细胞朊蛋白课件

1、细胞朊蛋白第二十九章第二十九章 人乳头人乳头(rtu)瘤病毒瘤病毒 (Human Papillomavirus, HPV) 是乳多空病毒科（Papovaviridae）、乳头瘤病毒属的一个种。 引起人皮肤(p f)、粘膜的增生性病变，临床表现为良性疣或乳头状瘤。 HPV也是尖锐湿疣（condyloma acminatum，CA）的病原体。 某些型别的HPV可使组织发生癌变，引起子宫颈癌等。第一页，共五十八页。细胞朊蛋白 球形，直径52-55 nm，20面体对称，无包膜，环状dsDNA，3个基因区组成 早期区 含有6 个ORFE1、E2基因:与病毒复制转录调控有关E5、E6、E7基因:诱导细胞转

2、化， 晚期区 编码结构蛋白(dnbi)L1和L2 是衣壳的主要蛋白和次要蛋白。 上游调控区 复制起点和调控元件 一）生物学性状一）生物学性状(xngzhung)第二页，共五十八页。细胞朊蛋白 HPV增殖方式独特，与上皮细胞的分化阶段相关，因此(ync)不能在常规组织细胞中培养。 成熟病毒仅在角质细胞中产生，抗原接触免疫系统的机会少，免疫原性低，易形成持续感染。一）生物学性状一）生物学性状(xngzhung)第三页，共五十八页。细胞朊蛋白HPV具有高度的宿主和组织特异性，对人的皮肤和粘膜上皮细胞具有特殊的亲嗜性，在易感细胞核内增殖形成核内嗜酸性包涵体，使感染细胞转变为空泡细胞。HPV不能在实验动

3、物(dngw)中增殖，组织培养也未成功。 一）生物学性状一）生物学性状(xngzhung)培养培养(piyng)特性特性第四页，共五十八页。细胞朊蛋白传播途径传播途径直接接触感染先天感染（产道感染）性感染所致疾病所致疾病不引起病毒血症临床表现多样性与宫颈癌有关二）致病性与免疫性二）致病性与免疫性第五页，共五十八页。细胞朊蛋白扁平疣：扁平疣：常由HPV 3和10型引起。6、11、16、18、31和33等型别为粘膜嗜性HPV，感染泌尿生殖道及口腔(kuqing)。生殖器疣又称尖锐湿疣（生殖器疣又称尖锐湿疣（condylemata acuminata）：）：性传播疾病（STD），主要由HPV-6感染

4、所致，也可由HPV-11引起。 77个血清型，根据感染部位不同可将HPV分为(fn wi)嗜皮肤性和嗜粘膜性两大类，两类之间有一定交叉。 二）致病性与免疫性二）致病性与免疫性第六页，共五十八页。细胞朊蛋白某些型别HPV与一些肛门(gngmn)、生殖器肿瘤发生密切相关。根据HPV的致癌潜力将其分为：高危型：高危型：主要包括HPV 16、18、31、33、45、35、39、51、52和58等型别，其中1616、1818、3333型型与子宫颈癌子宫颈癌发生密切相关；低危型低危型：主要包括HPV6和11型。二）致病性与免疫性二）致病性与免疫性第七页，共五十八页。细胞朊蛋白扁平疣扁平疣尖锐湿疣尖锐湿疣肛

5、周疣肛周疣第八页，共五十八页。细胞朊蛋白三）微生物学三）微生物学(wi shn w xu)(wi shn w xu)检查检查（一）醋酸白试验（二）细胞学检查(jinch) （三）组织病理学检查 （四）核酸分子杂交技术 1. 斑点杂交法 2.原位杂交法 3. DNA印迹法 （五）聚合酶链反应（PCR）第九页，共五十八页。细胞朊蛋白防治：防治：加强教育、严格社会管理(gunl)治疗治疗: 1. 局部敷药，如5% 5-咪奎莫特，5% 5-氟尿嘧啶；25%竹叶脂液。2. 用激光、冷冻、电灼或者手术去除疣；3. 局部注射干扰素。4. 复发应连续或者综合治疗。四）防治四）防治(fngzh)原则原则第十页，

