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文档简介

1、选 修 1 专 题 1与传统发酵有关的几类微生物比较酵母菌醋酸菌毛霉乳酸菌生物学分类真核生物r原核生物真核生物原核生物代谢类型异养兼性厌氧日苦至金 打q r rm干I日苦至金 打q r rm干I异养厌氧适宜温度20C左右30 c -35 C15 C-18 c30 C -40 C(主要生殖方式);适宜条件下出芽生殖二分裂生殖抱子生殖二分裂生殖|主要用途酿酒、发面酿醋制作腐乳制作酸奶、泡菜果酒和果醋的制作1 .制作原理和发酵条件的比较比较果酒制作果醋制作制作原理酵母菌先在育氧条 件下大量繁殖,再在无 氧条件下进行酒精发酵醋酸菌在氧气、糖源充足时 ,将 糖分解成醋酸;当缺少糖源时,将乙 醇变为乙醛,

2、再将乙醛变为醋酸反应式有氧条件: 无氧条件:糖源充足时: 缺少糖源时:最适发酵温度18 C25 C30 C 35 C对氧的需求前期:需氧 后期:不需氧需充足氧PH酸性环境酸性环境发酵时间1012 d78 d2 .装置图解读充气口:在醋酸发酵时连接充气泵进行充气。排气口:排出酒精发酵时产生的CO2。出料口:是用来取样的。与瓶身相连的长而弯曲的胶管:加水后防止空气中微生物的污染。腐乳的制作1 .原理毛霉等微生物能产生蛋白酶和脂肪酶。蛋白酶能将蛋白质分解成小分子肽和氨基酸; 脂肪酶能将脂肪水解为甘油和脂肪酸。2 .流程让豆腐上长出毛霉一加盐腌制一加卤汤装瓶一密封腌制。3 .影响腐乳品质的条件(1)含

3、水量:以70%为宜。(2)发酵温度:1518 Co(3)添加物质添加物质盐酒香辛料MS长满毛霉的豆腐块(毛坯)与盐的质量分数比为 5 : 1。卤汤中酒的含量控 制在12%左右盐的浓度过高,影响腐乳口 味;浓度过低,不足以抑制微生 物生长,导致腐乳腐败变质。 装 瓶时分层加盐,并随层数的增加 而增加盐量,在瓶口表面铺盐厚 些,以防止杂菌从瓶口进入。酒精含量越局,对 蛋白酶的抑制作用也越 大,使腐乳成熟期延长; 酒精含量过低,不足以 抑制微生物生长,豆腐 易腐败,难以成块。作用杀菌、防腐与调味(4)发酵时间:前期发酵和后期发酵的作用不同,所需时间应控制好,太长或太短都会影 响腐乳的品质。制作泡菜并

4、检测亚硝酸盐的含量1 .泡菜的制作原理泡菜的制作离不开乳酸菌。在无氧条件下,乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸。2 .泡菜腌制过程中,乳酸菌、乳酸和亚硝酸盐的变化发酵时期乳酸菌乳酸亚硝酸盐发酵初期少(有O2,孚L酸菌 活动受抑制)少增加(硝酸盐还原 菌的作用)发酵中期最多(乳酸抑制其它 菌活动)积累、增多、pH下降下降(硝酸盐还原 菌受抑制,部分亚 硝酸盐被分解)发酵后期减少(乳酸继续积 累,pH继续下降, 抑制其活动)继续增多, pH继续下 降下降至相对稳定 (硝酸盐还原菌 被完全抑制)乳酸菌、乳酸、亚硝酸盐的数量随时间变化的曲线如下酸发醉时间发辞时间发酵时间心硝酸盐含什3 .测定亚硝酸盐含量的原理和

5、操作流程(1)原理:在盐酸酸化条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后,与N-1-泰基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料。将显色反应后的样品与已知浓度的标准显色液进 行目测比较,可以大致估算出泡菜中亚硝酸盐的含量。比色法。(2)操作流程配制溶液制备标推显色液"制备样品处理液一比色选修1专题2微生物的实验室培养1 .培养基种类(1)按物理性质分类1培养基种类特点用途1液体培养基不加凝固剂工业生产固体培养基卜口凝固剂(如琼脂)微生物分离、鉴定,活菌计数,菌种保藏(2)按功能分类种类制备方法原理用途举例选择培养基培乔基中加 入某些化学物质依据某些微生物对 某些物质的抗性而设计从众多微

