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文档简介

1、植物内生真菌的分离一、实验目的1.理解内生真菌存在的普遍性和多样性2.掌握常规的微生物分离纯化方法3.掌握分菌过程中的一些基本操作技能二、实验原理植物内生真菌 ( Endophyte) 是指那些在其生活史的一定阶段或 全部阶段生活于健康植物的各种组织和器官内部的真菌或细菌， 而宿 主植物一般不表现出外在的症状。 所有植物中几乎都存在内生菌 . 由 于植物内生真菌与宿主在长期的进化过程中形成了特殊的生态关系，因而内生真菌能产生与宿主相同或相似的具有生理活性的次生代谢 产物，从内生菌中寻找和发现新的活性化合物越来越成为微生物次生 代谢产物的研究热点之一。采用微生物学常规的组织分离法从植物中分离内生

2、真菌三、实验材料板蓝根新鲜健康的叶片 试剂：次氯酸钠、无水乙醇、葡萄糖、琼脂、青霉素、 链霉 素培养基：PDA 培养基、分离培养基四、实验步骤(一)、配制 PDA 培养基10 月 27 号晚上 :（1） 配置PDA培养基，用电子称称取去皮的土豆100g,煮沸30min,4 层纱布过滤，滤液加热，加入琼脂 7.5 克，琼脂完全融化后加入葡 萄糖log,待稍冷却后加水至 500 毫升。（2） 准备 10 瓶无菌水，每瓶 150ml 左右。（3） 包好烧杯,培养皿,涂布棒等实验仪器,等待消毒。（二） 、配制分离培养基28 号中午：（1） 配置分离培养基，将 PDA 培养液均分成两份，一份备用，另一

3、份待高温灭菌后，加入青霉素 100mg/ L、链霉素 200mg/ L 的混合液 20ml，即得到分离培养基。（2） 用消毒后的培养皿在通风橱中倒平板,注意在整个过程中保证 无菌操作。（三） 、采集新鲜板蓝根叶片28 号晚上到实验室外采集新鲜健康叶片完整的板蓝根叶片。（四）、植物组织表面消毒28 号晚上将新鲜、健康的板蓝根叶片于自来水下冲洗干净,用吸水 纸吸干表面水分后剪成小段（片）做如下表面消毒处理：75%酒精漂洗 3min,无菌水冲洗 45 次，5%次氯酸钠溶液漂洗叶 3min,无菌水 冲洗45 次,无菌滤纸吸干水分。（五）、接种并培养28 号晚上：（ 1）将上述表面消毒后的材料剪切成 0

4、.5cm 2 小块, 放入含有 分离培养基的平板中（ 3 块每板） 28C恒温培养 315 天。最后一次洗涤水涂布平板作为对照。（2）取备用 PDA 培养液高温灭菌后，加入青霉素 100mg/ L、链霉素200mg/L 的混合液 20ml，在通分橱中倒平板。（六）、分离真菌29 号晚上：接种培养 24 小时后，观察对照组无细菌产生，说明实验 成功。31 号中午：继续培养 2 天后，实验组组织块边缘没有菌丝产生，放 入恒温箱继续培养。11 月 1 号中午：观察到实验组组织块边缘没有菌丝产生，放入恒温 箱继续培养。11 月 2 号晚上：观察到实验组组织块边缘有少量菌丝产生，及时采用菌丝尖端挑取法将其转入另一一 PDA 平板培养。（七）、纯化 待分离培养基中长出真菌后，挑入斜面培养

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