病原性球菌及杆菌

1、病原性球菌与肠道杆菌一、实验目的1.掌握葡萄球菌、链球菌的形态特征和染色特性。2.熟悉肠道杆菌培养特征、生化反应及动力学等特性。3.了解三种葡萄球菌产生的色素。4.了解甲、乙型溶血型链球菌在血琼脂平板上的菌落特点及溶血性。5.了解大肠埃希菌、痢疾志贺菌、伤寒沙门菌在SS平板上菌落特点。二、实验内容1.示教观察葡萄球菌、链球菌的形态2.观察肠道杆菌在SS培养基的生长情况及菌落特征，以及肠道杆菌的双糖发酵3.化脓性球菌的鉴定 三种葡萄球菌的色素观察 甲、乙型链球菌的溶血现象观察4.甘露醇发酵实验5.血浆凝固酶实验1. 葡萄球菌、链球菌的培养物 普通琼脂平板 血平板 菌落形状 色素 溶血性 金葡 圆

2、形凸起光滑中等大小 金黄色 + +柠葡 同上 柠檬色 - - 白葡 同上 白色 - - 表1葡萄球菌分类葡萄球菌分类按照色素不同按照色素不同金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌（金黄色金黄色）表皮葡萄球菌表皮葡萄球菌（白色）白色）腐生葡萄球菌腐生葡萄球菌（柠檬色柠檬色）性状性状金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌腐生葡萄球菌菌落色素菌落色素 金黄色金黄色 白色白色白色或柠檬色白色或柠檬色血浆凝固酶血浆凝固酶 + + -甘露醇甘露醇 + + - -溶血性溶血性 溶血 - -SPA + + -耐热核酸酶耐热核酸酶+ +-致病性致病性 强强 弱弱 无无 血平板甲型链球菌 针尖小菌

3、落、草绿色狭窄溶血环 ( (溶血即不完全溶血）乙型链球菌 针尖小菌落、透明宽大溶血环 （溶血即完全溶血） 巧克力血平板脑膜炎双球菌 菌落透明似露滴状 表2 表3草绿色链球菌草绿色链球菌不溶血链球菌不溶血链球菌溶血性链球菌溶血性链球菌多为条件致病菌致病力强无致病性溶血(狭窄草绿色溶血环 )溶血（宽大透明溶血环）乙型溶血性链球菌 溶血环大肠杆菌（非致病菌）在SS培养基上可形成相对较大，不透明，红色的菌落。伤寒杆菌在SS培养基上形成相对较小，半透明，无色或淡黄色的菌落，产生硫化氢的细菌菌落中心呈黑色。痢疾杆菌在SS培养基上形成的菌落与伤寒杆菌菌落相似。SS平板：为强选择性培养基，内含胆盐、枸橼酸钠和

4、煌绿，可抑制大肠杆菌和非肠道杆菌的生长；还含有乳糖和中性红，一般肠道致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨，产生碱性物质，故菌落呈淡黄色。大肠杆菌发酵乳糖，产酸使指示剂变红，故菌落呈红色。大肠杆菌痢疾杆菌双糖铁培养基含葡萄糖、乳糖、硫酸亚铁。指示剂为酚红。葡萄糖与乳糖的比例为1:10。 若细菌分葡萄糖、乳糖产酸产气，使斜面与底层均呈黄色，且有气泡。（大肠杆菌) 若细菌只分解葡萄糖而不分解乳糖,分解葡萄糖后所生成的少量酸可使底层pH降低；而上层少量酸因接触空气而氧化，并因细菌生长繁殖利用含氮物质生成碱性化合物，呈红色。 （伤寒杆菌、痢疾杆菌） 若细菌产生硫化氢时与培养基中硫酸亚铁作用,形成黑色的硫化铁呈

5、黑色。（伤寒杆菌） 配合半固体培养基可观察肠道杆菌中的细菌动力。 Salmonella -Shigella Mediun主要成分 基础营养 乳糖 指示剂 抑制剂分解乳糖不分解乳糖产酸PH指示剂变红色红色大菌落大肠杆菌等无明显变化无色半透明小菌落志贺菌等甘露醇发酵试验（示教）甘露醇发酵试验（示教）血浆凝固酶试验-玻片法（操作，1人/组）原理：能产生血浆凝固酶的菌株倾入机体后使血浆中的纤维蛋白原变成纤维蛋白导致血浆凝固（致病性葡萄球菌产生血浆凝固酶）方法： 兔血浆 兔血浆 12金葡 白葡 + + + + 凝集颗粒（+） 不凝集（-）4、血浆凝固酶试验（试管法）、血浆凝固酶试验（试管法） 金葡菌金葡

6、菌 白葡菌白葡菌 + + + 兔血浆兔血浆 兔血浆兔血浆 37303730水浴观察水浴观察 凝集为阳性凝集为阳性（胶冻样凝（胶冻样凝 固状态）固状态）不凝集为阴性不凝集为阴性凝固酶实验（试管法） 1. 葡萄球菌、链球菌的培养物 普通琼脂平板 血平板 菌落形状 色素 溶血性 金葡 圆形凸起光滑中等大小 金黄色 + +柠葡 同上 柠檬色 - - 白葡 同上 白色 - - 表1 血平板甲型链球菌 针尖小菌落、草绿色狭窄溶血环 ( (溶血即不完全溶血）乙型链球菌 针尖小菌落、透明宽大溶血环 （溶血即完全溶血） 巧克力血平板脑膜炎双球菌 菌落透明似露滴状 表2 表3血浆凝固酶试验-玻片法（操作，1人/组）原理：能