生化分析仪检测原理ppt课件

1、临床生化检验反响原理及报告审核检验科检验科 黄小虎黄小虎全自动生化分析仪全自动生化分析仪生化分析仪特点优点亮点亮点自动化机械化的仪器设备模拟 替代手工操作提高了任务效率 减少了客观误差灵敏 准确 快速 规范化生化分析仪分类1按构造原理分管道延续流动式分立式常用离心式干片式急诊常用2按测定速度分小型中型大型超大型模块式3按自动化程度分半自动全自动2019 生化分析仪主要构成生化分析仪主要构成加样系统供排水系统比色系统光源 比色杯 单色器 检测器数据处置系统样品转盘 试剂仓 取样安装根本原理临床生化分析仪最常运用的是分光光度法分光光度法是经过测定被测物质在特定波优点或一定波长范围内光的吸收度，对该

2、物质进展定性和定量分析的方法。 光吸收曲线溶液对不同波长光的吸收程度，通常用光吸收曲线来描画。溶液对不同波长光的吸收程度，通常用光吸收曲线来描画。 在分光光度法中, 以吸光度为纵坐标, 以波长为横坐标作图可得光吸收曲线。 浓度不同的同种溶液, 在该种曲线中其最大吸收波长一样，相应的吸光度大小那么不同，同一波长下摩尔吸数一样。Lambert-Beer朗伯-比尔定律当一束平行单色光经过均匀的非散射样品时，样品对光的吸光度与样品的浓度及厚度成正比 A=kcbA-吸光度 k-吸光系数 c-溶液浓度 b-液层厚度吸光系数定义：吸光物质在单位浓度及单位厚度时测得的吸光度。K值的大小取决于吸光物质的性质、入

3、射光波长、溶液温度和溶剂性质等，与溶液浓度大小和液层厚度无关。但K值大小因溶液浓度所采用的单位的不同而异。 讨 论：1.Lamber-Beer定律的适用条件前提:入射光为单色光溶液是均匀，无散射溶液2.该定律适用于固体、液体和气体样品3.在同一波长下，各组分吸光度具有加和性，假设 溶液中同时存在两种或两种以上的吸光性物质 ,那么测得的该溶液的吸光度等于溶液中各吸光性 物质吸光度的总和，即： Aa+b+cAaAbAc运用：多组分测定定量分析方法(1) 规范曲线法 (2) 规范溶液对比法(3) 吸光系数法规范曲线法规范曲线法最经典方法最经典方法前提：固定仪器和固定条件 A= K*BC 过程：配置规

4、范溶液系列 分别测定 A 得CA曲线 样品 测定A样 查得C样规范溶液对比法在一样的条件下，配制浓度为cs的规范溶液和浓度为cx的样品溶液，在最大吸收波优点，分别测定二者的吸光度值为As、Ax ，根据朗伯-比尔定律得: As=Kbcs Ax=Kbcx 那么: cx = cs*Ax /AssCiCCX吸光系数法吸光系数法又称绝对法，是直接利用朗伯-比尔定律的数学表达式AKbc进展计算的定量分析方法。在手册中查出待测物质在最大吸收波长 处的吸光系数 或 ,并在一样条件下丈量样品溶液的吸光度A，那么其浓度为： AcLLEA%1cm1max%1cm1E或检测方法1.终点法 2.固定时间法3.延续监测法

5、 终点法 终点分析法是基于反响到达平衡时反响产物的吸收光谱特征及其对光吸收强度的大小，对物质进展定量的一类分析方法。反响混合物进展一定时间反响后，到达平衡终点，即在显色反响处于稳定阶段时，监测其颜色对光的吸收强度，以此计算待测物浓度。终点时间确实认：一、根据时间-吸光度曲线 如:Trinder偶联终点比色法反响测尿酸，反响曲线上3-5分钟时其A趋向稳定,故可将5分钟作为反响终点。二、根据被测物反响终点，结合干扰物的反响情况来确定 如:溴甲酚绿法测血洁白蛋白 分 类终点法： 一点终点法 二点终点法 免疫比浊法 双波长法一点终点法一点终点法在时间-吸光度曲线上吸光度不再改动时，选择一个时间点测定吸

6、光度值。通常在反响终点附近延续读两个吸光度，求出两点的平均值，并根据两点的差值判别反响能否到达平衡。一点终点法的设置：以R和S混合之前的空气空白、水空白或试剂空白的吸光度值为测定计算基点，以反响到达平衡的吸光度读数减去空白读数，校准曲线经过零点且成直线，对于反响速度比较快的实验多用。 多见于单试剂工程，如：总蛋白，白蛋白等。2022-4-1721Am T时间时间AS+R(吸光度吸光度一点终点法反响曲线 计算公式： C=(Am-Ab)*KAm-终点读数点的吸光 Ab-试剂空白吸光度 K-校正系数TP反响曲线蛋白质+Cu2+Cu-蛋白质络合物 550nm处吸收峰二点终点法第二试剂参与以前，选择某一

