免疫学2223免疫诊断与防治

1、抗原抗体反应的特异性抗原抗体反应的特异性抗原抗体反应的可逆性抗原抗体反应的可逆性抗原抗体反应的可见性抗原抗体反应的可见性抗原抗体比例合适出现肉眼可见抗原抗体比例合适出现肉眼可见ICIC 凝集物，沉淀物凝集物，沉淀物受温度、受温度、PHPH、电解质影响、电解质影响 抗 原 抗 体 复 合 物 的 形 成抗原多于抗体 抗原与抗体数量相当抗原少于抗体1.1.凝集反应凝集反应l 概念：颗粒性抗原（细菌或细胞等）与相概念：颗粒性抗原（细菌或细胞等）与相应抗体结合在一定条件下，出现肉眼可见的应抗体结合在一定条件下，出现肉眼可见的凝集物。凝集物。 l 类型：类型： 直接凝集反应直接凝集反应 间接凝集反应间接

2、凝集反应直接凝集反应直接凝集反应玻片法：玻片法：定性，已知抗体测未知抗原定性，已知抗体测未知抗原 细菌的鉴定和分型细菌的鉴定和分型 人类人类ABO血型测定血型测定试管法：试管法：定量，用已知抗原测未知抗体的量定量，用已知抗原测未知抗体的量 肥达氏试验肥达氏试验-诊断伤寒和付伤寒诊断伤寒和付伤寒抗原抗原抗原抗体抗体抗原抗原抗原颗粒抗原颗粒抗原凝集颗粒凝集颗粒间接凝集反应间接凝集反应可溶性抗原可溶性抗原 载体颗粒载体颗粒 免疫微球免疫微球 （致敏载体）（致敏载体） 抗体抗体凝集凝集 可溶性抗原先吸附在一与免疫反应无关的颗粒载体上，可溶性抗原先吸附在一与免疫反应无关的颗粒载体上，成为致敏颗粒，再与相

3、应抗体结合，出现的凝集现象成为致敏颗粒，再与相应抗体结合，出现的凝集现象. .2.2.沉淀反应沉淀反应 概念：可溶性抗原与相应抗体结合，在概念：可溶性抗原与相应抗体结合，在 一定条件下形成沉淀物的现象一定条件下形成沉淀物的现象. . 可溶性抗原：血清蛋白、外毒素、组织浸出可溶性抗原：血清蛋白、外毒素、组织浸出 液、细菌滤液等液、细菌滤液等. . 类型：类型： 1 1）单向琼脂扩散试验）单向琼脂扩散试验 2 2）双向琼脂扩散试验）双向琼脂扩散试验 用于血清中IgM、 IgG、IgA、补体C3等含量的测定.双向琼脂扩散试验双向琼脂扩散试验3. 3. 免疫标记技术免疫标记技术l将已知的抗体或抗原标记

4、上将已知的抗体或抗原标记上荧光素荧光素、酶、放射性核酶、放射性核素素等示踪物质，通过检测标记物，测定抗体或抗原等示踪物质，通过检测标记物，测定抗体或抗原的方法。的方法。l常用标记技术：常用标记技术： 1 1）免疫酶测定）免疫酶测定(enzyme immunoassay, EIA)(enzyme immunoassay, EIA) 酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验(ELISA(ELISA） 2 2）免疫荧光技术）免疫荧光技术(immunofluorescence technique)(immunofluorescence technique) 3 3）放射免疫测定法）放射免疫测定法(radioi

5、mmunoassay, RIA)(radioimmunoassay, RIA) 4 4）化学发光物质等）化学发光物质等酶免疫测定酶免疫测定用酶标记抗体进行的抗原抗体反应，通过酶用酶标记抗体进行的抗原抗体反应，通过酶作用于底物后显色来判断结果。作用于底物后显色来判断结果。 抗原抗体反应酶促反应抗原抗体反应酶促反应酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay, enzyme-linked immunosorbent assay, ELISAELISA）将已知抗原或抗体吸附在固相载体表面，再用酶将已知抗原或抗体吸附在固相载体表面，再用酶标抗体进

