上海科华HBsAgELISA两步法

1、 医院检验科免疫室乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）标准操作规程文件编号： 生效日期： 年 月 日版本：第1版第 页，共页1、 检验申请 单独检验项目申请：乙型肝炎病毒表面抗原（缩写HBsAg）测定；组合项目申请：肝炎标志物检查组合。临床医生根据需要提出检验申请。2、 样本采集与处理2.1 样本采集 常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中，或采用含分离胶的真空采血管。也可采集血浆，用肝素、EDTA或枸橼酸盐抗凝。 检验申请单和血样本试管标上统一且唯一的标识符。 急诊样本采集后，在检验申请单上填写样本采集时间。 样本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责样本的接收并记录样

2、本的状态，对不合格样本予以拒收。 下列样本为不合格样本.1 样本量不足：少于0.3ml的全血样本，或少于0.1ml的血清或血浆。.2 对检测结果可能有干扰的样本，包括严重溶血、严重浑浊的样本。.3 无法确认样本与申请单对应关系的。.4 其他如标识涂改、样本试管破裂等。2.2 样本保存2.2.1接收样本后放置1-2h后将样本离心分离出血清或血浆，避免溶血。离心必须达到3000rpm 15min，离心后的血清中不能含有颗粒物和微量纤维蛋白。2.2.2 样本保存时间：室温（15-25）下可稳定48h，普通冰箱中（2-8）稳定7d，在-20最多可保存4周。避免反复冻融。不可使用热灭活的样本。2.2.3

3、已完成测试的样本保持完整的识别号，置4-8冰箱内保存7d。2.3 样本采集的注意事项采血前使受检者保持平静、松弛，避免剧烈活动。 医院检验科免疫室乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）标准操作规程文件编号： 生效日期： 年 月 日版本：第1版第 页，共页3 检验原理本试剂盒采用抗-HBs包被反应板，加入待测样本，经孵育后，加入抗-HBs-HRP，当样本中存在HBsAg时，该HBsAg与包被抗-HBs结合并与抗-HBs-HRP结合形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。4试剂及其他用品4.1试剂：乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（上

4、海科华生物工程股份有限公司生产），试剂盒药品批准文号：国药准字S10910114(48人份)； 国药准字S10910113(96人份)。未打开的试剂盒保存于2-8，不可冻存。开启的包被反应板放入干燥剂密封后在2-8保存并尽快使用。4.2 试剂盒组分微孔反应板 HBsAg阴性对照HBsAg阳性对照 酶结合物显色剂A 显色剂 B 终止液 洗涤液 （ 蒸馏水1：25稀释）封片纸 说明书 4.3 其他试剂及用品 加液器： 型号。离心机： 型号。温箱（或水浴箱）： 型号。洗板机： 型号。 酶标仪： 型号。5 室内质控与室内质控规则5.1 质控品：采用卫生部临床检验中心临床免疫室或其他单位提供的免疫质控血

5、清，浓度 IU/ml。 医院检验科免疫室乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）标准操作规程文件编号： 生效日期： 年 月 日版本：第1版第 页，共页5.2 质控品重建方法：采购来的质控品按每周用量分装-20冻存，复融后充分颠倒混匀。5.3 质控品测定：在每一次（板）样本中测定质控血清。5.4 质控规则：绘制质控图，求出SD和CV值。6检测步骤（1） 洗涤液配制： 将浓缩洗涤液用蒸馏水（或去离子水）作1：25稀释。（2） 加样 加入75微升待测样本和阴、阳性对照于反应孔中（共预留阴性对照3孔、阳性对照1孔、建议预留空白对照1孔。），用封片纸覆盖反应板后，将反应板置37孵育60分钟。（3）

6、取出反应板，撕去封片，在已加入待测样本和阴、阳性对照的孔中加入50微升酶结合物；在微孔震荡器上震荡10秒钟，或手工轻轻震荡10秒钟; 用封片纸覆盖反应板后，将反应板置37孵育30分钟。（4） 洗板手工洗板：弃去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置30-60秒，甩干，重复5次后，在干净的吸水纸上拍干。洗板机洗板：采用 洗板机洗板，选择洗涤5次程序，用配置的工作浓度洗涤液注满每孔，每次工作浓度洗涤液在反应微孔中的停留时间为30-60秒，并确保每次吸净无残留，洗完后在干净的吸水纸上拍干。（5） 显色每孔加显色剂A液、B液各50微升，充分混匀后封板，置37孵育30分钟。（6） 终止每孔加入50微升终止液，

7、震荡反应板5秒钟，使之充分混匀。 医院检验科免疫室乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）标准操作规程文件编号： 生效日期： 年 月 日版本：第1版第 页，共页（7） 比色使用 酶标仪，波长450nm。（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm或630nm相近的波长。）若需扣除显色剂空白，则先用显色剂空白对照孔校零，然后读取各孔OD值。7结果判断 Cutoff值计算：COV=阴性对照平均OD值 +0.100当S/COV1.0，说明该待测样本HBsAg结果为阳性。当S/COV1.0，说明该待测样本HBsAg结果为阴性。8检验结果的报告及范围8.1 结果的报告8.1.1 结果经审核后，确

8、认准确无误后发出报告。8.1.2 报告单上标明结果的参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的信息。8.1.3 如收到样本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。8.2临界值：对临界值样本或阳性样本再以双孔重复试验确定它的结果。如果重复检测都是临界性结果的样本建议对其进行跟踪检测。9操作性能9.1从冷藏环境中取出的试剂盒需平衡至室温后方可使用，余者应按前述方法保存和使用。在平衡试剂的同时，待测样本需平衡至室温后再行测试。9.2 使用前试剂应摇匀。9.3 显色过程必须封片。所有封片纸不能重复使用。9.4 结果判断须在反应终止后10分钟内完成。9.5 不同批号的试剂不可

9、混用。9.6 洗板机洗板时应时常检查加液头，确保其畅通无堵塞；洗板时所用的吸水纸请勿反复使用。洗板机的管路用纯化水冲洗，以防堵塞和腐蚀。 医院检验科免疫室乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）标准操作规程文件编号： 生效日期： 年 月 日版本：第1版第 页，共页9.7 待测样本不可用NaN3防腐。9.8 本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。10参考范围及医学决定水平阴性结果：提示没有检测到与乙型肝炎病毒感染相关的HBsAg浓度水平。11临床意义11.1乙型病毒性肝炎是一种重要的公众危害性疾病，据估计全球范围内目前大约有3亿乙型肝炎病毒携带者。感染乙型病毒性肝炎可引起广泛的急、慢性肝脏疾病，流行病学研究已经清楚地表明乙肝病毒与肝细胞癌的发生有联系。11.2感染乙型肝炎病毒后，机体会产生各种不同模式的抗原、抗体血清学免疫应答反应。通过监测这些标志物，不仅可以诊断感染，而且还可以判断疾病的进程和预后。HBsAg是HBV感染后第一个出现的标志物，是提示血清有潜在传染性的最好的间接指标。12结果审核以及分析与相关项目的联系12.1由资深专业人员负责检验结果的审核。12.2审核者认真审核每一个测定结果，对发出报告结果的可