除去后仍可恢复天然状态的变性。n 不可逆变性：不可逆变性：n 变性条件除去后不能恢复天然状态的变性。变性条件除去后不能恢复天然状态的变性。第130页/共172页131去除变性剂去除变性剂并缓慢氧化并缓慢氧化天然构象天然构象尿素，尿素， - -巯基乙醇巯基乙醇变性状态变性状态第131页/共172页132n变性后的蛋白质由于疏水基变性后的蛋白质由于疏水基团的暴露而易

30、于沉淀，但团的暴露而易于沉淀，但沉沉淀的蛋白质不一定都是变性淀的蛋白质不一定都是变性后的蛋白质后的蛋白质。第132页/共172页1332.沉淀种类：可逆与不可逆3.沉淀方法：n 沉淀后蛋白质仍能保持生物活性的沉淀方法n 沉淀后蛋白质失去生物活性的沉淀方法第133页/共172页1343.沉淀方法：n 沉淀后蛋白质仍能保持生物活性的沉淀方法（1）盐析中性盐沉淀法（2）有机溶剂沉淀法（3）酸沉淀法第134页/共172页135（1）盐析中性盐沉淀n 盐溶作用 少量盐会增加蛋白质分子表面的电荷，增强蛋白质分子与水分子的作用 n 盐析作用高浓度盐离子使蛋白质表面双电层厚度降低，静电排斥作用减弱。中性盐比蛋

31、白质具更强的亲水性，因此将与蛋白质争夺水分子。 蛋白质仍能保持生物活性的沉淀方法第135页/共172页136（1）盐析盐析中性盐沉淀中性盐沉淀 蛋白质仍能保持生物活性的沉淀方法第136页/共172页137（1）盐析中性盐沉淀第137页/共172页138（2）有机溶剂沉淀法有机溶剂沉淀法 蛋白质仍能保持生物活性的沉淀方法第138页/共172页139（2 2）有机溶剂沉淀法）有机溶剂沉淀法 蛋白质仍能保持生物活性的沉淀方法机制机制：破坏电荷，等电点沉淀。破坏电荷，等电点沉淀。（3 3）酸沉淀法）酸沉淀法第139页/共172页140（1）重金属盐沉淀法（2）生物碱试剂沉淀法（除蛋白作用）（3）热凝固

32、沉淀法（4）抗体对抗原蛋白质的沉淀3.沉淀方法：n 沉淀后蛋白质仍能保持生物活性的沉淀方法n 沉淀后蛋白质失去生物活性的沉淀方法第140页/共172页141六、蛋白质的颜色反应六、蛋白质的颜色反应第141页/共172页142六、蛋白质的颜色反应n 两分子双缩脲与碱性硫酸铜作用，生成两分子双缩脲与碱性硫酸铜作用，生成粉红色复合物粉红色复合物n 含有两个或两个以上含有两个或两个以上肽键肽键的化合物，能发生同样反应的化合物，能发生同样反应n 肽键的反应，肽键越多颜色越深，肽键的反应，肽键越多颜色越深，粉红，紫红，蓝紫粉红，紫红，蓝紫n 受蛋白质特异性影响小受蛋白质特异性影响小n 蛋白质定量测定；测定蛋白质水解程度蛋白质定量测定；测定蛋白质水解程度第142页/共172页143六、蛋白质的颜色反应六、蛋白质的颜色反应第143页/共172页144六、蛋白质的颜色反应六、蛋白质的颜色反应5. 5. 米伦氏反应米伦氏反应酪氨酸酪氨酸的特有反应的特有反应n 酪氨酸的显色反应（酚羟基反应）酪氨酸的显色反应（酚羟基反应）n 米伦试剂为硝酸、亚硝酸、硝酸汞、亚硝酸汞的混合米伦试剂为硝酸、亚硝酸、硝酸汞、亚硝酸汞的混合物物n 蛋白质溶液中，加入米伦试剂，产生白色沉淀，加热蛋白质溶液中，加入米伦试剂，产生白色沉淀，加热后