6、共五十八页。细胞朊蛋白第三十一章第三十一章 狂犬病毒狂犬病毒 （Rabies virus） 第十一页，共五十八页。细胞朊蛋白 狂犬病是人畜共患的自然疫原性传染病，目前尚无有效的治疗方法，一旦发病，死亡率近乎100%。 狂犬病病毒狂犬病病毒是一种嗜神经性病毒。属于弹状病毒科弹状病毒科 (Rhabdoviridae)、狂犬病毒属、狂犬病毒属 (Lyssavirus)。 多种野生动物和家畜等可以发生狂犬病病毒的自然感染与传播，并且可以通过(tnggu)咬伤、抓伤或密切接触等形式感染人类而引起狂犬病狂犬病。第十二页，共五十八页。细胞朊蛋白一）生物学性状一）生物学性状(xngzhung)形态形态(xng

7、ti)(xngti)与结与结构构子弹头形状: 一端钝圆，另一端扁平，平均大小为130-300 nm60-85 nm核酸：-ssRNARNA基因组编码5种蛋白(dnbi):3-N, P, M, G, L-5有一层磷脂层包被，包膜上嵌有钉状突起第十三页，共五十八页。细胞朊蛋白在易感动物或人的中枢神经细胞、主要是大脑(dno)海马回的锥体细胞中增殖时，可以在胞质内形成一个或多个、圆形或椭圆形、直径为20-30nm的嗜酸性包涵体，称内基内基小体（小体（Negri body）。培养培养(piyng)(piyng)特性特性一）生物学性状一）生物学性状(xngzhung)第十四页，共五十八页。细胞朊蛋白糖蛋

8、白糖蛋白G: G: 病毒表面，刺激机体(jt)产生中和抗体、血凝抑制抗体和细胞免疫应答；核蛋白核蛋白N N：病毒核心，属特异性抗原，能够以核蛋白(RNP)的形式诱生保护性的细胞免疫应答，但不能刺激机体产生中和抗体。 主要主要(zhyo)(zhyo)抗原抗原一）生物学性状一）生物学性状(xngzhung)第十五页，共五十八页。细胞朊蛋白野毒株（野毒株（wild strain）或街毒株（）或街毒株（street strain）: 从自然感染(gnrn)的动物体内分离到的病毒，潜伏期长，毒力强固定毒株（固定毒株（fixed strain）：）： 将野毒株接种实验动物脑内，并连续传50代以上获得的潜伏

9、期为4-6天的毒株，潜伏期短，毒力弱。变异变异(biny)(biny)一）生物学性状一）生物学性状(xngzhung)第十六页，共五十八页。细胞朊蛋白病毒抵抗力不强。对热敏感(mngn)，60 经30 min或100 2 min即可灭活。易被强酸、强碱、乙醇、乙醚等灭活。肥皂水、离子型或非离子型去垢剂亦有灭活作用。抵抗力抵抗力一）生物学性状一）生物学性状(xngzhung)第十七页，共五十八页。细胞朊蛋白主要是病犬（80-90%），其次是由猫和狼。发达国家的野生动物如狐狸、食血蝙蝠、臭鼬和浣熊等逐渐成为重要传染源。隐性感染的犬、猫等动物亦有传染性。患病动物唾液中含有(hn yu)大量的病毒，于

10、发病前5d即具有传染性传染源传染源二）致病性与免疫性二）致病性与免疫性 第十八页，共五十八页。细胞朊蛋白病毒主要通过(tnggu)被咬伤、抓伤的皮肤损伤处进入人体。粘膜也是病毒的侵入门户，如患病动物的唾液污染眼结膜等，也可发病。 传播传播(chunb)(chunb)途径途径 二）致病性与免疫性二）致病性与免疫性 第十九页，共五十八页。细胞朊蛋白狂犬病的传播狂犬病的传播(chunb)动物狂犬病1- 野生动物2- 家畜动物人类狂犬病野生食肉动物翼手目动物 狐狸、臭鼬、獾、狼吸血蝙蝠食果类C.S.食虫类 家畜型食肉动物家畜型 食草动物狗猫牛绵羊山羊人类 人类第二十页，共五十八页。细胞朊蛋白发病发病(

11、f bng)(f bng)机机制制 人被病犬咬伤病毒随犬唾液经伤口进入人体（病毒在入侵部位的肌细胞中增殖）通过神经(shnjng)肌肉接头侵入外周神经(shnjng)细胞-细胞间传递形式神经节直至中枢神经系统（脑组织中病毒迅速增殖扩散）沿传出神经传至唾液腺及其他组织。二）致病性与免疫性二）致病性与免疫性 第二十一页，共五十八页。细胞朊蛋白laboratory diagnosis dogs and cats in a rabies endemic area should beheld for 10 days for observation Histopathology : Negri bodie