7、点读取吸光度Am，经过一定时间后反响达终点后测第二个吸光度值An,利用两吸光度之差计算结果。第一点吸光度值由样本本身或第一试剂与样品的非特异性反响有关，相当于样品空白，可有效的消除样品本身的吸光度，如溶血，黄疸，脂血等的干扰。AnTAR2AmS+R1(吸光度吸光度时间时间两点终点两点终点样本空白样本空白=S+R1S+R1+R2体积校正因子体积校正因子k0 计算公式计算公式 C=(An-K0 C=(An-K0* *Am)Am)* *K K CRE反响曲线肌酐在一系列酶的作用下生成H2O2，H2O2和4-氨基氨替比林反响生成红色醌类物质，在540nm处有吸收峰。Mg反响曲线在碱性溶液中，Mg与二甲

8、苯胺蓝构成重氮盐类的紫色复合物，Mg2+浓度可由二甲苯胺蓝吸光度的下降，经过光度测定法来测定。免疫比浊法 经过物质对光的散射或透射来测定物质含量的 方法： 散射比浊：特定蛋白分析仪 透射比浊：自动生化分析仪 通常作两点终点法分析，多采用多点校准。 运用：用Ab测定Ag主要为微量蛋白：IG、 C、APOA1/B、ASO、RF、CRP等，要求Ab过量，此时Ag-Ab复合物的生成量随Ag的添加而递增，光散/透射强度与抗原量成正比。免疫比浊法优点： 方法简便 结果准确 可用于自动化仪器检测缺陷：抗体用量大 达平衡时间长双波长法 消除样品中对测定有干扰的物质的影响； 在试样中含有两个组分a和b时，假设要

9、测定组分b,组分a有干扰，应设法消除组分a的吸收干扰。首先选择待测组分b的最大吸收波长1作为丈量波长，然后用作图的方法选择参比波长2 ，使组分a在这两个波优点的吸光度相等。 试样溶液在2和1两个波优点的吸光度之差，只与待测组分的浓度成正比，而与干扰组分的浓度无关干扰物质1.脂血：吸收光谱300-600nm呈下降趋势2.Hb：350nm、400nm、540nm、580nm 吸收峰3.胆红素：300-500nm有吸收峰 可见它们的吸收峰都较宽，且同测定波长有重叠景象。双波长法双波长测定优点 ： 消除噪音干扰 减少杂散光影响 减少样品本身光吸收的干扰 固定时间法 指在时间-吸光度曲线上选择两个测光点

10、，这两点既非反响初始吸光度亦非终点吸光度，利用这两点吸光度差值计算结果。 如：苦味酸法测肌酐 计算公式： C=(A2-A1)*KA1A2T(吸光度吸光度 测定底物的耗费或产物生成的速度的化学方法称为延续监测法又称动态分析法、速率法或动力学法。在反响速度恒定期零级反响期来延续察看和记录一定反响时间内底物或产物量的变化。经过测定一段时间内吸光度的变化速率 A/min 来计算待测物的浓度。 酶活性测定如ALT、AST、ALP、GGT等常用延续监测法速率法延续监测法速率法酶促反响曲线延续监测法 即零级反响速率法,亦称斜率法 在较长反响时间区段内(90-180秒)，每隔一定时间(530秒)读取一次吸光度

11、值，至 少读取4点，得到3个以上A，最后算出 反响速率A/min。uTuuuVVltALU610/酶促反响进程曲线2022-4-1738A1TAS+R1R2A2(吸光度吸光度时间时间延续监测法延续监测法A/min=(A2-A1 )-(空白空白)/(t2-t1)t2t1延续监测法特点 与固定时间法相比，属于即时观测，无需停顿酶促反响、不需添加其他呈色试剂，且可将多点的测定结果绘图连线，快速、直观查看酶促反响进程，很容易找到呈直线的线性期，检查到能否偏离零级反响。典型酶联法反响曲线ALT反响曲线AMY反响曲线生化结果报告审核责任心不强，未对结果进展仔细审核责任心不强，未对结果进展仔细审核对检测仪器

12、或试剂方法学不够了解对检测仪器或试剂方法学不够了解任务阅历缺乏任务阅历缺乏对仪器检测的结果及室内质控结果过于置信对仪器检测的结果及室内质控结果过于置信1.结合质控判别结果在控在控GLO=TPALB偏高2.结合临床资料审核结合病人的性别、年龄、临床诊断、其他检查结果审核结合病人的性别、年龄、临床诊断、其他检查结果审核 例：某病人检测的例：某病人检测的TPTP为为110g/L110g/L，该标本没有脂血等影，该标本没有脂血等影响检测结果的要素响检测结果的要素 临床诊断：多发性骨髓瘤临床诊断：多发性骨髓瘤 另：胰岛素与低血糖、病人输注药物对结果的影响另：胰岛素与低血糖、病人输注药物对结果的影响检验工

