饮用水微生物检测Microsoft-PowerPoint-演示文稿 -

1、饮用水微生物检测生活饮用水中微生物指标项目单位限值说明总大肠菌群MPN/100mL或CFU/100mL不得检出一般性污染耐热大肠菌群MPN/100mL或CFU/100mL不得检出指示粪便污染大肠埃希氏菌MPN/100mL或CFU/100mL不得检出指示粪便污染菌落总数CFU/mL100一般性污染贾第鞭毛虫个/10 L1肠道原虫隐孢子虫个/10 L1肠道原虫微生物指标常规检验流程水样水样总大肠菌群总大肠菌群菌落总数菌落总数报告报告报告报告耐热大肠菌群耐热大肠菌群或大肠埃希氏菌或大肠埃希氏菌报告报告实验前准备1、灭菌吸管 10mL、1mL刻度吸管分别包好，160干烤2h灭菌2、9mL灭菌生理盐水3

2、、相应的灭菌培养基4、检验前 ，无菌室用紫外线灯照射30min菌落总数定义： 是指水样在营养琼脂上有氧条件下37培养48h后，所得1mL水样所含菌落的总数 。培养基：营养琼脂 设备：放大镜/菌落计数器菌落总数平板计数法1 m L 饮 用 水 水 样平皿1 m L 水 源 水 水 样1 0 倍系列稀释5 0 营养琼脂3 6 1 培养4 8 h计 数平行样空白样总大肠菌群 检测方法 多管发酵法 滤膜法 酶底物法多管发酵法定义： 总大肠菌群指一群在37培养24h能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。培养基：乳糖蛋白胨培养液 二倍浓缩乳糖蛋白胨培养液 伊红美蓝培养基 设备：显微镜

3、15管法检测步骤在36下培 养 24h10ml水样1ml水样0.1ml水样10ml双料乳糖蛋白胨培养液10ml单料乳糖蛋白胨培养液10ml单料乳糖蛋白胨培养液都不产酸产气判阴性产酸产气管EMB染色镜检乳糖蛋白胨培养液革兰氏阴性无芽孢杆菌产酸产气判总大肠菌群存在典型特征菌落在36下培 养 24h10ml双料乳糖蛋白胨培养液10ml单料乳糖蛋白胨培养液10ml单料乳糖蛋白胨培养液都不产酸产气产酸产气管EMB染色镜检革兰氏阴性无芽孢杆菌产酸产气典型特征菌落多管发酵法结果大肠菌群在伊红美蓝培养基上的典型菌落特征大肠菌群革兰氏染色显微镜下的形态 二 倍乳 糖蛋 白胨 培养 液 5 管乳 糖蛋 白胨 培养

4、 液 5 管乳 糖蛋 白胨 培养 液 5 管1 0 m L1 m L1 m L水 样10倍稀释阴 性报 告未 检 出阳 性EM B3 6 1 培 养 2 4 h3 6 1 培 养 2 4 h革 兰 氏 染 色显 微 镜 检报 告阴 性无 典 型菌 落无 典 型 细 菌报 告阴 性G -无 芽 孢 杆 菌乳 糖蛋 白胨 培养 液3 6 1 培养2 4 h无 产 酸 产 气报 告阴 性阳 性M P N 表结 果 报 告 乳 糖 发酵 试 验2 4 h 分 离培 养2 4 h 证 实试 验2 4 h1 5 管 法 检 测 步 骤滤膜法定义： 是指用孔径为0.45的微孔滤膜过滤水样，将滤膜贴在选择性品

5、红亚硫酸钠培养基上37培养24h，能形成紫红或红色有金属光泽的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。培养基1. 品红亚硫酸钠培养基 2. 乳糖蛋白胨培养液 设备：显微镜，过滤设备检测步骤 过滤水样：过滤设备 显色培养，染色镜检：24h 复发酵：阳性接种，24h过 滤无典型菌落报告未检出361培养24h革兰氏染色显微镜检无典型细菌乳 糖蛋 白胨 培养 液361培养24h无产酸产气产 酸 产 气结果报告 过滤培养24h 证实试验24h滤膜法检测步骤100mL水 样典型菌落报告阴性G-无芽孢杆菌酶底物法 Enzyme Substrate Test常用的色原和荧光底物 色原（荧光）糖苷结合物 糖苷酶

