第2章-实验室无菌操作技术(1)--0911

1、第第2章章 实验室无菌操作技术实验室无菌操作技术 植物离体培养实验室的基本要求和设备植物离体培养实验室的基本要求和设备 基本方法和技术基本方法和技术 植物离体培养的一般过程植物离体培养的一般过程2.1 实验室的基本组成实验室的基本组成2.2 常用的仪器设备常用的仪器设备2.4 培养基的基本成分和作用培养基的基本成分和作用2.5 培养基制备的一般程序培养基制备的一般程序2.3 器皿、用具的洗涤、消毒和灭菌器皿、用具的洗涤、消毒和灭菌2.6 植物离体培养的一般过程植物离体培养的一般过程 What are the space, equipment, and chemical requirements

2、 of an efficient Tissue Culture Operation? 2.1 实验室的基本组成实验室的基本组成 Laboratory organization 细胞工程实验室的基本要求：细胞工程实验室的基本要求： 植物材料必须始终生长在植物材料必须始终生长在无菌条件无菌条件与与可控环境可控环境中；可以根据实验目的进行其中；可以根据实验目的进行其它它观察观察、分析分析和和操作操作。实验准备实验准备无菌操作无菌操作控制培养控制培养 Media preparation area Storage space (clean glassware) Washing area (dirty g

3、lassware) Transfer room (with Laminar Flow Hood) Growth room with temperature and photoperiod control基本实验室基本实验室l 准备室准备室/化学实验室化学实验室l 接种室接种室l 培养室培养室辅助实验室辅助实验室l 细胞学实验室细胞学实验室l 炼苗室炼苗室l 温室温室 1. 化学实验室化学实验室(基本操作室、准备室基本操作室、准备室) 功能：功能：洗涤、灭菌、培养基配制、植物材料的预处洗涤、灭菌、培养基配制、植物材料的预处理、制备重蒸馏水、进行生理、生化因素的分析，存理、制备重蒸馏水、进行生理、

4、生化因素的分析，存放药品等。放药品等。 要求要求：宽敞明亮，通风条件好，地面便于清理并应：宽敞明亮，通风条件好，地面便于清理并应防滑处理。防滑处理。 需要设备：需要设备：实验台、水池实验台、水池、试剂柜、冰箱、烘箱、试剂柜、冰箱、烘箱、天平、灭菌锅、电磁炉、微波炉、水浴锅、酸度计、天平、灭菌锅、电磁炉、微波炉、水浴锅、酸度计、蒸馏水器、磁力搅拌器、台式离心机、显微镜等，以蒸馏水器、磁力搅拌器、台式离心机、显微镜等，以及常用玻璃、塑料器皿。及常用玻璃、塑料器皿。灭灭 菌菌 锅（湿热灭菌器）锅（湿热灭菌器） 2. 无菌操作室无菌操作室 (1) 缓冲准备室缓冲准备室 面积约面积约35m2，进入无菌室

5、前需在缓冲室里，进入无菌室前需在缓冲室里换上经过灭菌的卫生服、拖鞋，戴上口罩。最好换上经过灭菌的卫生服、拖鞋，戴上口罩。最好安装安装1盏紫外灯，用以灭菌。盏紫外灯，用以灭菌。(2) 接种室接种室 功能：功能：是进行无菌工作的场所，如材料的灭菌接是进行无菌工作的场所，如材料的灭菌接种，无菌材料的培养、继代等，种，无菌材料的培养、继代等， 是植物组织培养研是植物组织培养研究或生产工作中最关键的部分究或生产工作中最关键的部分。 要求：要求：封闭性好，干爽安静、清洁明亮、墙壁封闭性好，干爽安静、清洁明亮、墙壁光滑平整不易积染灰尘，地面平坦无缝便于清洗和光滑平整不易积染灰尘，地面平坦无缝便于清洗和灭菌。

6、灭菌。 需要：需要： 紫外灯、屋顶的抽气过滤器、超净工作紫外灯、屋顶的抽气过滤器、超净工作台（接种箱）、接种器具、小型喷雾器台（接种箱）、接种器具、小型喷雾器 3. 培养室培养室功能功能：对植物离体材料进行人工调控培养。：对植物离体材料进行人工调控培养。 培养室的特殊要求：培养室的特殊要求： 首先要保证无菌、保持室内清洁、温度首先要保证无菌、保持室内清洁、温度 2030 C ，有加热、制冷等控温设备、有保暖窗，有加热、制冷等控温设备、有保暖窗帘、有空气调节装置促进空气流动、控制实内相帘、有空气调节装置促进空气流动、控制实内相对湿度对湿度7080%、可以控制定时开关照明灯、可、可以控制定时开关照

7、明灯、可以利用自然灯光照明以利用自然灯光照明.基本设备基本设备：控温、控湿、定时照明设备，培：控温、控湿、定时照明设备，培养架、摇床或转床等养架、摇床或转床等 4. 细胞学实验室：细胞学实验室： 功能：功能：分析、观察、记录离体培养物的生长分析、观察、记录离体培养物的生长情况。情况。 需要：需要： 普通光学显微镜、实体解剖显微镜、普通光学显微镜、实体解剖显微镜、倒倒 置显微镜、荧光显微镜、血球计数器、切片置显微镜、荧光显微镜、血球计数器、切片机等。机等。 5. 炼苗室：炼苗室： 功能：功能：从试管苗向温室植株的过渡，驯化从试管苗向温室植株的过渡，驯化 需要：需要：各种育苗移栽器具，控温、高湿、

