流式细胞仪检测凋亡和细胞周期等应用课件

1、第一页，共五十九页。什么(shn me)是流式细胞仪流式细胞仪实物(shw)BD FACSVantageBD-Calibur 第二页，共五十九页。第三页，共五十九页。第四页，共五十九页。4. 应用应用(yngyng)范围范围第五页，共五十九页。二、流式细胞仪的工作二、流式细胞仪的工作(gngzu)原理和基本结原理和基本结构构液柱与激光束相交液柱与激光束相交(xingjio)，细胞上的荧光染料被激发产生荧光。，细胞上的荧光染料被激发产生荧光。荧光信号变成电信号输出到计算机，软件分析。荧光信号变成电信号输出到计算机，软件分析。第六页，共五十九页。第七页，共五十九页。基本基本(jbn)结构结构第八页

2、，共五十九页。三、 流式细胞仪可检测(jin c)到的细胞参数颗粒颗粒(kl)度度细胞大小细胞大小=前向角散射光（前向角散射光（FSCFSC）细胞相对大小及其表面积细胞相对大小及其表面积 =侧向角散射光（侧向角散射光（SSCSSC）细胞颗粒度及细胞内细胞器的相对细胞颗粒度及细胞内细胞器的相对复杂性复杂性第九页，共五十九页。血液血液(xuy)涂涂片片第十页，共五十九页。外周全外周全(zhuqun)(zhuqun)血细胞散射光双参数点血细胞散射光双参数点图图第十一页，共五十九页。第十二页，共五十九页。 荧光染料被激发而发射的光信号。荧光染料被激发而发射的光信号。 定量染色定量染色 荧光信号大小荧光

3、信号大小 被标记组分含量被标记组分含量(hnling)(hnling)的定量的定量 多荧光标记胞内多种组分，实现多参数测量多荧光标记胞内多种组分，实现多参数测量第十三页，共五十九页。二色镜 1 2 3带通滤波片光电倍增管激光束细胞收集透镜前向散射光侧向散射光，荧光光信号分离，导向光信号分离，导向各探测各探测(tnc)(tnc)通道接收并转化为电信号。通道接收并转化为电信号。光信号光信号(xnho)收集收集第十四页，共五十九页。三三 数据处理及数据处理及流式报告(bogo)FSC SSC FL1 FL2 FL3对数对数(du sh) 线性线性 线性线性 线性线性 对数对数脉冲(michng)处理

4、，模数转换光信号电信号记录数据，显示结果（面积，峰高，宽度）第十五页，共五十九页。第十六页，共五十九页。 散点图 密度(md)图二维等高图直方图图 报告中常见(chn jin)的几种流式细胞图第十七页，共五十九页。图 Annexin V/PI双标记(bioj)分析细胞凋亡和坏死第十八页，共五十九页。流式细胞仪数据分析流式细胞仪数据分析第十九页，共五十九页。流式细胞仪数据分析流式细胞仪数据分析第二十页，共五十九页。图中100101（M1）为阴性细胞(xbo)，101以上的（M2）为阳性细胞 第二十一页，共五十九页。 五、 流式细胞术的应用(yngyng)第二十二页，共五十九页。（Propidiu

5、m iodide碘化丙啶），碘化丙啶）， 第二十三页，共五十九页。第二十四页，共五十九页。图中2N代表G0/G1期细胞(xbo)，4N代表G2/M期细胞(xbo)，两者中间代表S期细胞(xbo)。这是以2倍体和4倍体细胞(xbo)为主的流式DNA图 第二十五页，共五十九页。DNA细胞周期分析细胞周期分析(fnx)细胞周期细胞周期 200 400 600 8001000DNA含量含量(hnling)细细胞胞数数量量第二十六页，共五十九页。第二十七页，共五十九页。2倍体倍体异倍体异倍体4倍体倍体肿瘤肿瘤(zhngli)组织中的各种组织中的各种DNA倍体倍体第二十八页，共五十九页。含量含量(hnli

6、ng)与凋亡关系与凋亡关系第二十九页，共五十九页。第三十页，共五十九页。第三十一页，共五十九页。第三十二页，共五十九页。1. 肿瘤肿瘤(zhngli)诊断诊断第三十三页，共五十九页。2倍体倍体异倍体异倍体4倍体倍体肿瘤肿瘤(zhngli)组织中的各种组织中的各种DNA倍倍体体第三十四页，共五十九页。第三十五页，共五十九页。2. 凋亡凋亡(dio wn)研究研究第三十六页，共五十九页。第三十七页，共五十九页。Annexin V Assay第三十八页，共五十九页。图 Annexin V/PI双标记(bioj)分析细胞凋亡和坏死第三十九页，共五十九页。Date acquired: 14-Jan-03

7、File: 7Gy 4hr.001Source: dongboDIPLOID: 100.00 % Dip G0-G1: 73.12 % at 48.16 Dip G2-M: 9.59 % at 96.33 Dip S: 17.29 % G2/G1: 2.00 Dip %CV: 6.04Apoptosis: 13.66 % Mean: 27.48 图图 FCM测试细胞测试细胞(xbo)周周 期分布和凋亡期分布和凋亡第四十页，共五十九页。根据凋亡细胞根据凋亡细胞(xbo)的特点来检测的特点来检测第四十一页，共五十九页。 三）三）第四十二页，共五十九页。第四十三页，共五十九页。第四十四页，共五十九页

8、。流式细胞术检测(jin c)细胞表型 第四十五页，共五十九页。 四）四）白血病的免疫白血病的免疫(miny)分型分型 第四十六页，共五十九页。 五）五） 细胞内蛋白细胞内蛋白(dnbi)的分析：的分析：第四十七页，共五十九页。荧光荧光(ynggung)(ynggung)信信号号第四十八页，共五十九页。荧光样本荧光样本(yngbn)(yngbn)制备制备双色直接双色直接(zhji)染色染色第四十九页，共五十九页。 端粒（荧光端粒（荧光(ynggung)蛋白）蛋白）第五十页，共五十九页。第五十一页，共五十九页。FCM检测(jin c)胞内钙离子、膜电位和线粒体功能第五十二页，共五十九页。M1阴性

9、界限划分(hu fn)完全是根据阴性对照！如下图：红色部分代表阴性对照，即：所检测的物质在阴性组中的基础表达量，可以理解为背景、静息状态下、基础水平、未受刺激时等。蓝色部分即阳性组，也就是接受刺激后，功能状态下、药物作用后等。第五十三页，共五十九页。 六六. 分选：分选：第五十四页，共五十九页。488 nm laser+-Fluorescence Activated Cell SortingCharged PlatesSingle cells sortedinto test tubesFALS SensorFluorescence detector第五十五页，共五十九页。流式细胞仪流式细胞仪显

10、微镜显微镜流动的细胞流动的细胞静止的细胞样本静止的细胞样本数量大数量大数量少数量少高速分选高速分选样本难以再利用样本难以再利用细胞群体特征量分布细胞群体特征量分布揭示细胞内部结构信息揭示细胞内部结构信息第五十六页，共五十九页。流式细胞仪流式细胞仪蛋白电泳蛋白电泳多参数多参数单参数单参数量化的分布量化的分布平均值平均值容易检测各个参数间的容易检测各个参数间的相关性相关性不容易不容易第五十七页，共五十九页。第五十八页，共五十九页。流式细胞仪检测凋亡和细胞周期等应用内容(nirng)总结流式细胞术。在分析的同时可把具有指定特征的细胞分离出来，即分选技术。液柱与激光束相交，细胞上的荧光染料被激发产生荧光。侧向角散射光（