生物学指标的测定 ppt课件

1、2.5 生物学目的的测定细菌总数的测定细菌总数的测定 指指1ml水或水或1g样品，在普通琼脂培育基中经样品，在普通琼脂培育基中经37、 24h培育后所生长的细菌菌群总数。培育后所生长的细菌菌群总数。 评定水体污染程度目的之一。评定水体污染程度目的之一。 生活饮用水卫生规范生活饮用水卫生规范GB5749-2019规定每毫升水规定每毫升水的细菌总数不得超越的细菌总数不得超越100个。个。 水中通常存在的细菌大致可分为三类：水中通常存在的细菌大致可分为三类： 天然水中存在的细菌。普通的是荧光假单天然水中存在的细菌。普通的是荧光假单孢杆菌、绿脓杆菌，普通以为这类细菌对安孢杆菌、绿脓杆菌，普通以为这类细

2、菌对安康人体是非致病的。康人体是非致病的。荧光假单胞杆菌细菌分类 肠道细菌。它们生存在温血动物的肠道中，故粪便中大肠道细菌。它们生存在温血动物的肠道中，故粪便中大量存在。水体中发现这类细菌，可以以为已遭到粪便的污量存在。水体中发现这类细菌，可以以为已遭到粪便的污染。致病性肠道细菌有沙门氏杆菌伤寒和副伤寒菌、染。致病性肠道细菌有沙门氏杆菌伤寒和副伤寒菌、B型炭疽菌、痢疾志贺氏菌和霍乱弧菌等。型炭疽菌、痢疾志贺氏菌和霍乱弧菌等。 土壤细菌。当洪水时期或大雨后地表水中较多。它们在土壤细菌。当洪水时期或大雨后地表水中较多。它们在水中生存的时间不长，在水处置过程中容易被去除。腐蚀水中生存的时间不长，在水

3、处置过程中容易被去除。腐蚀水管的铁细菌和硫细菌也属此类。水管的铁细菌和硫细菌也属此类。大肠杆菌铁细菌平板计数法 国标规定的方法为平板计数法国标规定的方法为平板计数法 检验方法：在玻璃平皿内，接种一毫升水样或稀释水样于检验方法：在玻璃平皿内，接种一毫升水样或稀释水样于加热液化的营养琼脂培育基中，冷却凝固后在加热液化的营养琼脂培育基中，冷却凝固后在37C培育培育24小时，培育基上的菌落数或乘以水样的稀释倍数即为细菌小时，培育基上的菌落数或乘以水样的稀释倍数即为细菌总数。总数。 精度高，耗时长。为了简化检测程序、缩短检测时间，国精度高，耗时长。为了简化检测程序、缩短检测时间，国内外学者进展了大量的快

4、速检测方法的研讨，提出了阻抗内外学者进展了大量的快速检测方法的研讨，提出了阻抗检测法、检测法、Simplate TM全平器计数法、微菌落技术、纸片全平器计数法、微菌落技术、纸片法等检测方法。法等检测方法。平板计数法总大肠菌群的测定 总大肠菌群：需氧及兼性厌氧的在总大肠菌群：需氧及兼性厌氧的在3535、48h48h之内生长时之内生长时能使乳糖发酵、产酸产气的革兰阴性无芽胞杆菌，以每升能使乳糖发酵、产酸产气的革兰阴性无芽胞杆菌，以每升水样中所含有的大肠菌群的数目表示。总大肠菌群既包括水样中所含有的大肠菌群的数目表示。总大肠菌群既包括存在于人及动物粪便的大肠菌群，也包括存在于其他环境存在于人及动物粪

5、便的大肠菌群，也包括存在于其他环境中的大肠菌群。中的大肠菌群。 包括包括: :大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌 生活饮用水卫生规范生活饮用水卫生规范GB5749-2019GB5749-2019规定每规定每100mL100mL水不得水不得检出总大肠菌群。检出总大肠菌群。革兰氏染色法 细菌学中广泛运用的一种鉴别染色法。未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难察看。染色后细菌与环境构成鲜明对比，可以清楚地察看到细菌的形状、陈列及某些构造特征，而用以分类鉴定。 革兰氏染色属复染法。 革兰氏染色法可以把细菌分为两大类，革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈

6、红色。 染色的差别主要由阴性与阳性细菌细胞壁的差别引起。革兰氏染色法 先用龙胆紫亦称结晶紫来染细菌，一切细菌都染成了紫色 涂以革兰氏碘液，来加强染料与菌体的结合 用95%的酒精来脱色2030秒钟，有些细菌不被脱色，仍保管紫色，有些细菌被脱色变成无色 用番红或沙黄复染1分钟，结果已被脱色的细菌被染成红色，未脱色的细菌依然坚持紫色，不再着色 凡被染成紫色的细菌称为革兰氏阳性菌G+菌；染成红色的称为革兰氏阴性菌G-菌。 常见的革兰氏阳性菌：葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、炭疽杆菌、白喉杆菌、破伤风杆菌等； 常见的革兰氏阴性菌：痢疾杆菌、伤寒杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、百日咳杆菌及霍乱弧菌等。多

7、管发酵法配制培育基在密封瓶中的脱水培育基废品要存放在大气湿度低、温度低于 30的暗处，存放时应防止阳光直接照射，并且要防止杂菌侵入和液体蒸发。当培育液颜色变化，或体积变化明显时废弃不用。初步发酵实验水样分别接种到盛有乳糖蛋白胨培育液的发酵管中。在 370.5下培育24h2h。产酸和产气的发酵管阐明实验阳性。如在倒管内产气不明显，可轻拍试管，有小气泡升起的为阳性。多管发酵法复发酵实验微振荡初发酵实验阳性结果的发酵管，用 3mm接种环或灭菌棒将培育物转接到 EC 培育液中。在 44.50.5温度下培育 24h2h水浴箱的水面应高于试管中培育基液面 。接种后一切发酵管必需在 30min 内放进水浴中

8、。培育后立刻察看，发酵管产气那么证明为粪大肠菌群阳性。多管发酵法结果计算滤膜法 滤膜是一种微孔性薄膜。 将水样注入已灭菌的放有滤膜孔径 0.45m的滤器中，经过抽滤，细菌即被截留在膜上，然后将滤膜贴于品红亚硫酸钠培育基上，37温度下进展培育，计数滤膜上生长的此特性的菌落数，计算出每 1L 水样中含有大肠菌群数。 滤膜法 将滤膜放入烧杯中，参与蒸馏水，置于沸水浴中煮沸灭菌三次，每次 15min。前两次煮沸后需改换水洗涤 23 次，以除去残留溶剂。也可用 121灭菌 10min，10min 一到，迅速将蒸汽放出，这样可以尽量减少滤膜上凝集的水分。滤器、接液瓶和垫圈分别用纸包好，在运用前先经 121高压蒸汽灭菌 30min。滤器灭菌也可用点燃的酒精棉球火焰灭菌。 以无菌操作把滤器安装装好。 过滤： 用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘， 将粗糙面向上， 贴放在已灭菌的滤床上， 稳妥地固定好滤器。 将适量的水样注入滤器中，加盖，开动真空泵即可抽滤除菌。 滤膜法 由滤膜上生长的大肠菌群菌落综述和所取过滤水样量，按下式计算1L水中总大肠菌群数： 其他细菌的测定 生活饮用水卫生规范GB5749-2019规定每100