临床微生物检验标本的正确采集及注意事项

1、标本质量的好坏直接影响诊断结果的正误, 不当标本可导致假阴性。 假阳性结果的出现。 因此正确采集临床微生物标本, 直接影响到微生物培养鉴定结果。 可靠的检验结果可以指导 临床诊断治疗,为临床科学用药和成功的感染控制提供依据,是正确、合理使用抗菌药物, 延缓细菌耐药, 减少抗菌药物滥用和监测医院感染的第一步, 也是最重要的一步。 为此应正 确采集各种细菌学标本。一、 血液标本的采集1、 皮肤消毒程序:a.75%酒精清洁局部皮肤 30s 以上。 b. 待皮肤干后, 再用 1%-2.%碘酊作用 30s 或 10%碘伏作用 90s 以上,从穿刺点中心部位向外画圈消毒,范围不应小于 3cm (直径 ,

2、且不能用手指触摸消毒后的皮肤。 c. 皮肤碘酒干后 (约 1min , 穿刺采集血液, 采血量成人 10-20ml ,婴幼儿 1-2ml 。儿童 3-5ml 。 d. 培养瓶消毒程序:70%酒精擦拭血培养 橡皮塞,作用 60s ;用无菌棉签清除橡皮塞表面残余酒精。用注射器无菌采血后立即在床旁 接种培养瓶,并迅速轻摇,充分混匀防止凝固,但又不可剧震以防溶血。立即送检,切勿冷 藏。一般情况下可把血培养瓶放 20-22。不放冰箱。2、注意事项:a. 怀疑菌血症应尽早采血,体温上升(38.5采血可提高阳性率, 但也要防止因等待而延误时机。 b. 对已经使用抗菌药物,而又不能停药者,也应在下次用药 前采

3、血。 切忌不要在静滴抗菌药物的静脉处采取血标本, 也不能从静脉导管及动脉插管中取 血。 c. 培养基与血液之比以 10:1为宜,以稀释血液中的抗生素,抗体等杀菌物质;有人主张 对接受抗菌药物治疗的病人, 培养基与采血量之比可为 20:1或大于这个比例。 d. 近年研究表 明, 将血液注入血培养基前, 更换针头反而易导致污染。 e. 每例至少采血两次,间隔 0.5-1h , 以利于提高阳性率和区分感染菌与污染菌。 f. 疑为细菌性心内膜炎及布鲁氏病的病人,以肘 动脉或股动脉采血为宜,除在发热期采血外,并要多次采血(24h3-4次和增加采血量(可 增加 10ml 。 g 采血后立即送检,如不能立即

4、送检可置室温,而不能放置冰箱。 h 如临床表 现很似败血症,而血培养多次阴性者,提示考虑厌氧菌和真菌感染的可能。二、呼吸道痰标本1、采集方法:a. 清晨起床后用凉开水漱口多次,以除去口腔内大量杂菌,用力咳 出肺深部的脓痰, 置于清洁干燥容器中送检。 b. 痰量极少者可用 45 3%-5%的氯化钠溶液约 5ml 雾化吸入 min, 进行导痰。对于咯痰量少的幼儿,可轻轻压迫胸骨上部的气管,当其咯痰 后用无菌棉棒采集标本。 c. 咳嗽无力或昏迷病人,可用吸痰管经鼻腔或口腔经气管腔内吸引 痰液送检。 d. 气管切开者可以深入透气孔中取痰。 e. 可用支气管镜直接在病灶部位采集高浓 度的病原菌。 f.

5、用无菌导管经鼻腔插入气管镜内,缓慢注入无菌蒸馏水 5ml ,取出导管。留 取患者在 3h 内咳出的痰液,放入无菌容器中送检。2、注意事项:a. 痰标本的采集以晨痰为准,此时患者痰量较多且含菌量也多。 b. 标本采集后立即送检,若不能及时送检者,可暂存 4冰箱。若晚 1-2h 接种,会失去苛氧 菌,并使得革兰阴性菌过分生长。 c. 可接受的标本:痰;支气管灌洗液,支气管刷,支气管 活检;肺吸出物和肺活检。不能接受的标本:唾液; 24h 留的痰(结核杆菌培养除外 ;拭 子。 d. 痰标本的质量评价:(用显微镜筛选在低倍镜下,检查鳞状上皮细胞,至少 10个视 野,集中在有白细胞处,合格标本为白细胞与