6、色原（荧光）氨基酸结合物 氨基肽酶 常用呈色的色原有：、萘酚，邻位或对位硝基酚，对硝基苯胺，酚酞，2-氨4-硝基苯等，如ONPG(邻硝基酚-B-D半乳糖苷 ) 常用的荧光物有：4-甲基伞形酮（4MU），7氨基4甲基伞形酮香豆素 如MUG(四甲基伞形酮-B-D-葡萄糖苷 )总大肠菌群酶底物法 定义： 在选择性培养基上能产生-半乳糖苷酶（-D-galactosidase）分解ONPG（Ortho-nitrophenyl-D-galactopyranoside）使培养基呈黄色的细菌群组 。 培养基： MMO-MUG培养基 设备： 压膜机检测步骤 加样：干粉培养基加入到100mL水样中 压膜：专用压膜

7、机分装 培养：361的培养24h 结果判读： 24h培养后颜色变成黄色判断为阳性反应； 培养24h后判读，为可疑阳性，可延长培养到28h判读，超过28h之后出现的颜色反应不作为阳性结果 。无颜色反应报告未检出361培养24h检索MPN 表结果报告 24h-28h总大肠菌群酶底物法检测步骤100mL水样黄色产生培养基总大肠菌群酶底物法总大肠菌群酶底物法检测示意图检测示意图耐热大肠菌群 检测方法 多管发酵法 滤膜法多管发酵法定义： 用提高培养温度的方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分开，在44.5仍能生长的大肠菌群，称为耐热大肠菌群。培养基：1. EC培养基 2. 伊红美蓝琼脂 设备：

8、无特殊设备检测步骤 初发酵（同总大肠菌群），24h 耐热培养：阳性管接种，24h 显色培养：阳性管接种，24h乳 糖蛋 白胨 培养 液 5 管乳 糖蛋 白胨 培养 液 5 管二 倍乳 糖蛋 白胨 培养 液5 管1 0 m L1 m L1 m L水 样10倍稀释阴 性报 告未 检 出阳 性EM B3 6 1 培 养 2 4 h36 1培 养 24h报 告阴 性结 果 报 告 乳 糖发 酵试 验24h 证 实试 验24h多 管 发 酵 法 检 测 步 骤EC 培养 液44.5 培养 24h不 产 气产 气有 典 型 菌 落检 索 M PN表 耐 热培 养24h无 典 型 菌 落报 告阴 性滤膜法

9、定义： 用孔径为0.45的滤膜过滤水样，细菌被阻留在膜上，将滤膜贴在MFC培养基上，44.5培养24h能形成蓝色菌落的细菌为耐热大肠菌群。 培养基：1. MFC培养基 2. EC培养基 设备：过滤设备过滤无典型菌落报告未检出44.5培养24hEC培养液44.5培养24h无产气结果报告 证实试验24h 耐热培养24h耐热大肠菌群滤膜法检测步骤100mL水样典型菌落报告阴性产 气过滤无典型菌落报告未检出44.5培养24hEC培养液44.5培养24h无产气结果报告 证实试验24h 耐热培养24h耐热大肠菌群滤膜法检测步骤100mL水样典型菌落报告阴性产 气大肠埃希氏菌 检测方法 多管发酵法 滤膜法

10、酶底物法多管发酵法定义： 指多管发酵法总大肠菌群阳性，在EC-MUG培养基上44.5培养242h产生-葡萄糖醛酸酶（-glucuronidase），分解MUG（4-methyl-umbelliferyl-D-glucuronide）并产生荧光产物，使培养基在波长366nm紫外光下产生蓝色荧光的细菌。 培养基：1. EC-MUG培养基 设备：紫外灯：波长366nm检测步骤 初发酵（同总大肠菌群），24h 耐热显色培养：阳性管接种，24h 荧光观测，报告乳糖蛋白胨培养液5管乳 糖蛋 白胨 培养 液5管二 倍乳 糖蛋 白胨 培养 液5管10mL1mL1mL水样10倍稀释阴性报告未检出产酸产气361培养24h报告阴性结果报告 初发酵24h大肠埃希氏菌多管发酵法检测步骤EC-MUG培养 液44.5培养24h无荧光有荧光检索MPN表 耐热显色培养24h大肠埃希氏菌酶底物法大肠埃希氏菌酶底物法检测示意图检测示意图生活饮用水非常规检测项目 贾第虫和隐孢子虫检测方法:水样过滤-洗涤离心-免疫磁珠分离-荧光标记和DAPI染色-显微镜检查记述-结果报告 在2012年成为常规检验项目微生物指标检验方法的总结菌落总数细菌学指标总大肠菌群耐热大肠菌群大肠埃希氏菌平板计数法多管发酵法滤膜法酶底物法多管发酵法滤膜法多管发酵法滤膜法酶底物法总大肠菌群三种