高中生物检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质

1、第一*佃腕的今&锢L啟 it实验检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质实验：检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质实验原理：某些化学试剂能够使生物组织中的有关 有机化合物产生特定的颜色反应。 还原糖+斐林试剂砖红色沉淀 脂肪+苏丹in （或苏丹iv）染液-橘黄色（或红色） 蛋白质+双缩服试剂-紫色 淀粉+碘-蓝色化学试剂+有机化合物-特定的颜色、可溶性还原糖的检测:(1) 原理：还原糖+斐林试剂砖红色沉淀。(2) 选材：苹果、梨、白萝卜。含糖量较高，颜色为 白色或近于白色的植物组织。(3) 检测过程：2mL组织样液刚配制的斐-林试剂2mL 振荡混匀5065 °C水浴加热2min呈现浅

2、蓝色还原糖：含有半缩醛疑基的糖类，主要是葡萄糖、果糖和 麦芽糖。蔗糖、淀粉和纤维素属于非还原糖。当质量浓度为Olg/mL的氢氧化钠溶液与质量浓度为OO50mL的硫酸铜溶液混合后，立即生成淡蓝色的Cu (OH) 2悬浊液。Cu (OH) 2与葡萄糖、果糖、麦芽糖等可溶性还原糖共热，能够生成砖红色的Cu?。沉淀。因此，利用该反应，可证明样液中 含可溶性还原糖。RCHO+2CU (OH) 2RC00H+Cu20 | +2H20甲液乙液等量混合，现用现配，切不可分开滴 加，或者久置后才用。制备组织样液砖红色的糖（还原糖）非（斐林试剂）常好吃知十#田洗净、去皮、切块 梨或苹果軽，放入研钵中研磨过滤滤液（

3、用单层纱布）显色反应向试管中加入2ml组织样液向试管中加入2ml振荡混匀 新配制的斐林试剂 或本尼迪特试剂5065 °C水 浴加热2min观察现象观察溶液颜色变化：浅蓝色T棕色T砖红色结论：生成砖红色沉淀，说明梨或苹果中含有还原糖。浅蓝色1 ml新配制的斐林试剂砖红色5065C水浴加热约 2min观察颜色变化【斐林试剂】:g/mL的CuSO4溶液，使用前等体积混合均匀(生成浅蓝色 的Cu (OH) 2悬浊液)，现配现用(时间一长，Cu (OH) 2沉淀在溶液底部无法发生反应。且需要水浴加热。还原糖的检测结果斐林试剂与可溶性还原糖在水浴热的条件下，生成砖红色的 CuqO沉淀。CHO+C

4、u(OH)2悬浊液-COOH+Cu2O；(砖红色)二、脂肪的检测（1）选材：经浸泡去种皮的花生种子。（2）检测过程:苏三（苏丹皿）送了我一个橘黄色的胭脂（脂肪）制片中黄粒 野橘额 Bp视有色切片：花生种子（浸泡3-4h）,去皮，将子叶削成薄片。选取最薄的切片置于洁净的载玻片中央 染色：在薄片上滴加23滴苏丹HI染液，染色23min洗去浮色：用吸水纸吸去染液，滴加体积分数为50%的酒精12滴制成临时装片：滴12滴蒸馅水，盖上盖玻片镜检观察：在低倍镜下寻找到已着色的 圆形小颗粒，然后用高倍镜观察。橘黄色小圆颗粒即为脂肪颗粒脂肪+苏丹皿（或苏丹IV）染;液 橘黄色（或红色）花生种子苏丹in染液23滴

5、组织切片切片机或 徒手切片低倍镜观察高倍镜观察;着色的脂肪颗粒注意事项:（1）若用花生种子作实验材料，必须提前浸泡34小时，浸 泡时间短了，不容易切片，浸泡时间过长，则组织太软，切 下的薄片不易成形，切片要尽可能的薄。（2）染色后一定要用50%的酒精溶液洗去浮色（酒精能溶解苏丹皿）,染色和洗浮色时间不宜过长。三、蛋白质的检测：双（双缩服）子（紫色）弹（蛋白质）(1)原理：蛋白质+双缩服试剂紫色络合物选林 黄豆、鸡蛋清（稀释）、牛奶、豆浆检测过程:2 ml组织样液2 ml双缩服试剂A液,34滴双缩服试剂B液，摇匀摇匀观察颜色变化组织k） d缩腺试剂 样液2 mLA液 1 mL 振荡摇匀缩腺试剂B

