Qubit标准操作规程

1、Qubit® 3.0荧光定量仪操作与维护规程一、目的使Qubit® 3.0荧光定量仪能够正确和正常的使用，保证系统的正常运行的准确性和精密 度，以获得准确可靠的检验结果。二、适用范围可用于定量的DNA,RNA, micro RNA和蛋白质,使用高度敏感和准确的荧光技术量子位定 量分析 三、工作原理Qubit®荧光定量仪采用荧光染料与特异性的靶分子结合。这些荧光染料只有与这些靶分子结 合时才会发射荧光信号，即使在浓度很低时。Qubit®3.0荧光定量仪比传统的紫外吸光法更 加准确。以往的紫光吸光法不具选择性，测量260nm所有分子的吸光值一一包含DNA，R

2、NA， 蛋白质，游离核甘酸或多余的盐离子。此外，紫外分光光度计的灵敏度不足，无法完成低浓 度DNA和RNA的精确定量。使用Qubit®荧光定量仪，将大大提升准确性。因为Qubit®分析 试剂盒里的荧光染料只与样品中的特异分子结合一一DNA,RNA或蛋白，避免不准确测量带来 的重复工作 四、职责实验室负责该系统的日常维护保养，包括每周保养，以及需要时的保养工作。1 .保证仪器设备在计量有效期内使用，并配合完成计量相关工作。2 .负责仪器设备的正确使用、妥善保管和精心维护。3 .负责仪器设备的日常保养、定期校准。五、仪器特点1 .快速和高度精确的定量的DNA，RNA和蛋白质样品

3、少于5秒。2 .高水平的准确性只有1 20 L的样品，甚至用很稀的样品3 .使用染料选择性的双链Dna、RNA或蛋白质样品中的污染物的影响降至最低。4 .大型、先进的彩色触摸屏为简单工作流导航的。5 .以图形方式显示达20的数据点6 .可以个性化仪器用户界面将显示只有常用的化验六、使用要求1 .不要在阳光直射下操作仪器2 .样品处理过程中需带无粉橡胶手套3 .在室温使用的仪器(22-28° C)4 .测量之前已经进行校准七、操作指南仪器外观PoweriHlulUSB电缆接口USB驱动器端口7.1仪器开启和关闭1 .该仪器在平坦的地方，水平，干燥的表面2 .将提供的电源线的一端插入Qu

4、bit® 3.0荧光计3 .电源线另一端附加适当的插头适配器的，插在合适的电源上4 .仪器自动开启，首先显示闪屏，然后主屏幕5 .要关闭Qubit® 3.0荧光计，直接拔下电源6 .2仪器开机后，主屏幕自动显示，可以在屏幕上选择以下功能:1 .选择一个定量测定：dsDNA, RNA, oligo (ssDNA),蛋白质，或 离子球2 .选择荧光计模式3 .访问以前保存的数据4 .系统设置 Instrument settings7.3 屏幕设置(Instrument settings)1 .睡眠模式2 .亮度设置3 .日期时间设置4 .恢复设置5 .语言设置SettingsI

5、mpdrt new as&ay7.3.1 设置睡眠模式：a.系统默认为10分钟进入睡眠模式，如要调整该项，在屏幕上点击 “Sleep mode”b.点击文本框中得数字，然后更改，仪器设置范围为160分钟 c.设置好后点击保存返回设置界面®Sleep modeSleep mode allows the instrument to useless energy when not in useEnableSleep Mode After10Cancel7.3.2 设置亮度a.屏幕上点击“Brightness”b.移动滑块按钮向上或向下调整显示器的亮度c. 设置好后点击保存返回设置界

6、面BrightnessAdjust the brightness ofyour screenCancel7.3.3设置时间日期a.屏幕上点击“Date/Time”b.选着日期时间格式然后进入下一步 c.点击相应的文本框进行设置d.设置完成后点击保存返回设置界面Language displayedChoose the language you want your instrument to displayCancel1.1.4 恢复设置：恢复出厂设置，删除所有保存的数据用户定义的仪器设置和定制的化验， 该选项请慎重选择1.1.5 语言设置a.屏幕上点击“Languageb.选择相应的选项c.点击