8、控制各种育苗移栽器具，控温、高湿、控制光照光照 6. 温室：温室： 功能：功能：从炼苗室向大田植株移栽的过渡从炼苗室向大田植株移栽的过渡 需要：需要：各种栽植器具、日光温室各种栽植器具、日光温室Donor plant cultivation Acclimation（驯化）（驯化） and establishment of regenerates to ambient（环境的）（环境的） conditionsopen-roof greenhouse 2.2 配制培养基所用器皿配制培养基所用器皿 接种、培养器皿接种、培养器皿 生理、生化、细胞学分析测试必备仪器生理、生化、细胞学分析测试必备仪器 炼

9、苗、移栽器具炼苗、移栽器具Media preparation areaCulture medium Desk centrifugeChemical bench Reagent and stock solutions pH meter Shelf ( shelves)Balances ( analytical and top-loading balances)Fridge and freezer Magnetic stirrerWater purification Glassware Pipette（移液器、枪）（移液器、枪）Aluminmum foil rollTest tubeCulture

10、 vessels Autoclave Steam sterilization Dry sterilizationHot-air ovens DishwashersHot plate Parafilm rollWater squeeze bottlePetri dishes (培养皿）培养皿）Volumetric flasks （容量瓶）（容量瓶）Graduated cylinders （量筒）（量筒） Beakers （烧杯）（烧杯）高压灭菌器高压灭菌器Autoclave高高压压灭灭菌菌锅锅手手提提式式高高压压灭灭菌菌锅锅如如何何正正确确使使用？用？微微 波波 炉炉电子天平电子天平恒温培养箱恒

11、温培养箱真空干燥器（烘箱）真空干燥器（烘箱） 烘烘 箱箱(电热箱）电热箱）如何正确使用？如何正确使用？纯水系统纯水系统电穿孔系统电穿孔系统电融合仪电融合仪纯纯 水水 器器手持式基因枪手持式基因枪固定式基因枪固定式基因枪台式高速冷冻离心机台式高速冷冻离心机PCR 仪仪制冰机制冰机超低温冰箱超低温冰箱 酸酸 度度 计计手手 持持 酸酸 度度 计计 微量移液枪微量移液枪分注器分注器培培 养养 器器 皿皿Culture vesselsPetri dishesCulture bottles封口膜、棉绳、棉塞，塑料透气盖封口膜、棉绳、棉塞，塑料透气盖 磁力搅拌器磁力搅拌器冷冻干燥机冷冻干燥机酶酶 标标 仪

12、仪电动显微操作仪电动显微操作仪各种显微镜用于细胞学观察各种显微镜用于细胞学观察双筒实体显微镜双筒实体显微镜 （实体解剖镜）（实体解剖镜） 普通光学显微镜普通光学显微镜倒置显微镜倒置显微镜荧光显微镜荧光显微镜（血球计数器）（血球计数器）倒置显微镜倒置显微镜体视显微镜体视显微镜(解剖镜）解剖镜） 生物显微镜生物显微镜 荧光显微镜荧光显微镜Aseptic transfer area（room）Laminar air flow transfer hood ( Laminar flow cabinet)UV lampForceps , Spatulas, Scalpel（镊子、药匙、解剖刀）（镊子、药匙

13、、解剖刀）A book of matches Pipette filler (吸耳球）吸耳球）超净工作台超净工作台如如何何正正确确使使用？用？风淋室风淋室 风淋室是净化厂房配风淋室是净化厂房配套设备，用于吹除进入套设备，用于吹除进入厂房的工作人员身体及厂房的工作人员身体及携带物品和货物表面附携带物品和货物表面附着的尘埃，同时起到气着的尘埃，同时起到气闸作用，是防止未净化闸作用，是防止未净化的空气进入到净化厂房的空气进入到净化厂房的有效设备。其操作简的有效设备。其操作简单，检修方便，运行费单，检修方便，运行费用低。用低。 活性炭口罩活性炭口罩联体式接种服联体式接种服针筒式微孔溶剂滤膜针筒式微孔溶

14、剂滤膜过滤器过滤器 中型离心过滤器中型离心过滤器 无菌微孔过滤器无菌微孔过滤器 微型离心过滤器微型离心过滤器 无菌微孔过滤器无菌微孔过滤器 在过滤器的漏斗和接收瓶之间安装在过滤器的漏斗和接收瓶之间安装孔径为孔径为0.45m或或0.22m的微孔滤膜的微孔滤膜（millipore filter membrane）不锈钢酒精灯不锈钢酒精灯兰花专用兰花专用30cm直形镊子直形镊子1， 由进口全不锈钢制造；由进口全不锈钢制造；2， 可以整体高压灭菌或用消毒药剂浸泡，耐可以整体高压灭菌或用消毒药剂浸泡，耐腐蚀性强；腐蚀性强；3， 耐冲击，不会受温度影响而炸裂烫伤操作耐冲击，不会受温度影响而炸裂烫伤操作人员，安全可靠；人员，安全可靠；4， 专利技术的硬质灯芯，不需要更换灯芯；专利技术的硬质灯芯，不需要更换灯芯；5， 酒精灯整体高度低、底部宽大，从而杜绝酒精灯整体高度低、底部宽大，从而杜绝因酒精倾倒溢出而造成的严重事故。因酒精倾倒溢出而造成的严重事故。6， 酒精加注口为螺纹设计，直径大，灌装安酒精加注口为螺纹设计，直径大，灌装安全、简便。全、简便。电热灭菌器电热灭菌器Environmentally controlled culture area Shelves with lighting on a timer and contro