12、s Rapid virus antigen detection therapywound treatment passive immunization horse anti-rabies serum human rabies immune globulin active immunization :inactivated vaccine第二十二页，共五十八页。细胞朊蛋白犬患狂犬病按症状分为狂暴型和麻痹型两种：狂暴型分前驱期、兴奋期、麻痹期；麻痹型病犬以麻痹症状为主，兴奋期极短或无。犬狂犬病整个(zhngg)病程不超过5-6 d。病猫以狂暴型为多，病程较短，症状与犬相似。因其与人接触密切，咬伤人

13、的危险性甚大。二）致病性与免疫性二）致病性与免疫性 第二十三页，共五十八页。细胞朊蛋白前驱期前驱期 发热、头痛、乏力、周身不适等症状，对痛、声、光等刺激(cj)较敏感，并有咽喉紧缩感。约5080%病人伤口部位及其附近有麻木或蚊走感；兴奋期或痉挛期兴奋期或痉挛期 处于兴奋状态，如极度恐惧、烦燥，对水声、风等刺激非常敏感，易于引起发作性咽肌痉挛、呼吸困难等。部分患者出现特殊的恐水症状，在饮水、见水、流水声或谈及饮水时，可引起严重咽喉肌痉挛，称为“恐水症恐水症”（hydrophobia）。）。随后，部分病人出现精神失常、定向力障碍、幻觉、谵妄等。病程进展很快；麻痹期麻痹期 痉挛减少或停止，出现弛缓性

14、瘫痪，神志不清，最终因呼吸麻痹和循环衰竭而死亡。 二）致病性与免疫性二）致病性与免疫性 典型典型(dinxng)(dinxng)临床表现临床表现第二十四页，共五十八页。细胞朊蛋白体液免疫：体液免疫：感染后机体产生中和抗体。有中和游离(yul)状态的病毒、阻断病毒进入神经细胞内的作用。细胞免疫：细胞免疫：杀伤性T淋巴细胞特异性地作用于病毒的蛋白抗原，引起病毒溶解；单核细胞产生的IFN和IL-2具有抑制病毒复制和抵抗病毒攻击的作用。免疫性免疫性二）致病性与免疫性二）致病性与免疫性 第二十五页，共五十八页。细胞朊蛋白( (一一 ) )标本直接检查标本直接检查(jinch)(jinch) 1 1显微镜

15、检查内基小体内基小体 2. 2. 抗原检查抗原检查 （1）免疫荧光法 （2）免疫酶法 （3）斑点免疫结合法（DIA） 3核酸检测：核酸检测：用RT-PCR法检测标本中狂犬病病毒RNA。三）微生物学三）微生物学(wi shn w xu)检查法检查法 （二）分离培养（二）分离培养 （三）抗体检测（三）抗体检测 （四）捕捉（四）捕捉(bzhu)动物观察动物观察 第二十六页，共五十八页。细胞朊蛋白捕捉消灭野犬，加强家犬的管理和普及接种犬用狂犬疫苗是预防狂犬病的重要措施。人被患病动物咬伤、抓伤或其他带毒的实验用具伤害皮肤和肌肉(jru)时，应采取妥善处理伤口和特异性防治相结合的措施。四）防治四）防治(f

16、ngzh)原原则则 第二十七页，共五十八页。细胞朊蛋白伤口处理伤口处理立即用20%肥皂水、清水充分冲洗数分钟，然后用5%碘酒烧灼伤口。若伤口过深，可作清创术。再用3%H2O2溶液，0.1%高锰酸钾或0.1%新洁尔灭处理。最后伤口周围用抗狂犬病病毒免疫(miny)球蛋白作浸润性注射。剂量为40 IU/kg。四）防治四）防治(fngzh)原原则则 第二十八页，共五十八页。细胞朊蛋白预防接种预防接种 接种狂犬疫苗是预防发病的重要措施。即所谓的预防性治疗。由于狂犬病的潜伏期长，从被咬伤到发病一般经过几十天或几个月，在此期间尽早接种疫苗可免于发病。严重咬伤者，除应给予高效价免疫血清进行被动免疫外，仍需要