6、鳞状上皮细胞比例大于 2:1。三、鼻咽喉拭子标本A. 用湿的拭子(生理盐水 ;需插两个鼻孔;深入 3.3cm 左右,转动 4-5次;以上 用于诊断金黄色葡萄球菌暴发时的鼻带菌者。B. 咽拭子、口腔拭子(1采集方法(到细菌室取专用拭子 a. 患者清水漱口后, 由检查者将其舌外拉, 用棉拭子将咽后壁或悬雍垂的后侧反复擦拭数次; b. 化脓性扁桃体炎、 口腔念珠菌病时, 直接用棉拭子在病灶部位擦拭; c 插入运送培养基中立即送检, 防止干燥。 (2注意事项 a. 棉拭子应避免触及舌、口腔黏膜和唾液 ;b. 采集标本前数小时不可用消毒药物漱口或接触病灶局部。六、胃肠道1、粪便 a. 采集方法选取脓血、

7、黏液粪便 2-3g ,液体粪便取絮状物 1-2ml 。盛于灭 菌瓶中或蜡纸盒中及时送检。 b. 注意事项标本要采集新鲜的,陈旧标本影响阳性检出率; 切忌粪尿混合; 若要分离阿米巴, 标本要立即送检并注意保温; 运送培养基可提高阳 性率;分离难辨梭菌时需选不成形或水样便;霍乱弧菌、大肠杆菌 157感染的腹泻便 则为水样便或血性便; 标本在病理早期或治疗前采集; 一般认为用抗菌药三天后, 标本 培养病原菌阴性。2、肛拭子在无法获得粪便的情况下,可用经无菌甘油水或无菌生理盐水湿润的肛 拭子插入肛门 4-5cm (幼儿 2-3cm 处,轻轻旋转擦取直肠表面黏液后取出,置运送培养基 中送检。七、泌尿道根

8、据卫生部医学感染诊断标准 (试行通知,泌尿系统临床诊断为:患者出现 尿频、尿急、尿痛等尿路刺激症状,或有下腹触痛、肾区叩痛、伴或不伴发热,并具有下列 情况之一:(1尿检白细胞男性 5个 /高倍视野,女性 10个 /高倍视野,插导尿管患者应 结合尿培养; (2临床已诊断为泌尿道感染,或抗菌治疗有效而认定的泌尿道感染。1、 中段尿 (1 采集方法女性 采样前用肥皂水或 0.1%的高锰酸钾溶液冲洗外阴, 留取中段尿 10ml 于灭菌容器内。 男性用肥皂水清洗尿道口, 或 0.1%的碘伏溶液消毒尿道 口,灭菌纱布擦干,留取中段尿 10ml 于灭菌容器内。 (2注意事项导尿虽然可以减少污 染, 但是多次

9、重复导尿可以造成逆行性感染, 因此近年来大多采用中段尿。 女性病人最好 采取膀胱截石位由护士采取标本, 减少污染。 采集标本以晨起第一次尿液为佳。 采集标 本后,若不能在 1h 内送检,暂放 4冰箱,但不能超过 8h 。若尿液标本在室温下放置超过 2h ,即使接种培养结果细菌数 104 cfu/ml获 103cfu/ml,也不能作为诊断依据,应重新留取 标本送检。 疑为尿道炎时可将最初 3-4ml 尿液收集在灭菌容器内。 该尿中即使有少数细菌, 如反复检查为同一细菌,也应考虑为病原菌。儿童在多数情况下,仅冲洗外阴是不够的, 故采集标本较为困难。如果尿内细菌明显增多,可以高度怀疑为尿路感染,无菌

10、则可否定。 若细菌培养结果为两种或两种以上细菌, 需考虑污染可能, 建议重新留取标本送检。 尿 液中不得加入防腐剂,消毒剂否则影响阳性检出率。2、膀胱穿刺采集法避免污染是很困难的,培养结果与病情不符时,或尿厌氧菌培 养,或婴幼儿中段尿采集困难时,可以用耻骨上穿刺膀胱内采尿。3、留置导尿者采集法拔去闭式引流的集尿袋,弃去导尿管前段尿液,留无污染的 膀胱内尿液 10ml 送检。不可从集尿袋下端留取标本。八、脑脊液1、 采集方法由临床医师以无菌方法收集脑脊液 3-5ml (细菌 1ml , 真菌 2ml 抗酸杆 菌 2ml ,病毒 1ml 盛于无菌试管或小瓶中立即送检。2、注意事项(1采集标本后立即