6、生物中分离所 需的微生物加入青霉素分离 得到酵母菌和霉菌鉴别培养基培乔基中加 入某种试剂或化 学药品依据微生物产生的 某种代谢产物与培养基 中的特定试剂或化学药 品反应,产生明显的特 征变化而设计鉴别不同 种类的微生物伊红一美蓝培养 基可以鉴别大肠杆菌2 .培养基的配制原则和营养构成3 .固体培养基的配制步骤 计算一一称量一一溶化一一灭菌一一倒平板4.无菌操作获取纯净培养物条件结果常用的方法7K较为温 和的物理或 化E法仅杀死物体表向或内 部一部分对人体有害的微 生物(不包括芽抱和抱子)煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或 化学药剂消毒法火菌强烈的 理化因素杀死物体内外所有的 微生物,包括芽胞和抱

7、子灼烧火菌、干热火菌、局压蒸汽灭菌5.分离得到单菌落的方法 平板划线法、稀释涂布平板法 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1. 实验流程土壤取样-样品稀释-取样涂布-微生物的培养-观察并记录结果-细菌计数pH 升高,说明该种2. 选择、鉴定的原理 选择培养基:以尿素为唯一氮源 鉴定培养基:加入酚红指示剂,培养某种细菌,若指示剂变红,则细菌能分解尿素。分解纤维素的微生物的分离1. 实验流程土壤取样-选择培养-梯度稀释-将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上-挑选 产生透明圈的菌落。2. 选择、鉴定的原理选择培养基:以纤维素为唯一碳源鉴定培养基:加入刚果红,培养某种细菌,可根据是否产生透明圈来鉴定纤

8、维素分解菌。刚果红可在两个不同时间加入培养基:倒平板时或者长出菌落后。选修1专题6基础知识真核生物DNA主要存在于细胞核内,缠绕蛋白质形成染色质提取生物大分子的基本思路是:选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学 性质的生物大分子,提取 DNA就是将其与蛋白质等大分子分开。步骤原理DNA粗提取与鉴定的步骤1、选材:DNA含量相对高的生物组织动物:鸡血 植物:香蕉 菜花 洋葱2、破碎细胞,获取含 DNA的滤液渗透原理细胞吸水胀破动物:鸡血 取鸡血加入柠檬酸钠静置,除去上清液, 向鸡血细胞溶液中加入蒸储水,同时用玻璃棒搅拌,过滤 后收集滤液即可洗涤剂能够瓦解细胞膜,但对DNA无影响植物:香蕉

9、 菜花洋葱切碎的植物样品中加入洗涤剂和食盐,充分搅拌研磨,过滤收集滤液3、除去滤液中的杂质DNA和蛋白质等其他成 分在/、同浓度的氯化钠溶液中 溶解度不同。向滤液中加入氯化钠,搅拌,使氯化钠溶液浓度达到2mol/L ,使DNA呈溶解状态,过滤除去不溶杂质。加入蒸储水,用玻璃棒搅拌,DNA逐渐析出,析出物嫩内 分解蛋白W.不再增加,停止加蒸福水,过滤除去滤液中杂质。可用嫩肉粉 分解蛋白质 或用高温 使蛋白质变性,分离 蛋白质和DNA0a.Mtnol/L Med*澄1粉中木瓜蛋白酶能够 质,高温蛋白质变性。4、DNA的析出DNA不溶解于冷酒精,蛋 白质溶于冷酒精。酒精冷却可防止 DNA降解同 时增

10、强DNA韧性,不易断裂。将上一步得到的 DNA溶解于2mol/L的氯化钠溶液, 加入与滤液等体积的冷却酒精。静置2-3分钟,溶液中出现白色絮状物,用玻璃棒沿 一个方向搅拌,卷起丝状物。将DNA与蛋白质进一步分离。5、DNA鉴定在沸水浴条件下,DNA遇一苯 胺会被染成蓝色取两支试管,A中加入5 mL2mol/L的氯化钠溶液, 放入丝状物溶解,B中只加入5 mL2mol/L的氯化钠溶液, 两试管均加入4 mL 一聚胺试剂,混合均匀,沸水浴加热。 A试管溶液颜色变蓝 B试管颜色不变植物组织培养技术1 .原理植物细胞具有全能性(i)细胞全能性含义:生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能。(2)物

11、质基础:生物的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质,都有发育成完整个体所必需的全部基因。(3)在生物体内细胞并没有表现出全能性的原因:基因在特定的时间和空间条件下选择性 表达,细胞分化为不同的组织、器官。(4)全能性的实例花药的离体培养、植物的组织培养、克隆技术等。2 .技术流程一 一(离体 的植物器官、 组织、细胞)脱分化不需光愈伤组织再分化需光胚状休生冷完整或丛芽植株2.技术流程植物去壁-原生细胞A质体A'植物去壁.原生3细胞B领体B植物细胞融合植物组织培养3 .应用(1)微型繁殖:(2)作物脱毒:利用植物分生组织(如茎尖、根尖)进行培养,可以使新长成的植株脱除病毒。(3)