13、程间的内在联络各检测参数间存在大小、比例、逻辑关系各检测参数间存在大小、比例、逻辑关系例：例：TC HDL-C+LDL-CTC HDL-C+LDL-C、 TBI DBI TBI DBI CK CK-MB CK CK-MB LDH-HBDH LDH-HBDH影响检验结果的要素 试剂线性范围： 了解检验工程试剂的线性范围，对超越或低于范围的工程，必需进展相应的减量稀释或增量后重新测定。线性范围 在实践任务中，用延续监测法会遇到检验在实践任务中，用延续监测法会遇到检验结果为结果为0 0或者负值的情况，此时不能盲目置信或者负值的情况，此时不能盲目置信该结果低就出具低值报告，应查看其反响曲线该结果低就出

14、具低值报告，应查看其反响曲线例：某病人的尿液例：某病人的尿液AMYAMY检测结果为检测结果为0U/L0U/L 其反响曲线如以下图：其反响曲线如以下图：AMY反响曲线AMY反响曲线分析分析：由于测定物质浓度过高分析：由于测定物质浓度过高处置：对测定物质进展十倍左右的稀释再测定，处置：对测定物质进展十倍左右的稀释再测定，直到反响曲线恢复正常结果才可靠直到反响曲线恢复正常结果才可靠AMY反响曲线AMY反响曲线第一次稀释后检测工程的方法学 分析：分析：CKCK是由是由M M和和B B两类亚基组成的二聚两类亚基组成的二聚体，其构成为体，其构成为CK-MB(CK-MB(心型心型) )约占约占0-3%0-3

15、%、 CK-MM( CK-MM(肌肌型型) )约占约占97-100%97-100%、 CK-BB CK-BB脑型约占脑型约占0-1%0-1% 影响检验结果的要素 检测工程的方法学：检测工程的方法学： 要了解该工程试剂采用的方法学：要了解该工程试剂采用的方法学： 例：某病人在测定心肌酶谱时，其例：某病人在测定心肌酶谱时，其CK:246U/LCK:246U/L、CK-MB:286U/LCK-MB:286U/L，标本无溶血等要素影响，标本无溶血等要素影响, ,其结其结果中果中CK-MBCK-MBCKCKCK-MBCK-MB采用的检测方法为免疫抑制法采用的检测方法为免疫抑制法 正常人体中，正常人体中，

16、CKCK同工酶中同工酶中CK-MMCK-MMCK-MBCK-MBCK-BB,CK-BB,其中其中CK-BBCK-BB含量极少，可忽略。免疫抑制法正是建含量极少，可忽略。免疫抑制法正是建立于忽略立于忽略CK-BBCK-BB的根底上。采用抗体抑制其的根底上。采用抗体抑制其M M亚基亚基活性，使活性，使CK-MMCK-MM失去活性，而失去活性，而CK-MBCK-MB失去一半的活失去一半的活性。单测定性。单测定B B亚基的活性，其结果亚基的活性，其结果2 2即为即为CK-MBCK-MB活活性。性。由于在患轻度或中度脑损伤、脑血管不测及脑手由于在患轻度或中度脑损伤、脑血管不测及脑手术后术后 呵斥脑组织发

17、生本质性损害的病人中，呵斥脑组织发生本质性损害的病人中，CK-BB会升高，这时该方法测定的会升高，这时该方法测定的CK-MB的活性相当的活性相当于是于是CK-MB+2CK-BB的活性之和，呵斥的活性之和，呵斥CK-MB活性假性升高。活性假性升高。检验标本的影响 标本脂血会使反响浊度添加，透光度下降，标本脂血会使反响浊度添加，透光度下降，吸光度添加，从而呵斥检验结果不准确。如吸光度添加，从而呵斥检验结果不准确。如TPTP、TGTG、UAUA显著增高，显著增高，GGTGGT显著下降或为显著下降或为0 0 标本溶血会使标本溶血会使K+K+、ALTALT、ASTAST、LDHLDH等检验结果等检验结果

18、显著升高显著升高抗凝剂的错误运用抗凝剂的错误运用仪器性能影响 仪器老化、缺点、清洗管道堵塞、水质不纯等仪器老化、缺点、清洗管道堵塞、水质不纯等均会对检验结果呵斥影响均会对检验结果呵斥影响 光路老化：表现为光路老化：表现为CK-MB,ALP,ALTCK-MB,ALP,ALT、ASTAST等工程等工程结果反复性较差结果反复性较差 水质不纯、反响杯清洗不干净：表现为无机物水质不纯、反响杯清洗不干净：表现为无机物质结果不准质结果不准检验结果的总体趋势 即使质控在控，也要留意当日检验结果的总体的分布趋势 如K+的参考区间为3.55.5，中值为4.5，假设当日结果大部分甚至全部低于4.5，即使当日质控在控，任要思索结果能否偏低，应重新校准、质控后再测定 如在质控中TC(-1S),HDL