基因诊断与治疗第6组(1)

1、膀胱癌组织中TERE1/UBIAD1表达及Ras-MAPK信号通路分析殷享亮、刘文彬、韩学超、许小兵、刘长涛膀胱癌介绍n据国际癌症组织机构统计，膀胱肿瘤作为泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，是目前导致人类因肿瘤死亡的第四大原因。n在中国，膀胱癌是排列第十位的常见肿瘤。n膀胱癌具有多发性、复发性的特点。TERE1/UBIAD1简介n移行上皮反应基因(Tansitional epithelial response gene，TERE1)是人类一类新的直接与前列腺癌、膀胱癌有关的基因。该基因编码一个含338个氨基酸，分子量约为36.skDa的蛋白质，广泛表达于人类各种正常组织的基因，特别是泌尿系统上皮如

2、前列腺、膀胱、肾脏等TERE1具有多个疏水结构域，因其编码UbiA类异戊系转移酶，又称之为UBIAD1n研究表明在前列腺癌、肾癌及癌细胞系中，TERE1基因和蛋白表达水平显著下降，而通过基因转染在前列腺癌细胞中过表达TEREI，能显著减少肿瘤的增殖和维持基因组的稳定n推测TERE1/UBIAD1基因可能是一类新的抑癌基因目的n检测分析临床膀胱癌组织和正常膀胱组织TERE1/UBIAD1表达及Ras-MAPK信号通路的变化。方法n采用免疫组化检测分析人正常膀胱组织及膀胱癌组织中TERE1和端粒逆转录酶(hTERT)的蛋白表达水平:用RT-PCR及 westemblotting检测膀胱癌组织中TE

3、REI和hTERT的表达水平及Ras-MAPK信号通路关键分子的变化nhTERT作为端粒酶活化的限速酶，在正常组织的增生和肿瘤的发生中起着至关重要的作用。研究表明人类多种肿瘤组织中均可检测到hTERT的活性表达，而在正常膀胱组织中却未检测到。膀胱癌及正常膀胱组织标本中TEREI与hTERT免疫组化结果结果-免疫组织化学染色分析 HE染色nNormal bladder Bladder carcinomaTERE1(正常膀胱组织) （膀胱癌组织）hTERT正常膀胱组织 膀胱癌组织膀胱癌及正常膀胱组织标本中膀胱癌及正常膀胱组织标本中TERE1与与 hTERTmRNA水平水平Lanel:200bpMa

4、rker:Lane2:正常膀胱TERE1(500bp)mRNA水平;Lane3:膀胱癌标本中TERE1mRNA水平;Lane4:正常膀胱组织hTERT(182bP)mRNA水平;Lane5:膀胱癌标本中hTETmRNA水平。下方胶图:对应组织中内参 GAPDHmRNA水平。n膀胱癌组织中TERE1表达水平相对于正常膀胱组织明显降低，nTEREI表达水平与癌组织的分级分期密切相关，随着肿瘤恶性程度增加，癌组织TEREI表达下降越明显。n膀胱癌组织中检测到hTERT明显表达，而正常膀胱组织未检测到hTERT表达。膀胱癌及正常膀胱标本中TERE1与hTERT蛋白表达n相对正常组织，膀胱癌中TERE1

5、蛋白表达明显下降，统计分析具有显著性差异，P0.01，高恶性度膀胱组织中未检测到TERE1蛋白表达。n正常膀胱组织没有检测到hTERT蛋白表达水平，而膀胱癌组织中hTERT明显高表达。Ras-MAPK信号通路中关键分子在组织中蛋白表达水平n与正常膀胱组织相对比，膀胱癌组织中磷酸化ERK、磷酸化MEK(1/2)、磷酸化B-Raf(Ser455)及磷酸化C-Raf(Ser338)蛋白表达水平明显增加，有显著性差异(P0.05);n而膀胱癌组织与正常膀胱组织中总的ERK、MEK(1/2)、A一Raf、B一Raf、C一Raf及磷酸化A一Raf(Ser299)蛋白表达水平没有明显差异。n未检测到膀胱癌组

6、织中磷酸化的C-Raf(Ser259)和磷酸化的C-Raf(Ser289/296)蛋白表达。讨论n为探讨TEREI与膀胱癌的关系，n我们的免疫组化实验结果显示:膀胱癌T2、T3一4期TEREI染色阳性率与Ta、TI期阳性率相比，具有显著性差异。n根据组织学分级，G3一4期TEREI染色阳性率与G2期TEREI相比具有显著性，与GI期阳性率相比差异具有极显著性。讨论n根据逆转录PCR和免疫印迹结果显示：膀胱癌组织中TEREI核酸转录与蛋白翻译水平与正常膀胱组织相比明显下降。n提示TERE1与膀胱癌相关。随着肿瘤恶性程度增加，癌组织TERE1表达下降越明显，呈负相关。TERE1与膀胱癌的关系n我们采用免疫印迹分析了膀胱癌组织中Ras-MAPK信号通路中一系列关键分子的变化。发现:n膀胱癌组织中磷酸化ERK、磷酸化MEK(1/2)、磷酸化B-Raf(Ser455)及磷酸化e-Raf(Ser338)蛋白表达水平明显增加，有显著性差(P0.05);TERE1与膀胱癌