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文档简介
1、免疫组化抗原修复简介免疫组化抗原修复简介l为何要进展抗原修复l抗原修复的种类l抗原修复的原理l抗原修复的操作l抗原操作的运用为何要进展抗原修复为何要进展抗原修复l常规的石蜡切片的组织要经过福尔马林固定和石蜡包埋,虽然上述过程能良好的保管标本在光镜下的形状,但是会不同程度地破坏组织的抗原,降低组织的抗原与抗体的免疫反响率。抗原修复的种类抗原修复的种类l热修复HIERl蛋白酶修复PIERl双修复特殊抗原和双染l不修复抗原修复的原理抗原修复的原理l抗原修复目前常用的有热修复HIER,蛋白酶修复PIER和不修复。不同的修复的原理不同。l热修复的原理l蛋白酶修复原理热修复热修复(HIER)的原理的原理l
2、“石说:固定经过改动蛋白构造降低免疫反响性,AR逆转大部分福尔马林导致的蛋白修饰,冷却后,会重建“近天然的构造,免疫反响的恢复是经过蛋白表位的复性。热修复的特点热修复的特点l易于施行l易于规范化蛋白酶修复蛋白酶修复(PIER)原理原理l蛋白酶的消化经过破坏福尔马林呵斥的蛋白交联,实现抗原的修复。l该方法的缺陷是:破坏组织的完好性,会破坏抗原,而且酶的浓度,反响时间,反响温度呵斥很大的差别,规范化难度较大。抗原修复的操作抗原修复的操作l热修复HIERl蛋白酶修复PIERl双重修复热修复热修复HIERl高压修复l煮沸法修复l微波修复l水浴加热高压修复高压修复l切片先脱蜡水化l将修复液注入高压锅,将
3、液体煮沸l放入切片甩开水分l盖上盖子,等喷气,计时1.52分钟800W1000Wl冷却,冲洗玻片上的修复液 1.5-2min 10min高压锅直接修复高压锅隔水间接修复煮沸法修复煮沸法修复l将修复液注入不锈钢锅中l煮沸后,参与切片甩干水分l用保温档,处置20分钟左右l冷却,冲洗玻片上的修复液蛋白酶修复蛋白酶修复PIERl切片脱蜡水化l切片上滴加酶,放入孵育盒,处置一定时间l时间到,取出切片,冲洗。双重修复双重修复l脱蜡水化后,对切片进展胰酶消化l然后,对切片进展热修复抗原操作的运用抗原操作的运用l时间l温度l冷却l细节MOC31上皮糖蛋白上皮糖蛋白-2,EGP-2) EGFR(CLONE:EGFR.113)HBcAg(兔多抗兔多抗)C/HNO结论结论l正确的修复对抗体的表达非常重要l抗原修复是一个个性化
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