非洲猪瘟病毒快速检测技术学习总结.非洲猪瘟病毒快速检测技术学习总结

1、部部 门门: :品管部品管部 报告人报告人: :日日 期期: 17: 17 MAR 2019 MAR 2019敬业敬业 自律自律 务实务实 专业专业 严谨严谨 高效高效敬业敬业 自律自律 务实务实 专业专业 严谨严谨 高效高效敬业敬业 自律自律 务实务实 专业专业 严谨严谨 高效高效敬业敬业 自律自律 务实务实 专业专业 严谨严谨 高效高效敬业敬业 自律自律 务实务实 专业专业 严谨严谨 高效高效敬业敬业 自律自律 务实务实 专业专业 严谨严谨 高效高效敬业敬业 自律自律 务实务实 专业专业 严谨严谨 高效高效敬业敬业 自律自律 务实务实 专业专业 严谨严谨 高效高效敬业敬业 自律自律 务实务

2、实 专业专业 严谨严谨 高效高效敬业敬业 自律自律 务实务实 专业专业 严谨严谨 高效高效临床特点临床特点1 1：1 1、特征、特征- -突然死亡突然死亡2 2、以特急性和急性为主、以特急性和急性为主3 3、所有年龄和性别都可能受到影响、所有年龄和性别都可能受到影响4 4、传染性相当低、传染性相当低- -发病率不定发病率不定5 5、耳、四肢和腹部发红至发绀、耳、四肢和腹部发红至发绀6 6、血腥腹泻、血腥腹泻7 7、经常性流产、经常性流产8 8、高热、出血为主要表现症状、高热、出血为主要表现症状敬业敬业 自律自律 务实务实 专业专业 严谨严谨 高效高效临床特点临床特点2 2：1 1、脾脏异常肿大

3、、呈紫黑色、质地变脆、易碎、脾脏异常肿大、呈紫黑色、质地变脆、易碎2 2、胃、肝脏、肾脏、肠系膜等淋巴结出血、水肿、质地柔软、胃、肝脏、肾脏、肠系膜等淋巴结出血、水肿、质地柔软、包膜紧张包膜紧张敬业敬业 自律自律 务实务实 专业专业 严谨严谨 高效高效敬业敬业 自律自律 务实务实 专业专业 严谨严谨 高效高效消消毒剂种类毒剂种类优点优点缺点缺点适用范围适用范围过氧化物过氧化物作用速度快适用于病毒和细菌具有刺激性预防病毒性疫病、水线消毒、栏舍熏蒸氯化物氯化物起效速度快对病毒和细菌均有效价格低廉具有腐蚀性、遇有机物和硬水失活、持续效果短、具有刺激性栏舍熏蒸环境消毒苯酚苯酚活性维持时间长、对金属无腐

4、蚀性、对病毒和细菌效果好、价格低廉具有毒性、腐蚀橡胶塑料、可能环境污染水泥地面碘制剂碘制剂安全性高、无毒无味、起效速度快、适用于病毒和细菌价格较贵某些碘制剂具有毒性预防病毒性疫病季铵盐类季铵盐类适用水线消毒、细菌消毒效果好、安全性高有机物存在失效、对真菌和芽孢效果不佳、不能和清洁剂混用洗手、水线消毒醛类醛类对病毒和细菌均有效可能具有毒性水泥地面、车轮浸泡碱类碱类起效速度快、对病毒和细菌均有效价格低廉可能具有毒性水泥地面车轮浸泡敬业敬业 自律自律 务实务实 专业专业 严谨严谨 高效高效敬业敬业 自律自律 务实务实 专业专业 严谨严谨 高效高效 灵敏度高，特异性强，对生物学样本有极强的分辨能力灵敏

5、度高，特异性强，对生物学样本有极强的分辨能力 医疗、疾控等多个领域用于确诊传染病的方法医疗、疾控等多个领域用于确诊传染病的方法检测方法灵敏度(cfu/mL)检测时间免疫学方法胶体金100,00015分钟ELISA10,00090-180分钟显微镜检验10,0005-120分钟核酸检测(qPCR)1-100小于60分钟病原体培养1-108-20小时敬业敬业 自律自律 务实务实 专业专业 严谨严谨 高效高效敬业敬业 自律自律 务实务实 专业专业 严谨严谨 高效高效u主机u配件微量移液器 配制反应液 耗材：枪头金属浴 暂时保存反应液 样品前处理 温控：0-100Mini8 Cube及电脑8样品孔两通

