乳中蛋白质含量测定

1、第 1 页* 实训十九 鲜牛乳中蛋白质含量测定第 2 页1、掌握蛋白质测定的原理及国标对鲜牛乳中蛋白质含量的指标要求。2、能够独立完成牛乳中蛋白质含量的测定过程，并得出正确的结论。一、实训目的一、实训目的实训十九 鲜牛乳中蛋白质含量测定第 3 页(一) 试剂和材料要求1、硫酸铜 2、硫酸钾 3、硫酸 4、硼酸5、甲基红指示剂6、溴甲酚绿指示剂7、亚甲基蓝指示剂8、氢氧化钠二、实训要求二、实训要求实训十九 鲜牛乳中蛋白质含量测定第 4 页(一) 试剂和材料要求9、95%乙醇 10、 硼酸溶液（20g/L）：称取20g硼酸，加水溶解后并稀释至1000mL。11、氢氧化钠溶液（400g/L）：称取4

2、0g氢氧化钠加水溶解后，放冷，并稀释至100mL。12、硫酸标准滴定溶液（0.0500mol/L）或盐酸标准滴定溶液（0.0500mol/L）。13、甲基红乙醇溶液（1g/L）：称取0.1g甲基红，溶于95%乙醇，用95%乙醇稀释至100mL。14、亚甲基蓝乙醇溶液（1g/L）：称取0.1g亚甲基蓝，溶于95%乙醇，用95%乙醇稀释至100mL。15、溴甲酚绿乙醇溶液（1g/L）：称取0.1g溴甲酚绿，溶于95%乙醇，用95%乙醇稀释至100mL。16、混合指示液：2份甲基红乙醇溶液与1份亚甲基蓝乙醇溶液临用时混合。二、实训要求二、实训要求实训十九 鲜牛乳中蛋白质含量测定第 5 页（二）仪器和

3、设备要求1、天平：感量为1mg。2、全套凯氏定氮装置：如图2所示。二、实训要求二、实训要求实训十九 鲜牛乳中蛋白质含量测定第 6 页（一）原理 牛乳中的蛋白质在催化加热条件下被分解，产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，在用硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定，根据酸的消耗量得到样品中的氮的含量，乘以换算系数，即为蛋白质的含量。（二）分析步骤 1、试样处理：称取充分混匀的牛乳试样10g25g（约相当于30mg40mg氮），精确至0.001g，移入干燥的100mL、250mL或500mL定氮瓶中，加入0.2g硫酸铜、6g硫酸钾及20mL硫酸，轻摇后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45角

4、斜支于有小孔的石棉网上。小心加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色并澄清透明后，再继续加热0.5h1h。取下放冷，小心加入20mL水。放冷后，移入100mL容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。同时做试剂空白试验。三、实训内容三、实训内容实训十九 鲜牛乳中蛋白质含量测定第 7 页（二）分析步骤 2、测定：按图2装好定氮蒸馏装置，向水蒸气发生器内装水至2/3处，加入数粒玻璃珠，加甲基红乙醇溶液数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加热煮沸水蒸气发生器内的水并保持沸腾。三、实训内容三、实训内容实训十九 鲜牛乳中蛋白质含量测

5、定第 8 页（二）分析步骤 3、蒸馏：向接收瓶内加入10.0mL硼酸溶液及1滴2滴混合指示液，并使冷凝管的下端插入液面下，根据试样中氮含量，准确吸取2.0mL10.0mL试样处理液由小玻杯注入反应室，以10mL水洗涤小玻杯并使之流入反应室内，随后塞紧棒状玻塞。将10.0mL氢氧化钠溶液倒入小玻杯，提起玻塞使其缓缓流入反应室，立即将玻塞盖紧，并加水于小玻杯以防漏气。夹紧螺旋夹，开始蒸馏。蒸馏10min后移动蒸馏液接收瓶，液面离开冷凝管下端，再蒸馏1min。然后用少量水冲洗冷凝管下端外部，取下蒸馏液接收瓶。 4、滴定：将洗净的滴定管用滴定管夹夹住固定于滴定架台上，装好已标定的盐酸或硫酸标准溶液，滴

6、定接受瓶的吸收液至溶液颜色由蓝绿色变为酒红色时为终点，记录消耗的标准溶液的浓度和体积。三、实训内容三、实训内容实训十九 鲜牛乳中蛋白质含量测定第 9 页（二）分析步骤 5、同时作试剂空白 按分析步骤3用空白液代替样品溶液进行蒸馏，再滴定空白吸收液。 重复样品溶液和空白液的测定操作，样品溶液和空白液所消耗用的标准酸体积都分别去其2次以上滴定体积的平均值。三、实训内容三、实训内容实训十九 鲜牛乳中蛋白质含量测定第 10 页（二）分析步骤 6、蒸馏瓶的洗涤 在进行样品溶液或空白溶液的重复测定操作之前。应先清洗的蒸馏系统。方法如下： 蒸馏步骤3完毕后，将火源移去时，蒸馏瓶内的废液立即流到蒸馏瓶外侧夹层

7、内，可由出水口经排水管排出。把装有蒸馏水的烧杯置于冷凝管下方，并将冷凝管下端出口插入水的液面以下，关闭进水口、出水口和进样口。 加热夹层的水至沸腾大约1min，移去火源，烧杯中的蒸馏水被吸入而流到蒸馏瓶内，再流至蒸馏瓶外侧夹层，由出水口经排水管排除。按此方法重复洗涤23次。三、实训内容三、实训内容实训十九 鲜牛乳中蛋白质含量测定第 11 页（三）结果与计算试样中蛋白质的含量按下式进行计算。 三、实训内容三、实训内容实训十九 鲜牛乳中蛋白质含量测定式中：X试样中蛋白质的含量，g/100g；V1试液消耗硫酸或盐酸标准滴定液的体积，mL；V2试剂空白消耗硫酸或盐酸标准滴定液的体积，mL；V3吸取消化液的体积，mL；c硫酸或盐酸标准滴定溶液浓度，mol/L；0.01401.0 mL 硫酸c (1/2H2SO4)1.000 mol/L或盐酸c (HCl) 1.000 mol/L标准滴定溶液相当的氮的质量，g；m试样的质量，g；F氮换算为蛋白质的系数，6.38。第 12 页（四）说明及注意事项 1、消化时不要用强火，应保持和缓沸腾，注意不断转动凯氏烧瓶，以便利用冷凝酸液将附在瓶壁上的物质洗下并保持消化完全。 2、样品中若含脂肪较多时，消化过程中易产生大量泡沫，为防止泡沫溢出瓶外，在开始消化时应用小火加热，并不断摇动。 3、蒸馏装置不得