液相色谱分析概论

1、12讲 课 提 纲3第一章 色谱基础45678正相分配色谱反相分配色谱9按分离过程物理化学原理分类的各种液相色谱法的比较10液相色谱与气相色谱的比较液相色谱与气相色谱的比较11四、高效液相色谱法的特点1213续前14二、定性参数15RtRR0ttt1617四、分离参数2121RRRR12122()()/2ttttRW WW W（一）分离度（resolution,R)1.分离度定义与含义182.基本分离方程式221() ()41knRkabca柱效项b-柱选择项c柱容量项1920smmkm21（一）影响板高因素的讨论22二、液相色谱法速率理论23讨论：243.传质阻抗系数254.传质阻抗对板高的

2、影响2(/)mmpmCCdD流动相的传质阻抗系数：2(/)msmpmCCdD静止流动相传质阻抗系数：pmmsmdDCC减小 ，增大，则降低及以提高柱效。2627（二）柱外效应2222总柱内柱外其他2HL溶质分子通过色谱柱，所产生的离散程度与柱长成正比：2822222()/edmsmsHL速率理论方程式中的板高（柱内展宽的板高）：2. 柱外峰展宽（柱外效应，外）222222柱外进样器连接管接头检测池其他29一、影响分离的因素一、影响分离的因素 （factors influenced separation）302. 流速流速3. 固定相及分离柱固定相及分离柱 气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相

3、色谱，其选用原则与气相色谱一样。但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自行制备。31第二章 HPLC仪器的简介及工作原理32第一节 高效液相色谱仪33HPLC结构: 输液系统输液系统; 进样系统进样系统; 分离系统分离系统; 检检测系统测系统; 梯度洗脱装置梯度洗脱装置; 数据处理系统数据处理系统34第二节 系统介绍35第二节 系统介绍36泵图37第二节 系统介绍38第二节 系统介绍39进样系统进样系统40使用手动进样器是要注意以下事项：v进样针：应选用液相专用的平头针。v进样量：要么小于定量环体积的一半，要么满刻度进样（需要推进35倍定量环体积的样品）v进样动作

4、：在Load状态下动作要平缓，以防样品冲出。进样后先切换到Inject状态再拔针，以防倒吸或产生气泡。41v清洗进样口：在Inject状态清洗进样口。v废液口：废液管的出口应于进样口水平，以防样品倒流泄露或产生虹吸。自动进样器： 是由计算机自动控制定量阀，按预先编制的操作程序工作。取样、进样、复位、样品管路清洗和样品盘的转动，全按程序自动进行。42第二节 系统介绍43分离部分分离部分44四、检测器四、检测器45第二节 系统介绍46检测系统 47可变波长检测器示意图48光电二极管阵列吸光度检测器光电二极管阵列吸光度检测器49示差折光检测器示差折光检测器5051荧光检测器荧光检测器52d. 荧光检

5、测器荧光检测器（fluorescence detector）53第三章 固定相结构54第三章 高效液相色谱的固定相 和流动相55第三章 高效液相色谱的固定相 和流动相5657第三章 高效液相色谱的固定相 和流动相58第三章 高效液相色谱的固定相 和流动相59二、液相色谱的流动相二、液相色谱的流动相 （mobile phases of LC）60二、液相色谱的流动相二、液相色谱的流动相 （mobile phases of LC）612. 流动相类别流动相类别623. 流动相选择流动相选择634. 选择流动相时应注意的几个问题选择流动相时应注意的几个问题64656667第三章 高效液相色谱的固定相

6、 和流动相68第四章 液相色谱仪定性、定量方法69702、利用紫外或荧光光谱定性 停泵做全波长光谱扫描3、收集柱后留出组分，再用其他化学或物理方法定性如：红外光谱、质谱、核磁共振等714.2定量分析1. 外标法(标准曲线法)用待测组分的纯样制标准曲线优点：快速简单, 只要待测组分出峰且完全分离即可缺点：绝对法, 进样量,操作条件要不变 722. 内标法(外加标准法)不能全出峰或只需测某几个组分时采用方法:准确称取样品,加入一定量内标物,根据重量及峰面积求出某组分的含量Ws 内标物重量 As 内标物峰面积 Ai 被测物峰面积 fs 内标物重量校正因子 fi 被测物重量校正因子 W 样品重 一般选

7、内标物为基准，fs=1WfAWfAWWWsssiii%100%ssiiSifAfAWW73步骤:a.选内标物 b.测fw(i/s) (fi) c.称未知样W. 内标物Ws,测Ai,As内标法的关键是选择合适的内标物，内标法的关键是选择合适的内标物，它必须符合下列条件：它必须符合下列条件：(1) 是样品中原来不存在的纯物质，性质与被测物相近，是样品中原来不存在的纯物质，性质与被测物相近，能完全溶解于样品并且不与样品发生化学反应。能完全溶解于样品并且不与样品发生化学反应。（2）内标物的峰应尽量靠近被测组分的峰，或位于几个）内标物的峰应尽量靠近被测组分的峰，或位于几个被测物之峰的中间并与这些色谱峰完全分离。被测物之峰的中间并与这些色谱峰完全分离。（3）内标物的质量应与被测物质的质量接近，能保持色）内标物的质量应与被测物质的质量接近，能保持色谱峰大小差不多。谱峰大小差不多。743. 纯样未标准，由比较加入该组分前后信号的变化计算被测组分的含量75第五章 建立高效液相色谱分析方法的一般步骤 76分