6、道：FAM/ROX无需预热免校准、免维护220V/12V(车载供电）移动电源供电130瓦时可使用4小时支持两轮实验手持研磨器固体样品处理耗材：研磨头双电单充迷你离心机样品前处理配制反应液TS：5000rpm敬业敬业 自律自律 务实务实 专业专业 严谨严谨 高效高效uMini8Mini8 Cube系统 小巧，机动 供电方式灵活 免校准，免维护 软件友好，操作简单 人医标准：CFDA三类医疗器械注册证敬业敬业 自律自律 务实务实 专业专业 严谨严谨 高效高效试剂盒特点：免核酸提取试剂盒特点：免核酸提取1. 操作简单2. 快速3. 无需专门实验室4. 结果更准确5. 试剂开放敬业敬业 自律自律 务实

7、务实 专业专业 严谨严谨 高效高效【用法用法】 1. 1. 适用样本类型适用样本类型 本试剂盒适用于猪口鼻眼拭子、组织和血液本试剂盒适用于猪口鼻眼拭子、组织和血液或血清等样本中非洲猪瘟病毒的核酸检或血清等样本中非洲猪瘟病毒的核酸检 测。测。 2. 2. 样本采集样本采集 2.1 2.1 口鼻眼口鼻眼拭子样本的采集：拭子样本的采集： 采集患病猪口鼻眼拭子样本，用专用采样棉签，适度采集患病猪口鼻眼拭子样本，用专用采样棉签，适度拭抹口腔分泌物和鼻腔分泌物，拭抹口腔分泌物和鼻腔分泌物， 眼分泌物要用拭子在眼睑下充分擦拭，眼分泌物要用拭子在眼睑下充分擦拭，迅速将棉签放入装有迅速将棉签放入装有400400

8、L L样本稀释液的采样本稀释液的采 样管中，在靠近顶端处折断样管中，在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封，以防干燥。拭子采样以溶解棉签杆，旋紧管盖并密封，以防干燥。拭子采样以溶解 到样本稀释液中到样本稀释液中可以看到组织悬浮物为最佳。可以看到组织悬浮物为最佳。 2.2 2.2 组织样本的采集：组织样本的采集： 无菌采集病猪组织无菌采集病猪组织样本约样本约0.1g0.1g，置于，置于1.5mL 1.5mL 无菌离心管中。无菌离心管中。 2.3 2.3 全血样本的采集：全血样本的采集： 抽取抽取猪静脉血猪静脉血1mL1mL，置于含有适量抗凝剂的采血管中（抗凝剂建议采用，置于含有适量抗凝剂的采血管

9、中（抗凝剂建议采用EDTA EDTA 或或柠柠 檬酸三钠，不应采用肝素）；檬酸三钠，不应采用肝素）； 2.4 2.4 血清样本的采集：血清样本的采集： 抽取猪静脉血抽取猪静脉血1mL, 1mL, 注入无菌收集管中，室温不超过注入无菌收集管中，室温不超过4 4小时（约小时（约30-6030-60分钟），待样分钟），待样 本本自行析出血清，或直接自行析出血清，或直接1600rpm1600rpm离心离心5 5分钟分离出血清，转移至新的灭菌离分钟分离出血清，转移至新的灭菌离心管心管 敬业敬业 自律自律 务实务实 专业专业 严谨严谨 高效高效【操作程序操作程序】 1. 1. 扩增试剂准备扩增试剂准备 从

10、试剂盒中取出从试剂盒中取出ASFV-PCRASFV-PCR反应液、反应液、ASFV-ASFV-阴性对照品和阴性对照品和ASFV-ASFV-阳性对照品，待所阳性对照品，待所 有组分完全溶解后，振荡混匀有组分完全溶解后，振荡混匀5 5秒，瞬时离心秒，瞬时离心5 5秒。秒。 2. 2. 样本处理样本处理 2.1 2.1 口鼻眼拭子样本处理：口鼻眼拭子样本处理： 无需样本处理，即可直接上样。无需样本处理，即可直接上样。 2.2 2.2 组织样本处理：组织样本处理： 取约取约黄豆粒大小组织样本（约黄豆粒大小组织样本（约0.1g0.1g）置于无菌）置于无菌1.5mL1.5mL离心管中，加入离心管中，加入2