7、保存返回设置界面7.4 校准仪器工作原理是先使用标准浓度的试剂生成荧光值和浓度二维坐标轴，检测时测出溶 液的荧光值，然后根据荧光值来换算浓度，所以进行测验时需要选择新校准或使用以前保 存的校准（如该功能第一次使用或更换检测试剂盒就需重新校准）7.4.1 点选需要检测的项目，进入下一级目录7.4.2 点选试验，如第一次选择会直接提示进行校准，如以前进行过校准，则会提示使用以 前的或新进行校准，这里选择进行校准 dsDNA： High sensitivityRead 5怕n曲心Ljst rcjd sUndard&i7.4.3 出现下面界面，将试剂盒中用于校准的标准品1#放入样品室，点击“R

8、ead standard ”,7.4.4校准完成后不来|标准品2#取接！：测浓度，查看校准是否成功。如果校准成功,大约3秒，读取完成进入到下 需放入标准品3#）。rR步，二显幕显示荧光与浓度放入标准品2#，点击“Read standard”（蛋白质校准还2Q0dsDNA： High sensitivityRFU ValuesSmnddE 1 246.23在荧光与浓度图:标准数据点被一条线连接。（圆圈表示正确的标准）如果校验不成功,软件显 示“校准误差”消息，需重新进行校准7.5 样品检测7.5.1 将样品与反应液混合（混合方案具体见试剂盒）孵化一段时间（DNA和RNA为2分钟， 蛋白质需要15

9、分钟）7.5.2 在阅读标准屏幕,点击运行样本 dsDNA： High sensitivityRFU ValuesStandard 1Standard 2246.2325454.580100 200 300 400CancelRun samples7.5.3 在样本体积屏幕,选择样本体积和单位a.触摸+和-按钮在方向盘上选择样本体积添加到试验管（1 - 209）。b.从下拉菜单中，选择的单位输出样本的浓度Enter original sample volumedsDNA： High sensitivity7.5.4 将样品管插入到样品室，关上盖子，然后点击读取管。大约需要3秒7.5.5在屏幕上

10、就会显示所需检测的心dsDNA： High sensitivityReading tubeCancel7.5.6 多个样品检测：a.相同体积和浓度单位：只需更换样品室中样品管，点击读取管b.不同体积和浓度单位：重复上诉步骤更改体积和浓度单位7.5.7 检测浓度存在一定范围，如超出检测范围会显示“超出范围”做 d<DNA. Hbgh sensitivity/Original go虻u m忸d UJ 即口 II LlfKdriM 串irh Out of Rangel I Stftf gi己ph for dfetdili /Ms7.5.8 可以点击屏幕上左右箭头进入体积浓度设置界面和荧光与浓度

11、图1 .空心圆表示进行校准的标准品2 .大的灰色圆圈代表最新样品3 .蓝色圆圈代表在检测范围内4 .黄色圆圈代表在拓展范围内5 .红色圆圈代表在仪器检测范围外7.6 荧光模式可以选择荧光模式来作为mini荧光计使用(光源通道蓝色(470 nm)或红色(635 nm)7.6.1 主界面点击“Fluorometer"，进入下一级，选择相应的选项7.6.2 放入样品，点击读取管® etue |A710nm7.6.3 选择蓝光时，显示的结果有蓝光和红光检测数值，选择红光时，只显示红光的检测数 值7.7 数据管理Qubit® 3.0机子本身可以存储1000样本数据，对保存的

12、数据，可以进行以下操作:a.针对每个样本查看详细的数据b.重命名数据文件c.可以保存数据，导出到USB存储器或电脑中d.删除数据文件7.7.1 从浓度检测界面、荧光与浓度图界面、主屏幕点击“Data”7.7.2 出现数据屏幕，点击想查看的数据集(*)Export dataDate/TimeAssay nameS02/13/1。amd&DNA H*402/13/U9：A5 amProtein809/12/13 10,45 amdbDNAHtgh.608/U/13 I0-A5 amRNA firown?08/05/134:45 amRNA High D07/74/13 745 amdBDN

13、A卜帅407/23/13 11-45 amProtein57.7.3 点击想要查看的数据，就会出现以下详细的数据列表(*)Data detailsSample 1Sample 102/13/2014 9：40amOriginal sample concentration 1.17r3 ng/mlQubit tube concentration88.0 ng/miAssay： dsDNA High SensitivitySample RFU valuesSample 1 4797.25Last standards readStandard 1Standard 2246.2325454 58Last standard read：2/13/14 at 9:45 amSample used (amount)15PLDilution factor13JExci