6、行检测的抗原抗体反应。标抗体进行检测的抗原抗体反应。特点：敏感性高（特点：敏感性高（ng-pgng-pg），操作简便），操作简便类型：直接法类型：直接法( (双抗体夹心法双抗体夹心法):Ab +Ag + Ab):Ab +Ag + Ab* * 间接法间接法:Ag +Ab + :Ag +Ab + 抗抗AbAb* * 双抗体夹心法放射免疫测定法放射免疫测定法(radioimmunoassay,RIA)l原理：用放射性核素标记抗原或抗体进行免疫原理：用放射性核素标记抗原或抗体进行免疫学检测的技术学检测的技术l常用放射性核素：常用放射性核素：125125I I、131131I Il应用：测定血清、尿液等

7、液体中的微量抗原或应用：测定血清、尿液等液体中的微量抗原或半抗原物资，如激素、药物等。半抗原物资，如激素、药物等。 敏感性很高，应用广泛。敏感性很高，应用广泛。放射免疫检测法（放射免疫检测法（RIARIA）竞争法竞争法免疫印迹法免疫印迹法Western blotting病毒浸于固相载体大小不同的蛋白电 泳裂 解将各蛋白分开待检血清转 印加底 物洗 涤酶标二抗观察结果l免疫细胞的分离免疫细胞的分离l免疫细胞的功能测定免疫细胞的功能测定一、免疫细胞的分离一、免疫细胞的分离l外周血单个核细胞（外周血单个核细胞（PBMCPBMC）的分离）的分离淋巴细胞分离：葡聚糖淋巴细胞分离：葡聚糖- -泛影葡胺密度

8、梯度离心法泛影葡胺密度梯度离心法单核细胞单核细胞淋巴细胞淋巴细胞流式细胞术流式细胞术抗原肽抗原肽-MHC-MHC分子四聚体技分子四聚体技术术检测特异性检测特异性TCRTCR抗原特异性抗原特异性T T细胞检测细胞检测链霉亲合素荧光素生物素MHC分子抗原肽 T T细胞功能检测：细胞功能检测：T T细胞增殖试验：细胞增殖试验：淋巴细胞转化试验有形态计数法、淋巴细胞转化试验有形态计数法、MTTMTT法法和同位素法三种和同位素法三种 细胞毒试验：细胞毒试验：5151CrCr释放法、凋亡细胞检查法等释放法、凋亡细胞检查法等细胞因子检测：细胞因子检测：生物活性测定法等生物活性测定法等 皮肤试验（体内法）：皮

9、肤试验（体内法）：OTOT试验试验免疫细胞功能的测定免疫细胞功能的测定结核菌素结核菌素注射受试者前臂内侧皮内注射受试者前臂内侧皮内红肿硬结红肿硬结0.5cm阳性阳性观察局部超敏反应观察局部超敏反应24244848小时后小时后无红肿硬结无红肿硬结或或0.5cm阴性阴性l原理：原理：型超敏反应型超敏反应l步骤：步骤： 皮肤试验（结核菌素试验）皮肤试验（结核菌素试验）OT试验试验B B细胞功能测定细胞功能测定 (1) (1) 单向琼脂扩散试验等测定单向琼脂扩散试验等测定IgIg的含量的含量 (2) (2) 抗体形成细胞测定抗体形成细胞测定 溶血空斑形成试验溶血空斑形成试验 19791979年年101

10、0月月2626日日WHOWHO宣布全球宣布全球“天花天花”已绝迹已绝迹这是医学史上的里程碑这是医学史上的里程碑人工主动免疫人工主动免疫 输入输入抗原物质抗原物质（疫苗，类毒素（疫苗，类毒素) )，主动刺主动刺激机体免疫系统产生免疫应答激机体免疫系统产生免疫应答，获得特异获得特异性免疫力的方法。性免疫力的方法。作用作用: : 预防或治疗预防或治疗慢、持久慢、持久人工被动免疫人工被动免疫（Artificial passive immunization） 输入免疫效应物质（输入免疫效应物质（抗体等抗体等），），使机体使机体被动被动立即立即获得短期获得短期特异免疫力特异免疫力的方法。的方法。快、短暂快