11、00200L L样本稀样本稀 释液，使用释液，使用手持式组织研磨仪充分研磨至匀浆。另取出一个新的无菌手持式组织研磨仪充分研磨至匀浆。另取出一个新的无菌 1.5mL 1.5mL 离心离心 管，加入管，加入3030L L组组织样本裂解液，再加入织样本裂解液，再加入3030L L组织匀浆液，涡旋混匀，置于组织匀浆液，涡旋混匀，置于9595加加 热热5min5min后，后，12000rpm12000rpm离离心心2min2min，吸取上清液，吸取上清液5 5L L上样。上样。 2.3 2.3 血液样本处理：血液样本处理： 全血样本处理：经样本稀释液稀释全血样本处理：经样本稀释液稀释1010倍后，即可直

12、接上样；倍后，即可直接上样； 血清样本处理：经样本稀释液稀释血清样本处理：经样本稀释液稀释5 5倍后，即可直接上样。倍后，即可直接上样。 3. 3. 加样加样 按下表体系，在按下表体系，在 0.2mL PCR 0.2mL PCR 管中配制反应液。试剂用毕后将剩余试剂立即放入管中配制反应液。试剂用毕后将剩余试剂立即放入-20 -20 55保存。保存。 成分成分 体积体积 ASFV-PCRASFV-PCR反应液反应液 2020L L 经预处理的样本经预处理的样本 5 5L L 总体积总体积 2525L L 3.1 3.1 在一个分装有反应液的在一个分装有反应液的PCRPCR反应管中加入反应管中加入

13、5 5L L的的ASFV-ASFV-阴性对照品；阴性对照品； 3.2 3.2 将步骤将步骤2.2.样样本处理中取得的待检样本充分震荡混匀，然后按照本处理中取得的待检样本充分震荡混匀，然后按照5 5L/L/样本分别加样本分别加 入分装有反应液的入分装有反应液的PCRPCR反应管中；反应管中； 3.3 3.3 在最后一个分装有反应液的在最后一个分装有反应液的PCRPCR反应管中加入反应管中加入5 5L L的的ASFV-ASFV-阳性对照品阳性对照品； 以上操作建议在冰浴条件下进行，操作完毕压紧管盖，瞬时离心。以上操作建议在冰浴条件下进行，操作完毕压紧管盖，瞬时离心。 注：使用卡尤迪生注：使用卡尤迪

14、生物科技物科技Mini8 Mini8 全系列荧光定量全系列荧光定量PCRPCR仪时，建议使用无色透明的仪时，建议使用无色透明的 0.2mL PCR 0.2mL PCR 管，切勿使用有管，切勿使用有颜色，磨砂的颜色，磨砂的PCRPCR管，因为该仪器荧光读取方式为侧管，因为该仪器荧光读取方式为侧 面激发和收集荧光信号。面激发和收集荧光信号。操作程序操作程序敬业敬业 自律自律 务实务实 专业专业 严谨严谨 高效高效【注意事项注意事项】 1. 1.开始检测前请仔细阅读本说明书，按要求操作。开始检测前请仔细阅读本说明书，按要求操作。 2. 2. 各各区物品均为专用，不得交叉使用，避免污染；实验后立即清洁

15、工作台。区物品均为专用，不得交叉使用，避免污染；实验后立即清洁工作台。 3. 3. 扩增产物的污染，很容易出现假阳性结果。因此，临床实验室应严格扩增产物的污染，很容易出现假阳性结果。因此，临床实验室应严格按照按照临床临床 基因扩增实验室工作规范基因扩增实验室工作规范配备设备及操作人员。配备设备及操作人员。 4. 4. 本试本试剂盒检测结果仅供科研使用，对病猪的临床诊治应结合其症状剂盒检测结果仅供科研使用，对病猪的临床诊治应结合其症状/ /体征，病体征，病史，史， 其他实验室检查及治疗反应等情况综合考虑。其他实验室检查及治疗反应等情况综合考虑。 5. 5. 检测为阴性，并检测为阴性，并不代表为非感染状态，具体诊断结果须结合其他临床诊断结果判不代表为非感染状态，具体诊断结果须结合其他临床诊断结果判 断。造断。造成检测为阴性的可能是：不合理样本采集、转运及处理、样本中病毒成检测为阴性的可能是：不合理样本采集、转运及处理、样本中病毒浓度浓度 过低，未经验证的其他干扰因素如：服用抗病毒药物等。过低，未经