骨髓检查组化免疫分型遗传学

1、二、骨髓细胞学检查的内容、二、骨髓细胞学检查的内容、方法和临床意义方法和临床意义p293 骨髓标本采集要求 标本采集的注意事项标本采集的注意事项 ：形态检查抽吸量不超过0.2ml；同时进行多项检查应优先抽吸形态检查标本；涂片厚薄适宜，不少于4张，并同时制作配套的血片； 作好标记；如干抽，此时应考虑作骨髓活检；多部位或对有压痛点或根据X线检查提示进行穿刺，以提高阳性率 。 抽吸骨髓液时，病人有特殊酸痛感；有骨髓小粒和脂肪滴；显微镜下可见到骨髓特有细胞，如巨核细胞、成骨细胞、破骨细胞、浆细胞、组织嗜碱细胞、纤维细胞和大量红系、粒系幼稚细胞等。骨髓涂片、染色：骨髓涂片、染色：WrightWright

2、或或GiemsaGiemsa染色、双染色法染色、双染色法返回、低倍镜检查、低倍镜检查1 1、确定骨髓标本的取材和涂片制作是否满意、确定骨髓标本的取材和涂片制作是否满意 骨髓穿刺液制成涂片后，肉眼观察，在涂尾部见到骨髓穿刺液制成涂片后，肉眼观察，在涂尾部见到散在的约粟粒大小呈浅肉色半透明的散在的约粟粒大小呈浅肉色半透明的骨髓小粒骨髓小粒及少及少量量脂肪小滴脂肪小滴；在显微镜下见到较多；在显微镜下见到较多骨髓特有的细胞骨髓特有的细胞如各系幼稚细胞及巨核细胞等，是穿刺成功的标志。如各系幼稚细胞及巨核细胞等，是穿刺成功的标志。 如如骨髓小粒骨髓小粒较少或缺如，较少或缺如，骨髓特有成份骨髓特有成份减少，

3、减少，提示骨髓可能有不同的外周血液稀释，为取材不提示骨髓可能有不同的外周血液稀释，为取材不良良 如如脂肪滴脂肪滴增多，则表示红髓成份减少，反映增多，则表示红髓成份减少，反映骨髓增生减低骨髓增生减低插图 2 2、判断骨髓增生程度（表、判断骨髓增生程度（表4-2-74-2-7）骨髓增生程度通常以骨髓中有核细胞的量来反映。骨髓增生程度通常以骨髓中有核细胞的量来反映。采用五级法采用五级法 有核细胞：成熟红细胞有核细胞占全部细胞百分率有核细胞/1000个成熟红细胞常见原因范围平均范围平均极度活跃1:0.52.01:150238.96521.07351.96白血病明显活跃1:5121:101043.782

4、30.77114.51增生贫血增生活跃1.16321:20111021.5363.6735.34正常骨髓增生减低1:35701:500.517.4119.6110.53慢性再障明显减低1:3001:200100/HP返回 选择有核细胞分布均匀、结构清晰、着色良好的涂膜选择有核细胞分布均匀、结构清晰、着色良好的涂膜体尾交界处部位作油浸镜检查。体尾交界处部位作油浸镜检查。插图735735个为正常值个为正常值(1.5(1.5* *3cm3cm涂片）。涂片）。如疟原虫）如疟原虫）骨髓象分析步骤示意图返回【原理原理】 血细胞中的过氧化物酶（peroxidase，POX）能分解试剂中的底物H2O2，释出新

5、生态氧，使无色联苯胺氧化为蓝色联苯胺，后者与亚硝基铁氰化钠结合形成蓝黑色的颗粒，沉着于细胞质中。【结果结果】胞质中无蓝黑色颗粒者为阴性反应，出现细小颗粒、分布稀疏者为弱阳性反应，颗粒粗大而密集者为强阳性反应。【临床意义临床意义】过氧化物酶染色主要用于急性白血病类急性白血病类型的鉴别型的鉴别。 急性粒细胞白血病急性粒细胞白血病时，白血病细胞多呈强阳性反应；急性单核细胞白血病急性单核细胞白血病时呈弱阳性或阴性反应；急性淋巴细胞白血病急性淋巴细胞白血病则呈阴性反应。 因此，POX染色对急性粒细胞白血病急性粒细胞白血病与急性淋巴急性淋巴细胞白血病细胞白血病的鉴别最有价值。骨髓片骨髓片POXPOX染色染