11、送检,因脑膜炎奈瑟菌离体后迅速自溶,肺炎链 球菌及流感嗜血杆菌也易死亡; (2 疑为上述细菌感染时,应注意保温,不可置冰箱或低温 保存。十、穿刺液标本穿刺液包括胸水、腹水、心包液、关节液、鞘膜液。1、采集方法由临床医师行穿刺术抽取。胸腹水可收集 5-10ml, 心包液、关节液收集2-5ml ,置于无菌含抗凝剂的试管或小瓶中,充分混匀后,立即送检。抗凝剂 10%EDTA二 钠盐,标本与抗凝剂之比 10:1。2、注意事项:标本采集应在患者用药之前或停止用药 1-2天后进行;不能立即送检可置 4冰箱保存;疑为淋病性关节炎患者的关节液,采集后立即送检,或床旁培 养为佳;不能用棉拭子浸蘸标本送检。十一、

12、脓汁及病灶分泌物1、 伤口:表面伤口拭子采集方法及注意事项 仅限于皮肤与皮下组织, 包括手 术切口、褥疮溃疡、新生儿脐炎、婴儿脓疮病。用无菌生理盐水或 75%的酒精擦去病灶 表面渗液; 用无菌棉拭子抹去及较深部的脓汁分泌物或组织送检; 采集褥疮溃疡标本时 应采集褥疮边缘的脓性分泌物, 拭子放在运送培养基中立即送检, 不要采集创口表面的渗液。 伤口、 脓肿、 窦道、 坏疽组织采集方法及注意事项闭锁性脓肿用碘酒和酒精消 毒皮肤后, 用灭菌注射器穿刺抽取全部脓液送检, 疑为厌氧菌感染时, 排去针管内空气将针 头插入灭菌橡胶塞内送检; 伤口处若有脓及渗出物要用无菌棉签深入各种窦道中擦拭, 用 小刀刮取

13、,穿刺抽吸或手术切除获得深处伤口标本;当创伤出血时,敷有药物在 2h 以内 及烧伤在 12h 内均不应采集标本, 此时获得阳性结果机会甚少。 采集标本注意观察脓汁及 分泌物性状、色泽、气味等。可为培养鉴定提供依据。烧伤创面烧伤创面需要脓性分泌物, 焦痂迅速分离变棕黑、 黑或紫罗兰色, 烧 伤边缘水肿。患者发烧 >38或低体温 <36,合并低血压。用无菌生理盐水冲洗伤口创 面。 由于创面部位不同, 细菌种类也不尽相同, 要用灭菌棉拭子采集多个部位的炎症区送 检。采集痂下变黑或变性的不健康区边缘或引流液等做定量培养及组织活检。2、厌氧伤口拭子厌氧专用棉棒或玻璃棒触及深部脓汁;可用注射器

14、抽吸,排 去针管内空气将针头插入灭菌橡胶塞内送检; 立即送检, 送检过程中必须保持在无氧条件; 不宜做厌氧菌培养的有痰、喉拭子、鼻咽拭子、齿龈拭子、直肠、阴道和宫颈拭子以及回 肠、结肠造瘘术的流出物,胃、小肠及大肠内容物等。3、尿道口分泌物拭子男性用无菌纱布擦拭和清洗尿道口,然后采取从尿道口溢 出的脓性分泌物; 采集前列腺液时, 先将尿道、 膀胱冲洗, 然后从肛门用手指按摩前列腺, 促使前列腺液溢出; 女性病人先用灭菌纱布或棉拭子仔细擦拭或清洗尿道口, 然后从阴道 内诊压迫尿道, 使分泌物溢出; 取子宫颈分泌物,先用内窥镜扩张阴道, 然后从宫颈口用 灭菌棉拭子采取分泌物,尽量避免被阴道宫颈附近正常菌群