6、液4滴 壬-摇匀后变成紫双缩服定双缩服试剂将尿素加热，两分子尿素放出一分子氨而缩合成双缩服。 反应式为：nh21nh2fnh21CQ111 iC=()+c()«_ NH4-NH；s t1i1NH,nh2C()nh2双缩服(H2NOC-NH-CONH2)在碱性环境(NaOH)中 能和Cu2+作用生成紫色的络化物，这个反应叫做双缩服反应。 蛋白质分子中含有的肽键结构与双缩服结构相似，因此，蛋白 质也可与双缩服试剂发生颜色反应。2mL组织样液双缩腺试 剂 A 2mL双缩腺试 剂B 3-4滴在碱性条件(NaOH)下，蛋白质中的肽键(NHCO) 与Cu2+作用生生紫色络合物。因此，操作时，应先

7、加A再加B, 且A多B，如果B过量，Cu2+的蓝色就会遮盖生成的紫色。制备组织样液黄豆去皮、鸡蛋黄豆组织样液（或鸡蛋清稀释液） 浸泡 和:虧忌亠研磨切片稀释蛋清液怖秤鸡蛋清稀释液过滤滤液显色反应向试管中注入2ml组织样液向试管中注入2ml双缩腮试剂A加入3-4滴双缩 服试剂B观察现象观察颜色变化：无T紫色结论：加入双缩JK试剂A后，颜色呈现为无色，加入B后，变为 紫色，说明鸡蛋清中有蛋白质存在。对比黄豆逊曲4如或蛋滑稀释液4掘窗時观蹶色4振荡斗观IB色蛋白质的检测结果四、淀粉的检测：蓝(蓝色)点(淀粉)点(碘)注意事项：(1) 如果用鸡蛋清作为材料，则必须进行充分稀释，否则反应 后的产物会粘固

8、在试管内壁上，使反应不彻底，且试管不易洗 刷干净。(2) 【双缩服试剂】:A液：O.lg/mLNaOH, B液：0.01g/mL CuSO4o先加A液后加B液，且B不能过量，不需要加热。(3) 过量的双缩服试剂B会与试剂A反应，使溶液呈蓝色，而先加入1液2ml,摇匀；再加入B液3-4滴，摇匀。四、淀粉的检测：蓝(蓝色)点(淀粉)点(碘)四、淀粉的检测：蓝(蓝色)点(淀粉)点(碘)(1)原理：淀粉+碘蓝色(2)选材：马铃薯匀浆(2)拎涮荷趕.四、淀粉的检测：蓝(蓝色)点(淀粉)点(碘)四、淀粉的检测：蓝(蓝色)点(淀粉)点(碘)制备组织样液马铃薯块茎洗净、去皮、切块取5g,放入研钵中研磨过滤滤液

9、显色反应向试管中注入2ml组织样液加入5滴碘碘化钾观察现象观察溶液颜色变化:无色一 蓝色结论：溶液变蓝，说明马铃薯组织中有淀粉存在。鉴定物质生物材料所用试剂颜色变化鉴定物质生物材料所用试剂颜色变化还原糖脂肪蛋白质淀粉苹果、梨、白萝卜花生种子豆浆、牛奶、鸡蛋清面粉、马铃薯匀浆液斐林试剂苏丹in染液苏丹IV染液 双缩服试剂砖红色沉淀橘黄色红色紫色碘液蓝色注：鉴定还原糖需加热；脂肪的鉴定不一定要用显 微镜，要观察脂肪颗粒，则必须用显微镜。五、观察DNA、RNA在细胞中的分布实验原理：(1) DNA主要分布在细胞核内，RNA大部分存在于细胞质中。(2) 甲基绿和毗罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力

