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文档简介
1、会计学1血清浆脂类及脂蛋白测定血清浆脂类及脂蛋白测定血脂的组成:甘油三酯(少量甘油二酯和甘油一酯)磷脂胆固醇和胆固醇酯非酯化脂肪酸(游离脂肪酸)等血脂的运输形式脂蛋白脂蛋白1 1、定义:、定义: 指指血浆脂质与载脂蛋白组成的可溶性的生物大分子。磷脂胆固醇载脂蛋白甘油三酯胆固醇酯2 2、结构:、结构:脂蛋白微粒表面核心3 3、分类、分类 (1)按密度不同HDLLDLIDLVLDLCM(2)按电泳时区带的泳动位置不同 CMHDLVLDLLDLCM-LP前前-LP -LP -LP前前-LP-LPCM临床血脂测定的常见项目:实验实验51: 磷钨酸磷钨酸-镁沉淀法测定高密度脂镁沉淀法测定高密度脂蛋白胆固
2、醇(蛋白胆固醇(HDL-C)提取HDL 测定胆固醇 实验原理: 超速离心法 层析法 电泳法沉淀法提取HDL的方法:沉淀法原理: ApoB + 多阴离子化合物 沉淀硫酸葡聚糖-Mg2+肝素-Mn2+磷钨酸-Mg2+多阴离子(polyanion)化合物 过氧化物酶胆固醇 + O2 胆甾烯酮 + H2O2H2O2 + 酚 + 4-氨基安替比林 亚胺醌亚胺醌 + H2O胆固醇测定(酶法):试剂:沉淀剂酶试剂参考血清(TC测定用的定值血清)操作步骤: 取血清和沉淀剂各200l,充分混匀,置室温放置10min后,2500r/min,15min,吸取上清液按表进行操作。 1、提取HDL加入物(l)空白管标准
3、管测定管上清液50参考血清50蒸馏水50酶试剂200020002000混匀,37水浴15min;空白管调零,0.5cm比色杯,500nm比色。 2、测定胆固醇计算:参考值:HDL-C (mmol/L)测定管吸光度标准管吸光度 =定值血清胆固醇浓度5.170.92.0mmol/L2注意事项:1、血清标本要及时测定(在室温条件下,各型脂蛋白之间会发生脂质交换);(游离的胆固醇会不断酯化)。2、离心过程中防止温度过高(室温1525),离心后放置时间不能过长。(温度过高使沉淀不完全)。临床意义: 具有抗动脉粥样硬化作用,是冠心病的保护因素。磷酸甘油氧化法测定血清甘磷酸甘油氧化法测定血清甘油三酯(油三酯
4、(TG)实验实验49: 甘油三酯(TG)的结构: 甘油三酯测定的方法: 化学法酶法 化学法(KOH) (过碘酸)皂化氧化抽提 甘油 甲醛 显色甘油三酯甘油甲醛变色酸紫红色紫红色甘油三酯3-磷酸甘油 + ADP+ ATPO2 、H2O + 磷酸二羟丙酮 + H2O2甘油 + 脂肪酸+酚、4-氨基安替比亚胺醌亚胺醌 + H2OLPLGKGPOPOD酶法(磷酸甘油氧化酶法)试剂:酶试剂 2.26mmol/L的三油酸甘油酯标准液 操作:加入物(l)空白管 标准管(2) 测定管(2)上清液20参考血清20酶试剂20002000200037水浴10min;空白管调零,0.5cm比色杯,500nm比色。 计
5、算:TG (mmol/L)测定管吸光度标准管吸光度 =标准液浓度参考值:0.561.70mmol/L2.26mmol/L临床意义:增高: 与动脉粥样硬化关系密切、家族性的脂代谢紊乱、糖尿病等。降低: 营养不良、消化吸收综合征、消耗性疾病等。注意事项:标本: 标本要求是餐后12-14h的空腹血液(血清TG易受饮食影响)。 标本存放不宜超过3天(避免TG水解而释放出甘油)。试剂: 酶试剂应4避光保存,出现红色不可再用 。 免疫透射比浊法测定血清载脂蛋白A1和载脂蛋白B 实验实验53: 抗原抗原抗体复合物抗体+ApoA1 ApoB ApoA1抗体ApoB抗体比色原理:ApoA1 与高脂血症、冠心病呈负相关;ApoB 与高脂血症、冠心病呈正相关。临床意义:(2)按电泳时区带的泳动位置不同 CMHDLVLDLLDLCM-LP前前-LP -LP -LP前前-LP-LPCM 超速离心法 层析法 电泳法沉淀法提取HDL的方法:沉淀法原理: ApoB + 多阴离子化合物 沉淀试剂:沉淀剂酶试剂参考血清(TC测定用的定值血清)甘油三酯3-磷酸甘油
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