17、(xyo)接种狂犬疫苗，可收到更佳效果。四）防治四）防治(fngzh)原原则则 第二十九页，共五十八页。细胞朊蛋白第三十二章第三十二章 朊粒（朊粒（prion） 传染性蛋白粒子 (proteinaceous infectious particle)个体微小(300 nm)，不含核酸，构象(u xin)异常的蛋白酶抗性蛋白蛋白，称为朊蛋白(PrP)。 对各种理化作用的抵抗力强，具有传染性。传染性海绵状脑病(transmissible spongiform encephalopathies, TSEs)的病原体。第三十页，共五十八页。细胞朊蛋白是一种不含核酸和脂类的疏水性(shuxng)糖蛋白。

18、细胞朊蛋白细胞朊蛋白(cellular isoform of PrP, PrPC)： 正常人和动物的神经细胞编码的一种糖基化膜蛋白，分子量为33-35103，称为PrP33-35，命名PrPC，它对蛋白酶、去污剂敏感。羊瘙痒病朊蛋白羊瘙痒病朊蛋白(scrapie isoform of PrP, PrPSC)： 分子量为27-30103，称为PrP27-30，能抵抗蛋白酶的消化作用。 PrPC和PrPSC的一级结构完全相同，但其空间结构不同一）生物学性状一）生物学性状(xngzhung)第三十一页，共五十八页。细胞朊蛋白第三十二页，共五十八页。细胞朊蛋白PrPcPrPsc分子构型分子构型 4个-

19、螺旋， 无折叠 2个-螺旋 4个折叠对蛋白酶对蛋白酶K抗性抗性敏感抗性存在存在正常及感染动物感染动物致病性致病性无害具致病性与传染性 PrPc和和PrPsc主要主要(zhyo)区区别别第三十三页，共五十八页。细胞朊蛋白对理化因素的抵抗力强对甲醛、乙醇、蛋白酶和放射性核素等具有抵抗力消毒(xio d)常用5%次氯酸钠或2 mol/L的氢氧化钠浸泡手术器械2 h，高压灭菌需用202 kPa、134 处理1 h，以彻底灭活朊粒一）生物学性状一）生物学性状(xngzhung)抵抗力抵抗力第三十四页，共五十八页。细胞朊蛋白共同特征：共同特征：潜伏期长（可达数年至数十年之久）一旦发病即呈慢性进行性发展，最

20、终死亡。病理特点病理特点：朊粒致中枢神经系统退化性病变，大脑和小脑的神经细胞融合、消失，形成多数小空泡并伴有星状胶质细胞增生(zngshng)，出现海绵状改变为特征，病变部位无炎症反应，而是由朊粒蛋白（PrP）大量堆积在神经组织里，形成淀粉样斑块二）致病性与免疫性二）致病性与免疫性第三十五页，共五十八页。细胞朊蛋白 脑组织海绵样改变脑组织海绵样改变(gibin)，空泡形成，空泡形成第三十六页，共五十八页。细胞朊蛋白临床表现临床表现：痴呆、共济失调、震颤等中枢神经系统(xtng)症状。致病机制：致病机制：未明。目前认为，PrPC转变为PrPSC是疾病发生的基本条件，PrPSC在中枢神经系统细胞内

21、聚集而导致疾病的发生。二）致病性与免疫性二）致病性与免疫性第三十七页，共五十八页。细胞朊蛋白动物动物prion病病 人类人类prion病病 羊瘙痒病(scrapie of sheep and goat) 库鲁病(Kuru disease) 水貂传染性脑病(transmissible mink encephalopathy,TMM) 克-雅病(Creutzfeld-Jakob disease, CJD) 鹿慢性退行性变(chronic wasting disease of deer, CWD) 格斯特曼综合征(Grestmann-Straussler Syndrome,GSS) 牛海绵状脑病(b

22、ovine spongiform encephalopathy, BSE) 致死性家庭失眠症(fatal familial insomnia,FFI) 猫海绵状脑病(feline spongiform encephalopathy, FSE) 克-雅病变种(variant CJD, v-CJD) 人和动物人和动物(dngw)prion病病 第三十八页，共五十八页。细胞朊蛋白第三十九页，共五十八页。细胞朊蛋白在欧洲已流行了近300年（第一个被发现的TSE）,感染动物表现为消瘦、步态不稳、脱毛、麻痹等，因病羊由于(yuy)瘙痒而常在围栏上摩擦身体而得名，病死率极高。1. 羊瘙痒羊瘙痒(soyng)