11、、短暂应用：紧急预防或治疗，应用：紧急预防或治疗，抗毒素、抗毒素、 人免疫球蛋人免疫球蛋 白制剂、单克隆抗体白制剂、单克隆抗体主动免疫主动免疫被动免疫被动免疫 灭活疫苗灭活疫苗 减毒活疫苗减毒活疫苗 类毒素类毒素病原体灭活病原体灭活减毒活病原体减毒活病原体细菌外毒素脱毒而得细菌外毒素脱毒而得疫苗的基本要求：疫苗的基本要求：安全性；有效性；实用性安全性；有效性；实用性v亚单位疫苗：提取病原体有效的免疫原成分制亚单位疫苗：提取病原体有效的免疫原成分制成的疫苗。霍乱亚单位疫苗成的疫苗。霍乱亚单位疫苗v合成肽疫苗：用人工合成多肽抗原连接适当载合成肽疫苗：用人工合成多肽抗原连接适当载体与佐剂制成的疫苗。

12、体与佐剂制成的疫苗。 猪口蹄疫合成肽疫苗猪口蹄疫合成肽疫苗v基因工程疫苗：利用基因工程疫苗：利用DNADNA重组技术制备的只含保重组技术制备的只含保护性抗原的纯化疫苗。护性抗原的纯化疫苗。HBsAgHBsAg疫苗疫苗 vDNADNA重组疫苗：将编码病原体免疫原的基因与细重组疫苗：将编码病原体免疫原的基因与细菌质粒构建重组体称为菌质粒构建重组体称为DNADNA疫苗，可直接免疫机疫苗，可直接免疫机体。体。v转基因植物疫苗：将编码有效免疫原的基因导转基因植物疫苗：将编码有效免疫原的基因导入可食用植物细胞的基因组中，免疫原可在植入可食用植物细胞的基因组中，免疫原可在植物中稳定的表达和积累，人类和动物通

13、过食入物中稳定的表达和积累，人类和动物通过食入该植物达到免疫接种的目的。该植物达到免疫接种的目的。预防性疫苗：按照规定的免疫程序有计预防性疫苗：按照规定的免疫程序有计划地对人群进行预防接种，提高人群免疫划地对人群进行预防接种，提高人群免疫水平，预防传染病。水平，预防传染病。治疗性疫苗：治疗性疫苗：出出生生1月月龄龄2月月龄龄3月月龄龄4月月龄龄5月月龄龄6月月龄龄8月龄月龄18月月龄龄18-24月龄月龄2周周岁岁3周岁周岁4周岁周岁6周周岁岁乙肝疫苗乙肝疫苗 卡介苗卡介苗脊灰疫苗脊灰疫苗百白破百白破白破疫苗白破疫苗麻风疫苗麻风疫苗麻腮风麻腮风乙脑减毒乙脑减毒A群流脑群流脑A-C群流群流脑脑甲肝

14、疫苗甲肝疫苗特异性免疫特异性免疫自然免疫自然免疫人工免疫人工免疫自然被动免疫自然被动免疫自然主动免疫自然主动免疫来自母亲的抗体来自母亲的抗体自然感染自然感染（隐性、显性）（隐性、显性）人工被动免疫人工被动免疫抗毒素抗毒素免疫球蛋白免疫球蛋白人工主动免疫人工主动免疫疫苗疫苗类毒素类毒素 SIgAIgG第二节第二节 免疫治疗免疫治疗l 利用免疫学原理，针对疾病的发生机利用免疫学原理，针对疾病的发生机 制，人为地调整机体的免疫功能，以达制，人为地调整机体的免疫功能，以达 到治疗目的。到治疗目的。 l分子疫苗合成肽疫苗、重组载体疫苗、分子疫苗合成肽疫苗、重组载体疫苗、DNADNA疫苗疫苗. .包括肿瘤抗原和微生物抗原疫苗包括肿瘤抗原和微生物抗原疫苗l抗体免疫血清；单克隆抗体；基因工程抗体抗体免疫血清；单克隆抗体；基因工程抗体. .l细胞因子重组细胞因子；细胞因子拮抗疗法细胞因子重组细胞因子；细胞因子拮抗疗法. .l细胞疫苗肿瘤细胞疫苗、基因修饰的瘤细胞疫苗肿瘤细胞疫苗、基因修饰的瘤苗、苗、DCDC疫苗等。疫苗等。l过继免疫过继免疫LAKLAKl干细胞移植分离骨髓、外周血、脐血