6、色骨髓片骨髓片POXPOX染色染色APL：呈强阳性反应AML-M4：部分呈阳性反应， 部分成弱阳性反应AML-M5：呈弱阳性ALL：呈阴性，3+4+。3、铁粒幼细胞性贫血铁粒幼细胞性贫血时，铁粒幼细胞增多，并可见到环状铁粒幼细胞。 阳性为蓝绿色沉淀阳性为蓝绿色沉淀+血色病+AA、铁粒幼贫血+感染+AA、铁粒幼贫血+NBM正常骨髓IDA骨髓铁染色（骨髓铁染色（FeFe）MDS-RAS铁染色，图中所指为环形铁粒幼红细胞 表表4-2-104-2-10几种常见急性白血病的细胞化学染色结几种常见急性白血病的细胞化学染色结果果急淋急粒急单红白血病四、骨髓细胞免疫学分型四、骨髓细胞免疫学分型骨髓细胞免疫学分

7、型骨髓细胞免疫学分型骨髓细胞免疫学分型骨髓细胞免疫学分型骨髓细胞免疫学分型骨髓细胞免疫学分型骨髓细胞免疫学分型骨髓细胞免疫学分型骨髓细胞免疫学分型骨髓细胞免疫学分型骨髓细胞免疫学分型骨髓细胞免疫学分型ALL和和AML的免疫表型的免疫表型急性淋巴细胞白血病的免疫表型特点急性淋巴细胞白血病的免疫表型特点急性非急性非淋巴细胞淋巴细胞白血病的免疫表型特点白血病的免疫表型特点免疫组织化学染色免疫组织化学染色免疫分型（流式细胞仪）免疫分型（流式细胞仪）五、细胞遗传学分析五、细胞遗传学分析细胞遗传学分析细胞遗传学分析（一）染色体检查方法（一）染色体检查方法（二）染色体分析（二）染色体分析（二）染色体分析（二

8、）染色体分析长臂长臂3 3区区4 4带和第带和第2222号染色体长臂号染色体长臂1 1区区1 1带。带。（二）染色体分析（二）染色体分析急性髓细胞白血病的急性髓细胞白血病的MIC分型分型 Ph染色体 是CML的特征性异常染色体，检出率为90-95%，其中绝大多数为t(9;22)(q34;q11),称为典型易位。48,XY,+4,t(9;22),+Ph急性淋巴细胞白血病的急性淋巴细胞白血病的MIC分型分型 多看 1、数量 2、种类 六、如何学好血液细胞形态学多讨论 1、同事 2、老师多读书（细胞形态、发病情况） 1、常见病 2、罕见病多请教 1、教师 2、图谱多会诊 1、同级医院 2、上级医院多

9、沟通 1、临床 2、病人多观察 1、细胞少时（TB、R-S细胞） 2、细胞多时（特殊类型：如红细胞样瘤细胞）重视组化染色和其他实验检查 1、常规（POX或SBB、NAP、PAS、Fe)；少见(NSE中性、酸性、碱性，ACP）； 2、溶血检查。如疟原虫）如疟原虫） （ 三 ） 中 性 粒 细 胞 碱 性 磷 酸 酶 染 色（NAPNAP）（Neutrophilalkaline Phosphatase，NAP）【原理原理】偶氮偶联法。是血细胞内的碱性磷酸酶将基质液中的-磷酸萘酚钠水解，产生-萘酚与重氮盐偶联形成灰黑色沉淀，定位于细胞质内酶活性所在之处。（另有钙-钴法 略）【结果结果】碱性磷酸酶主要

10、存在于成熟阶段的中性粒细胞（分叶核及杆状核），其他血细胞均呈阴性反应。【参考值参考值】成人NAP阳性率10%40%；积分值4080（分）。临床意义1、感染性疾病：细菌感染细菌感染与病毒感染病毒感染的鉴别2 2、慢性粒细胞白血病、慢性粒细胞白血病的NAP活性明显减低，积分值常为0，类白血病反应类白血病反应的NAP活性极度增高。3 3、急性粒细胞白血病、急性粒细胞白血病时，NAP积分值减低；急性淋巴细胞白血病急性淋巴细胞白血病的NAP积分值多增高；急性单核细胞白血病急性单核细胞白血病时一般正常或减低。临床意义（ 七）糖原染色(periodic acid Schiff s reaction PAS )原理原理 ：过碘酸能将血细胞内的糖元氧化，生成醛基。醛基与Schiff 液中的无色品红结合，形成紫红色化合物，定位于细胞质内。结果结果 ：胞质中有红色颗粒、团块、均匀红色为阳性阳