12、人工种子:植物组织培养得到的胚状体、不定芽、顶芽或腋芽,包上人工种皮就可以形成人工种子。植物体细胞杂交技术1.最大优点克服远缘杂交不亲和的障碍人工诱导正在融合的 再生号 杂种 脱分化愈伤再分传杂种一"原生质体A B"姗胞AB "组织 *植株动物细胞培养技术1.技术流程动物胚胎或幼龄动物组织块加培接触剪碎,单位端利胞f贴壁 碱 分瓶-1嫩少色swe少数不死 株蛋细胞 悬液生长 培养细胞 细胞癌变细胞 白酶%.八原代培养传代培养2.动物细胞培养与植物组织培养的比较项目动物细胞培养植物组织培养相同点都需无菌条件;都进行有丝分裂不同点原理:细胞的增殖原理:细胞的全能性液体

13、培养基,动物血清及其他营 养物质固体培养基、激素及具他营养物质获得细胞或细胞产物等快速繁殖、培育尢病毒植株等动物体细胞核移植技术与克隆动物1 .技术流程供体_细胞一供体体细胞 培养钟胞核,注入 '细度重组重组胚胎一代孕 卵巢卵逮上十垃 去核卵的痼f胚胎移植母体 母细胞丽去极f母细胞2 .原理:动物细胞核的全能性动物细胞融合与单克隆抗体1.技术流程小鼠注射.相应的抗原 B细胞骨髓痛细胞选择性 多种培养基杂交 细胞解细胞克隆化培养 抗体电测, 筛选体外培养从培养液 中提取体内培养从小鼠限 X水中盘成/大fit单克隆抗体2.植物体细胞杂交与单克隆抗体的制备的比较植物体细胞杂交动物细胞融合(单

14、克隆抗体的制备)理论基础(原理)融合前处理细胞膜的流动性、细胞的全能性细胞膜的流动性、细胞增殖促融方法酶解法去除细胞壁(纤维素 酶、果胶酶)(1)物理法:离心、振动、电刺 激等(2)化学法:聚乙二醇(PEG)注射特定抗原,免疫处理正常小鼠(i)物、化法:与植物细胞融合相同(2)生物法:灭活的病毒过程第一步京生质 体的制 备(酶解 法)第*步京生质 体的融 合(物、 化法)第 三步杂种细 施的筛 选和培 养第 四 步杂种植 诔的诱 导与鉴正正常小鼠免 疫处理愈伤F组织杂种梢株骨髓痛丫B淋匕细胞 细胞5杂交痛细胞动物细胞的 融合(物、 化、生法)突出 尤点克服远缘杂交不亲和的障碍。体外培中内培养从

15、培养液中提阪y从脱水中提取中克隆抗体杂交瘤细胞的筛选与培单克隆抗体 的提纯选修3专题2基因工程的概念理解和理论基础1.基因工程的概念理解(i)操作环境:体外一一关键步骤“表达载体的构建”的环境。(2)优点与杂交育种相比:克服远缘杂交不亲和障碍。与诱变育种相比:定向改造生物性状。(3)操作水平:分子水平。(4)原理:基因重组。本质:甲(供体:提供目的基因)导入 乙(受体:表达目的基因)即基因未变、合成蛋白质未变,只是合成场所的转移。2.基因工程的基本原理和理论基础概括如下图:基因是控制生物 外源耳因在受体;性状结构与功能 细胞内的表达-*:的遗传单位1: 遗传信息的传递:都遵循中心法则 :生物界

16、共用一套n<fllDNA:载体十目的基因我之R N A翻泳播白质t性状)基因拼接DN小的基本组成单位都 是四种脱辄核行酸DNA分子都遵循赫基瓦 补配对原则*DNA分子的空间结构都 是规则的双螺旋结构3.基因工程的操作工具:限制酶、DNA连接酶、运载体基因工程的基本操作程序1 .目的基因的获取(1)从基因文库中获取(2)利用PCR术扩增(3) DNA合成仪合成2 .基因表达载体的构建一一最核心步骤(1)基因表达载体的组成:启动子、目的基因、终止子以及标记基因等。(2)基因表达载体的构建方法载体(质粒)DNA分子(含H的基因)卜一同种限制酶切割-带有黏性带有相同黏性末末端切口端的H的基因片段IIDNA连接陶 重组D N A

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