23、病病(scrapie of sheep and goat)第四十页，共五十八页。细胞朊蛋白俗称疯牛病(mad cow disease)，1986年首次在英国报道。该病潜伏期4-5 y，发病初期表现为体质变差，体重减轻，产奶量下降等非特异性症状。随后神经系统症状逐步(zhb)明显，出现运动失调、震颤等，由于病牛常表现出感觉过敏、恐惧甚至狂乱，因此俗称“疯牛病”。 2. 牛海绵状脑病牛海绵状脑病(bovine spongiform encephalopathy, BSE)第四十一页，共五十八页。细胞朊蛋白3. 颤抖颤抖(chndu)病病（Kuru Disease） 病人小脑受损，产生共济失调和震颤

24、。“Kuru”一词是当地方言，用来形容本病颤抖和跳动的特征 Kuru病的潜伏期为5-30年，早期症状(zhngzhung)为运动失调、颤抖，晚期出现痴呆。病程一般不超过1年，大多在6-9个月内死亡 当地有宗教性食尸恶习，这是感染本病的原因第四十二页，共五十八页。细胞朊蛋白Kuru disease第四十三页，共五十八页。细胞朊蛋白4. 克雅病（克雅病（CJD) 又称传染性痴呆病或早老性痴呆病，是一种致命性人海绵状脑病 潜伏期可达数十年，开始出现精神、感觉方面的症状，随后出现运动失调，晚期出现肌肉痉挛并伴有痴呆，多在5-12个月内死亡 现已证实此病是由朊粒蛋白PrPSC大量沉积在神经组织里，形成淀

25、粉(dinfn)样斑块，引起致死性中枢神经系统慢性退化性疾病第四十四页，共五十八页。细胞朊蛋白有传染(chunrn)型、家族遗传型和散发型等三型传染型：传染型：占10%，主要由医源性传播，如角膜移植和硬脑膜移植等，或使用污染的手术器械，或使用人垂体制备的生长激素等，多于手术后18个月发病家族遗传型：家族遗传型：占10-15%，GSS综合征:主要临床特征是小脑运动失调，眼球震颤和步态异常，后期出现痴呆；致死性家族性失眠:是一种特别罕见的遗传性失调，临床特点是睡眠紊乱与智力下降散发型散发型：最为常见，占75-80%第四十五页，共五十八页。细胞朊蛋白一种新型的人类传染性海绵状脑病，1996年由英国C

26、JD监测中心首次报导。本病与典型的CJD在好发年龄、临床特征、脑电图和病理等方面有明显(mngxin)变化，因此被认为是新变种(new variant CJD,v-CJD)。5. 克克-雅病变雅病变(bngbin)种种(variant CJD, v-CJD)第四十六页，共五十八页。细胞朊蛋白1.免疫组化技术免疫组化技术 是目前确认TSE的有效手段。2.免疫印迹技术免疫印迹技术 蛋白印迹(Western blotting)检测PrPSC是一种简单而敏感的诊断(zhndun)方法。 3.基因分析基因分析 从病人外周血白细胞中提取DNA，对20号染色体prion基因进行分子遗传学分析，可协助诊断家族

27、性CJD患者。 三）微生物学三）微生物学(wi shn w xu)检检查法查法 第四十七页，共五十八页。细胞朊蛋白朊粒感染所致疾病目前均无治疗方法应及早建立长期监督、监测和报道疫情的机构，采取有效措施(cush)，杜绝PrP的传入和扩散杜绝医源性感染：患者和任何退行性神经系统疾病患者的器官移植禁止用任何动物脏器加工成牛或其他动物的饲料，加强进口牛、羊制品和饲料的检疫强化消毒：由于朊粒对理化因子的抵抗力强，高压灭菌时需134，处理1小时，手术器械如需化学消毒时选用有效制剂（如5%次氯酸钠等）浸泡1小时以上 四）防治四）防治(fngzh)原原则则第四十八页，共五十八页。细胞朊蛋白性传播疾病(sexually transmitted disease, STD)：通过(tnggu)性行为引起流行的传染病。淋球菌-淋病，HSV-2-生殖器疱疹， HIV-AIDS，HPV-尖锐湿疣，溶脲脲原体、沙眼衣原体-非淋菌性尿道炎，梅毒螺旋体-梅毒可引起可引起(ynq)性传播疾病的微生性传播疾病的微生物物第四十九页，共五十八页。细胞朊蛋白结核(jih)分枝杆菌、链球菌属（链球菌、肺炎链球菌）、脑膜炎奈瑟菌流行性感冒病毒、麻疹病毒、冠状病毒和SARS冠状病毒肺炎支原体其它：白喉棒状杆菌、百日咳鲍特菌、军团菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、副流感病毒、水痘-带状疱疹病毒、风