10、不同, 甲基绿使DNA呈现绿色，毗罗红使RNA呈现红色。(3) 利用甲基绿、毗罗红混合染色剂将细胞染色，可以显示 DNA和RNA在细胞中的分布。(4) 盐酸能够改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞， 同时使染色体中的DNA和蛋白质分离，有利于DNA和染色剂结 合。甲基绿使DNA呈现绿色，毗罗红使RNA呈现红色，通过观 察两种颜色出现的部位来判断DN A和RN A在细胞中的分布。方法步骤：(1)取材和制片在洁净的载玻片上滴1滴0.9%NaCl溶液用消毒牙签刮口腔内侧壁后涂抹在液滴上 将涂有口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯上烘干(2)水解：将烘干的载玻片放入盛有30mL8%盐酸的小烧杯中，30

11、76;C 水浴保温5 min(3)冲洗涂片：用蒸馄水的缓水流冲洗载玻片10秒吸水纸吸去载玻片上的水分(4)染色在载玻片上滴加两滴2滴用毗罗红，甲基绿染色剂，染 色5分钟吸去多余的染色剂，盖上盖玻片(5)观察：先低倍镜：选染色均匀，色泽浅的区域，移到视野中央。后 高倍镜：观察细胞核和细胞质的染色情况。人口腔上皮细胞00.9%生理盐水?8%盐酸?30°C水浴水解00冲洗染色观察思考与讨论:(1) 9%Nacl溶液的作用？保持空腔上皮细胞的正常形态。(2) 8%盐酸的作用？杀死细胞，改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞； 使染色体中的DNA与蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合。毗罗红甲

12、基绿染色剂要现用现配。该实验不宜选用绿色 植物叶肉细胞(有颜色)和其他有颜色的细胞(如鸡血细胞) 作为实验材料，因其会干扰颜色观察。鉴定物质试剂颜色变化注意事项还原糖斐林试剂砖红色沉淀甲液和乙液等量混合，现配现用，水浴加热淀粉碘液蓝色脂肪苏丹IH橘黄色做切片观察脂肪颗粒需要使用蛋白质苏丹IV红色显微镜双缩淼试剂紫色先A液后B液，B液不能过量双缩腺反应：含有两个或两个以上肽键的化合物与碱性硫酸 铜作用，生成蓝紫色的复合物斐林试剂与双缩腺试剂的比较成分斐林试剂乙液双缩服试剂A液B液0.1 g/mLNaO H溶液0.05 g/mLCuSO4溶液0.1 g/mLNaOH溶液CuSO4溶液0.01 g/

13、mL可溶性还原糖蛋白质或多肽甲乙两液等量混匀后立即 使用（现配现用）先加入A液ImL,摇匀, 再加入B液4滴（不能过 量），摇匀5065 °C水浴加热不需加热，摇匀即可样液变砖红色沉淀样液变紫色斐林试剂用的是甲液和乙液，须现配现用，混合均匀，水 浴加热。双缩服试剂用的是A液和B液，先加A液，后滴B 液，不用水浴加热。比较项目斐林试剂双缩腺试剂使用方法甲液和乙液混合均匀后方可使用，且现配现用使用时先加A液再加B液反应条件需5065 °C水浴加热不需加热即可反应反应原理还原糖中的醛基被Cu (OH)2悬浊液氧化，Cu (OH) 2被 还原为砖红色CiO沉淀具有两个以上肽键的化合

14、物 在碱性条件下与Cu2+反应生 成紫色络合物颜色砖红色紫色浓度相同点都含有NaOH、C11SO4两种成分，且所用NaOH浓度都是O.lg/mL斐林试剂与双缩腺试剂都由NaOH和C11SO4组成，但二者有如 下三点不同：溶液浓度不同。斐林试剂中NaOH的浓度为O.lg/mL,C11SO4的浓度为0.05g/mL；双缩腺试剂中NaOH的浓度为O.lg/mL, CuSO4的浓度为O.Olg/mLo使用原理不同。斐林试剂实质是新配制的Cu(OH)2溶液; 双缩腺试剂实质是在碱性环境下的Cu2+ o使用方法不同。使用斐林试剂时，先把NaOH溶液和CuSO4 溶液混合，然后立即使用。使用双缩服试剂时，先加入NaOH 溶液，然后再加入C11SO4溶液。比较项冃斐林试剂双缩